血尿脑脊液葡萄糖Glucose测定医院

1、血、尿、脑脊液葡萄糖（ Glucose ）测定1. 实 验 原 理Vitros GLU 试 剂是一 种干燥 ，多涂 层的 ，在透 明的聚 合物支撑基 片上涂 有分析成份的化学干片。将 一滴 10ul 的患者样品滴于干片上，分 布层会使之 均匀地分布并使溶解的分子渗透到下面的试剂层。于是葡萄糖氧化酶氧化样 品中的葡萄糖，生成过氧化氢和葡萄糖酸，随后过氧化酶催化染料前体生成 呈色剂。呈色剂的强度可用反射光谱法测定。测定方式： 比 色法 波长 ： 540 nm测试时间和温度：37 C约5分钟反应过程：3 -D-葡萄糖+氧气+水葡萄糖氧化酶t D-葡萄糖酸+过氧化氢过氧化氢+4-氨基氨替比林+二羟萘过

2、氧化酶t红色呈色剂2. 标 本 ：2.1 病 人 准 备 ： 12 小 时 禁 食 。2.2 样 品 类 型 ： 血 清 、 肝 素 ， 氟 化 钠 / 草 酸 钾 和 EDTA 抗 凝 血 浆 ； 尿 液 ； 脑 脊液。2.3 标本处理： 血清和血浆标本采集后 30 分钟内以 1000X 离心 10 分钟，然 后吸出血清或血 浆， 从而防止细胞 糖代谢 （室 温下 1 小 时约 7%）。尿液标本 不需加防腐剂，防腐剂可能会产生干扰。脑脊液（CSH）。根据实验室的标准 程序定时收集的样品；样品采集后 1 小时内离心， 吸出上清液。 一定量的特 殊物质（ 如纤维蛋白） 会覆盖分布层而限制氧扩散，

3、 从而产生负面干扰。 为 避免此类情况发 生， 必须等样品完 全凝固 以后 再离心 。3. 标本的存放：血清、血浆1525 C室温下最多1天；48 C冷藏最多7 天；-20 C冷冻保存可长达1年。尿液样品在测试前要冷藏。脑脊液2-8 C冷 藏最多可保存 7 天。4. 标本的 运输： 样品要放在带盖的 容器内以防污染和 蒸发。5. 标 本 拒 收 的 标 准 ： 溶 血 ， 抗 凝 剂 不 符 合 要 求 ， 标 本 放 置 时 间 过 长 。6. 试 验 材 料 ：6.1 测试GLU所需的物品包括：Vitros 化学定标物Kitl ; Vitros 特制质控 液 ； Vitros 7%BSA

4、稀 释 液 。强生 厂家提供原装进口， 试剂盒外包装上标明了测试项目名称， 试剂标 签代码，有效期限和储藏温度。6.1.1 试 剂组成：干 片成分 ：反应 成份 有葡萄 糖氧化 酶， 过氧化 酶，二 羟萘 和 4- 氨 基 氨 替 比 林 （ 染 料 前 体 ）。 其 它 成 份 有 染 色 物 质 ， 粘 合 剂 ， 缓 冲 剂 ， 稳定剂，表面活性剂和聚合物交叉连接剂。干片标记：试剂盒外包装上标明 了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.2 试剂准备 ：从冰 箱中取出干片 盒，在 将干片盒打 开封装 并装 入仪器 内 的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828 C。因此

5、从冰箱中取出的试 剂盒至少要在室 温下要放置 60 分钟，而冷藏的 试剂盒至少要在室温 下放置 30 分钟。 去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中 。 说明：在试剂盒 达到 室温后的 24 小时之内必须将其装入仪器中 。6.1.3 试 剂 稳 定 性 与 贮 存未开封的干片盒：存储在28 C或低于该范围。试剂盒要远离过氧化氢。在机内干片 储藏 器中 的干片盒： 在仪器上放置时间不能超过 4 周，否则 要更换新试剂。 当仪器关闭时间不超过 2 个小时时，可将干片盒 留在储藏器 中 。 出 现以下情 形要做质控 检测： 仪器关 闭时 间超过 2 小 时；再 次装载从仪 器储藏器中 取出 的干

6、 片盒。 如果储 藏正确， Vitros GLU 干 片可保质到 包装盒 上标明的有效期限。参见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP 文件。6.1.4 变质指示： 超过 有效期的试剂 干片不能使用。6.1.5 注意事项： 为避免干 片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干 片盒； 不要让尖利物刺入内包装。6.2 校准品： 用 Vitros 化学定 标物 Kit 1。 血清，尿液和脑脊液都用相同的定标液，不过各自的 SAVs 值不同。 有 关标准液的 配制，使用及 保存 的配制， 保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文 件。6.3 质控

7、品：使用Vitros 特制的质控物品；CSH质控检测用Vitros 液体质 控。若使用其它的一些质控物品，当与别的GLU测试方法比较时就会出现差 异，如 ：用 人血清/血浆混合物 分离制 成的 质控物品 ；含 有高浓度防腐剂，稳 定剂和其 它化 学添加剂的质 控物 品 ； 乙烯乙二醇作稳定剂 的质控 物品 不能使 用。有关质控液 的配制， 保存和稳定的详 情， 可参阅 VITROS250 干化学分析 仪校准品和质控品.SOP文件。7. 仪 器美国强生厂 家VITROS250全自动干式生化分析仪，GLU通道540nm。具 体 测试程序请参阅操作手册的介绍。8. 操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器

8、，样品编程，仪器 5分后自动打印 结果。具体测试程序请参阅VITROS250操作手册.SOP o具体定标程序：参阅 操作手册的相关章节内容。 何时进行定标： 在维护和保养时更换了仪器 的重要部件。 质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。 管理条例上指定的时间，在美国，CLIA要求至少每6个月定标一次。9. 检 验 结 果 的 判 断 与 分 析10. 质 量 控 制 ： 操 作 建 议 ： 将 质 控 物 质 当 成 生 物 污 染 品 来 处 理 ； 将 质 控 液 与 患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质 控浓度来检查与临床的相关性；其它详情参阅操作

9、手册质控章节的有关内容。 有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测（IQCT）的内容。在每一批 标本中都应把质控血清作为未知标本进行分析， 以 2S 为质控警告限， 3S 为 失控限， 绘制质控图， 判断是否在控。 质控规则参见生化室室内 质控操作规 程 .SOP 文 件 。11. 计算方法：以用 Vitros 化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围 内， 仪器直接报告可靠的检测结果， 以 mmol/L 报告。12. 参 考 值 范 围 ：（ mmol/L ）惯用单位( mg/dL ) 国 际 单 位 (mmol/L)置 换 单 位 （ g/L ）血清 ：男 性75 1104.2 6.1

10、0.8 1.1女性65 1053.6 5.80.7 1.1尿液： 24h 尿样500g/day*2.8mmol/day* 0.5g/day*随机样品： 301.7 0.3脑脊液：40 702.2 3.90.4 0.7此参考范围是测试 440 位禁食的健康成人， 然后取靶值附近 95%的结果 计算所得。 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。 根据好的 实验室经验， 每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义： 检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视， 还可用于检出新 生儿低 血糖症、排除胰 岛细胞 癌以及评估各种疾病碳水 化合物 代谢状况。 血清葡萄糖水平可能会异常

11、高（高血糖） 或异常低（低血糖）。 葡 萄糖测量用于诊 断和治 疗碳水化合物 代谢紊 乱， 包括糖尿病， 新生儿 低血糖， 自发性低血糖， 郎格罕 氏岛细胞癌等 。葡糖尿（存在葡萄糖化尿） 在健康， 怀孕的妇女中很常见。 妊娠葡糖尿 的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。脑脊髓液（ CSH） 葡萄糖的 测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎； 细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（不到的40%至50%血清 葡萄糖），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎（肿瘤细胞 在脑膜中广泛渗透）也使CSH葡萄糖值在正常值以下。14. 操作性能14.1 线性范围：血清1.

12、00 34.69 ;尿液、脑脊液1.11 36.08。14.2 精密度：在Vitros 250 生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该 方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以 及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。日间精密度xsCV室间精密度xsCV血清(mmol/L)(mmol/L)(%)n=20 天(mmol/L)(mmol/L)(%)样品1 n=774.80.03样品14.80.081.7样品2 n=7815.90.08样品215.90.231.4日间精密度xsCV室间精密度xsCV尿液(mmol/L)(mmol/L)(%)n=22 天(mmol/L

13、)(mmol/L)(%)样品1 n=882.50.02样品12.50.020.9样品2 n=844.30.06样品24.30.081.9样品3 n=8812.90.16样品312.90.262.0样品4 n=8815.40.11样品415.40.211.4日间精密度xsCV室间精密度xsCV脑脊液(mmol/L)(mmol/L)(%)n=20 天(mmol/L)(mmol/L)(%)样品1 n=802.30.02样品12.30.042.1样品2 n=804.70.04样品24.70.040.9*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测试结 果进行统计计算。*室间精密度是用同一

14、个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进 行统计计算。14.3 方法学比较：用Vitros700 仪器和已酸激酶参考方法分别测试相同血清样品，对比结果显示Vitros 方法的准确度良好。用Vitros250 仪器与Vitros700 仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示Vitros250 方法的准确度良好，血清：Y=1.0X+0.0（ r=1.0, N=55，检测范围 3.5-34.5mmol/L）;尿液：Y=1.02X-0.06（r=1.0, N=53，检测范围 0.3-38.2mmol/L）;脑脊液：Y=1.01X-0.05（ r=1.0,N=43 ,检测范围 0.5-36.8mm

15、ol/L）。14.4 灵 敏 度 ： 本 试 剂 的 检 测 限 为 1.11 mmol/L 。14.5 特异 性：经测试， 以下物 质对 Vitros GLU 干片法 均无干扰（偏 差 4.4mg/dl ）。扑 热 息 痛 5 mg/dL 、乙 酰 水 杨 酸 30 mg/dL 、氨 基 水 杨 酸 23 mg/dL 、 维生素 C3 mg/dL 、胆 红素 20 mg/dL 、 氯噻嗪 3 mg/dL 、肌酐 15 mg/dL 、葡聚 糖 1000 mg/dL 、 乙 醇 300 mg/dL 、 果 糖 30 mg/dL 、 半 乳 糖 60 mg/dL 、 龙 胆 酸 0.5 mg/dL

16、 、 泛 影 钠 500 mg/dL 、 碘 化 物 2 mEq/L 、 异 烟 肼 0.4 mg/dL 、 L- 多 巴 0.6 mg/dL 、 乐 疾 宁 1.5 mg/dL 、 磺 胺 噻 唑 6 mg/dL 、 酪 氨 酸 24 mg/dL 、 尿 素 氮 100 mg/dL 、 木 糖 25 mg/dL 。14.6 病 人 结 果 可 报 告 范 围 ： 1.11-34.69 mmol/L15. 超出范围结果处理：本法线性上限为36mmol/L 。如果样品中GLU浓度超 出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用 Vitros 7%BSA 稀释。 尿液用生理盐水。 重新

17、测试。 将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始 样品中GLU的浓度。16. 病 危 报 警 值 的 处 理 ： 女 性 及 婴 儿 的 血 糖 测 定 值 2.2mmo/L 或者22.2mmol/L；男性的血糖测定值2.7mmo/L 或22.2mmol/L；新生儿的血糖测定值1.6mmo/L 或16.6mmol/L 时，应 在复查该标本检测结果后，报告上 级检验医师（或科主任）后，及时报告临床医生，必要时可以再抽血复查。17. 方法局限性17.1 本法线性上限为36mmol/L 。如果样品中GLU浓度超出系统的测试线性 范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用Vitros 7%BSA稀释。尿液用生

18、 理盐水。重新测试。将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中GLU的浓 度。17.2 干扰物质： 血清 3+溶血， 相当于 250mg/dL（0.16mmol/L） 血红蛋白， 会 使糖测定结果最多偏低 10%。 这一干扰来自溶血时过氧化氢酶或其它细胞成 份的释放， 不过偏差的大小主要取决于溶血的程度。 高血脂会限制氧向反应 物的扩散， 因此测试前先将其稀释两倍。 脑脊液无明确的干扰物质。 尿液： 尿液防腐剂对尿糖测定无干扰（变化2%）： 10%麝香草酚异丙醇溶液（6.7mL/L）;甲苯（1.3mL/L）;硼酸（5.2g/L）;硼粉（15mg/mL）。18. 补 救 措 施 ： 仪 器 出 了 故 障 可 联 系 仪 器 厂 家 ， 进 行 紧 急 修 理 ， 如 一 时 不 能 修好， 可用本实验室的 OLYMPUS AU680 分析仪测定样品。19. 参 考 文 献st1. Thomas L. Clinical Laboratory Di agnostics. 1 ed. Frankfurt ：