医学检验技能操作-

1、红细胞计数1、加稀释液 取小试管1支，加红细胞稀释液2ml。2、加血 用清洁干燥微量吸管或一次性微量吸管采集末梢血或抗凝血10ul，擦去管外余血，轻轻加至红细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2-3次，立即混匀。3、 充池 混匀后用微量吸管或玻璃棒将红细胞悬液充入计数池，室温下平放3-5分钟，待细胞下沉后于显微镜下计数。4、 计数 用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞。5、 计算红细胞/L=N/2001012/LN：表示5个中方格内数得的红细胞数。白细胞计数1、加稀释液 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。2、吸取血液 用微量吸管吸取新鲜全血或末梢血20ul，擦

2、去管尖外部余血，将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管2-3次。3、混匀 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色。4、充池 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的计数池中，室温静置2-3分钟，待白细胞完全下沉。5、计数 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数。6、计算 白细胞=4个大方格内白细胞数（N）/20109/L白细胞分类计数1、将血涂片用瑞氏染液染色，冲洗干净，自然干燥后待用。2、镜下观察 低倍镜下观察白细胞的分布和染色情况。3、观察 选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的

3、区域，按一定的方向顺序对所见到的每1个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器作好记录，共计数100个白细胞。计算 求出各类细胞所占的百分比率。血涂片的制备和瑞氏染色1、采血：用微量吸管在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血。2、推片：左手平执载波片，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载波片呈30度到45度角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌、头、尾三部分。3、干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。4、标记：在载玻片的一端用记号笔编号。5、染色：血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置于染色架上，

4、滴加染液3-5滴，使其盖满血涂片，大约1分钟后，滴加等量或稍多的II液，用吸耳球轻轻混匀。6、冲洗：1分钟后，用流水冲去染液，待干。7、观察结果：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体尾交界处的血细胞。ABO血型鉴定（一）正定型法1、5%被检红细胞生理盐水悬液制备 抗凝血离心或红细胞自然沉降后取下层红细胞2 滴于小试管中，加入生理盐水2 ml ，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2500r/min 离心3分钟后弃去上清液，重复洗涤三次后自管底吸取1滴血红细胞加入19滴生理盐水中，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。2、标记试管 取小试管2 支，分别标记抗A、抗B。3、加标准抗血清

5、分别加入抗A、抗B标准血清各1滴于相应标记的试管中。4、加入红细胞悬液 分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于各试管中，混匀，立即以1000r/min，离心1min。5、观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集、再用低倍镜观察凝集强弱程度，如轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察。6、判断结果 （1）凝集结果判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。（二）反定型法1、分离血清 2500r/min，离心3min，分离血清。2、标记并加被检者血

6、清 取小试管3支，分别标记A、B、O 字样，于各管加入被检者血清1滴。3、加标准红细胞 按标记分别加入5%的A、B、O型标准红细胞生理盐水悬液1滴，混匀，立即以1000r/min，离心1min。4、观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，肉眼观察有无凝集，再用低倍镜观察。5、判断结果6、凝集结果判断标准：同正定型法。网织红细胞计数1、加染液 取煌焦油蓝生理盐水溶液2 滴，再加入新鲜全血2 滴，立即混匀，置室温下15-20分钟。2、制备涂片 取1 小滴制成薄血涂片，自然干燥。3、观察 在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。4、计数 在油镜下计数至少1000个红细胞

7、中的网织红细胞数。5、计算 网织红细胞分数数=计数的网红细胞数/1000尿蛋白定性检查（加热乙酸法）1、加尿液 取大试管1支，各加清晰尿液5ml。2、加热 倾斜试管下端，在酒精灯上加热尿液上1/3段，煮沸即止。3、观察 轻轻直立试管，在黑色背景下观察煮沸部分有无浑浊。4、加酸后再加热 滴加5%的乙酸溶液2-4滴，再煮沸后立即观察结果。，5、判断结果 判断阳性程度及蛋白质的含量。革兰染色1制玻片用接种环挑取一环生理盐水放在载玻片中央，再挑取一环菌种放入生理盐水中涂片。2固定将涂片在火焰外焰上过2-3回，放凉。3初染滴加结晶紫染色液，染1min，冲洗，甩干。4媒染滴加革兰氏碘液，作用1min，冲洗

8、，甩干。5脱色滴加95酒精脱色，约30s，或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，脱色10s，冲洗，甩干。6复染滴加复染液，复染30s，冲洗，甩干，镜检。抗酸染色1）初染用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。2）脱色3%盐酸酒精脱色30秒1分钟；用水冲洗。3）复染用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。药敏实验1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接

9、种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。3将平皿培养基置于37温箱中培养24小时后，观察效果。琼脂平板分区划线分离法(1)灭菌接种环，待冷，取1环葡萄球菌和大肠埃希菌的混合菌液。(2)琼脂平板倒放于桌面，左手抓握起平板底部，尽量直立使琼脂面靠近酒精灯火焰，以免杂菌污染。右手持沾菌接种环在平板表面上端来回划线，涂成一薄膜(第1区，约占平板面积的1/5)。划线时接种环与琼脂表面呈3045，用指力轻轻来回滑动密集划线，切忌划破琼脂。(3)灭菌接种环，杀死环上剩余的细菌，待冷，转动培养皿约6070，将接种环通过第1区34次，作连续划线为第