选修三专题2动物细胞培养 (2)

1、1概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和。 2过程：动物组织 单个细胞细胞悬液原代培养接触抑制 培养 注：代表的是 或胶原蛋白酶。 1050代的细胞群叫 。 50代以后的细胞群叫 。,传代,单个细胞,胰蛋白酶,细胞株,细胞系,增殖,一、动物细胞培养,(1)动物细胞培养中两次用到胰蛋白酶，第一次用胰蛋白酶处理剪碎的组织使之分散成单个细胞，第二次使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来。 (2)原代培养与传代培养的分界点为分瓶的继续培养。,3.原理： 。 4条件 (1)无菌、无毒的环境：培养液应进行 处理。 (2)营养(合成培养基成分)：糖、氨基酸、促生长因子、无

2、机盐、微量元素，通常需加入 、血浆等。 (3)温度：适宜温度36.50.5；pH 。 (4)气体环境：空气95%，5%。,无菌,血清,7.27.4,二氧化碳,细胞增殖,提醒 CO2作用调节培养基pH; 空气中O2作用细胞有氧呼吸; 所用装置CO2培养箱。 动物细胞培养时,一般选取动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,其细胞的分化程度较低,增殖能力强,有丝分裂旺盛,容易培养。,5.应用 (1)生产细胞产品：干扰素、疫苗、单克隆抗体。 (2)检测并判断某毒性物质毒性的大小。 (3)临床医学研究。,1动物核移植：是将一个动物细胞的 移入一个去核的 中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物个

3、体。 3.原理:,细胞核,卵母细胞,二、动物体细胞核移植技术和克隆动物,动物细胞核的全能性(不能说动物细胞全能性)。,4过程： 5.该过程用到的技术手段： 、 、 6.选卵细胞做受体细胞原因 大,易于操作; 卵黄多,营养丰富,为发育提供充足的营养; 激发重组细胞分裂分化。,动物细胞培养,动物细胞融合,早期胚胎培养和胚胎移植,7应用 (1)加速家畜遗传改良进程，促进 繁育。 (2)保护物种。 (3)生产医用蛋白。 (4)作为异种移植的供体。 8.存在问题 成活率低; 克隆动物的健康问题; 克隆动物食品的安全性问题。,良种畜群,濒危,1.动物细胞培养的特点是（ ） 细胞贴壁 有丝分裂 分散生长 接

4、触抑制减数分裂 传代培养一般传代1050代 A. B. C. D. 【解析】选A。动物细胞培养的特点是贴壁生长，接触抑制，分裂方式是有丝分裂，分散生长和减数分裂是错误的。一般只能分裂50代左右。,A,2.下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是（ ） A.培养中的人的效应T细胞能产生单克隆抗体 B.培养中的人的B淋巴细胞能够无限地增殖 C.人的成熟红细胞经过培养能获得不死性 D.用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞 【解析】选D。效应T细胞是高度分化的细胞，不能进行无限细胞增殖，也不能产生抗体；B淋巴细胞不能进行无限增殖；成熟的红细胞不具有分裂能力；动物细胞培养过程中，将肝组织剪碎，利用胰蛋白酶

5、处理可获得单个肝细胞。,D,3.利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（ ） A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体 B.体外培养单个效应B细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体 C.将等量效应B细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞不一定为杂交瘤细胞 D.利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法不一定能诊断出SARS病毒感染者,C,【解析】选C。单克隆抗体是由免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞相融合后由杂交瘤细胞产生的，其制备过程是先用SARS病毒核衣壳蛋白刺激机体产生相应的B淋巴细胞，将B

6、淋巴细胞（不能无限增殖但能产生专一性的抗体）与骨髓瘤细胞（能无限增殖但不能产生专一性的抗体）相融合，经过筛选，去掉相同细胞的融合体，再经抗原抗体检测，得到既能无限增殖又能产生专一抗体的杂交瘤细胞，经体内培养或体外培养就可获得相应的单克隆抗体。通过单克隆抗体与病毒特异性结合可诊断是否被病毒感染。,4. 在现代生物工程技术中，下列研究方案不能实现其目的的是,C,【解析】选C。只在体内外培养骨髓瘤细胞，是无法制备出单克隆抗体的，必须与免疫后的B淋巴细胞杂合后才能产生。外源基因导入受体植物的叶绿体中，外源基因的遗传方式只能是母系遗传，即雄配子花粉中不会出现，只出现在卵细胞中，能有效防止外源基因扩散。,

7、5.如图为某同学根据动物细胞 工程的方法设计的生产破伤风 杆菌抗体的实验方案。请据图 回答下列问题： （1）运用该方案有把握达到预 期效果吗？_，原因是 _ 。,没有,小鼠未经免疫一般不能产生能分泌抗破伤风杆菌抗体的浆细胞,（2）细胞应该具有产生_的功能。细胞应具有的突出特点是_。诱导细胞融合的诱导因素有_、聚乙二醇、电激等。 （3）第步不仅是细胞培养的过程，也是细胞筛选的过程：若细胞的基因型为AA，细胞的基因型为BB，筛选的目标应是基因型为_的细胞，在这项技术中这种细胞被称为_。,特定抗体,能够无限增殖,灭活的病毒,杂交瘤细胞,AABB,（4）在两两融合后的众多细胞中，基因的组合类型还可能有

8、_ 。是否有可能出现三个或四个细胞融合在一起的现象？_。 （5）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有_。,AAAA、BBBB,有可能,动物的血清、血浆,（6）动物细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞的增多，需要定期地用_使细胞从瓶壁上脱离下来，以便分装到更多的培养瓶中继续培养。 （7）单克隆抗体与常规抗体相比，具有_ 、_ 等特点。,胰蛋白酶,特异性强,灵敏度高,答案：（1）没有 小鼠未经免疫一般不能产生能分泌抗破伤风杆菌抗体的浆细胞 （2）特定抗体 能够无限增殖 灭活的病毒 （3）AABB 杂交瘤细胞 （4）AAAA、BBBB 有可能

9、（5）动物的血清、血浆 （6）胰蛋白酶 （7）特异性强 灵敏度高,6. 用动植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（ ） A.都需用CO2培养箱 B.都需用液体培养基 C.都要在无菌条件下进行 D.都可体现细胞的全能性,C,7.下列有关生物工程方面的叙述中，正确的是（ ） A.叶肉细胞离体培养时，经再分化过程可形成愈伤组织 B.培养流感病毒时应选用无菌的牛肉汤 C.在青霉菌体内获取青霉素属于基因工程的实例 D.基因工程、细胞工程都能克服远缘物种杂交障碍 【解析】选D。愈伤组织的形成需经脱分化过程产生，由于病毒不能独立新陈代谢，只能寄生，因此病毒培养应用活细胞，青霉菌产生青霉素属于微生物

10、发酵。,D,8. 下面关于生物工程的叙述，正确的是（ ） A.动物细胞培养和植物组织培养相比，依据的原理、方法都相同 B.花药离体培养依据的是植物细胞的全能性 C.经细胞核移植培育出的新个体只具有一个亲本的遗传性状 D.基因工程是人工进行基因切割、重组、转移和表达的技术，是在个体水平上对生物遗传人为干预,B,【解析】选B。A项中两种细胞培养的原理和方法均不相同,动物细胞培养原理是细胞的分裂,而植物组织培养的原理是细胞的全能性；C项中部分质基因控制的性状会和受体性状相似；D项中基因工程的操作水平是分子水平。,9.下列关于现代生物工程技术的叙述中，正确的一组是（ ） 将某人的肝癌细胞在实验室中进行

11、传代培养，该技术属于基因工程技术 病毒既可以用于细胞工程技术，又可以用于基因工程技术 基因工程中常用同种限制性核酸内切酶处理目的基因和载体 基因工程依据的原理是基因突变 人们利用基因工程技术，创造出了“超级细菌” A. B. C. D.,C,【解析】选C。中细胞系的形成属于细胞工程，是细胞培养技术。基因工程依据的原理是基因重组。灭活的病毒诱导动物细胞融合，活的病毒可作为基因工程的载体。,10.近年来，我国死于狂犬病的人数有上升趋势。狂犬病病毒的核酸是RNA，机体感染病毒后产生的特异性gG抗体，能消除狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异抗体的重要依据。我国利用地鼠的肾细胞培养狂犬病

12、疫苗，已取得良好效果。 请根据上述材料，回答下列问题： （1）巴斯德利用固定毒株制成减毒活疫苗，预防狂犬病，制成减毒活疫苗需要用_ 培养。 （2）特异性抗体可用单克隆抗体制备。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程技术是_ 。,活细胞,动物细胞融合技术,（3）下面是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答：,图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是_ 。 图中B过程是细胞融合，该过程需要用灭活的_ 、聚乙二醇或电激等诱导。 特异性抗体获取的方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血

13、清中分离所需抗体。与这种方法制备的抗体相比，单克隆抗体具有_ 等优点。,B淋巴,抗体,抗原（或狂犬病病毒）,病毒（或仙台病毒）,特异性强、灵敏度高，并可以大量制备,（4）动物细胞体外培养需要满足的环境条件有 _ 。 （5）单克隆抗体的制备还有哪些用途？ _ 。,（5）作为诊断试剂、运载药物（或“生物导弹”）等,无菌、无毒、适宜温度和pH、充足的气体、营养物质,1概念： 动物细胞结合形成一个细胞的过程，又叫细胞杂交。 原理： 2结果：形成 胞。 4.诱导因素： 、 、 等 5意义：克服了杂交的不亲和的障碍。,两个或多个,杂交细,远缘,三、动物细胞融合,聚乙二醇,灭活的病毒,电激,细胞膜的流动性,

14、动物细胞融合与植物体细胞杂交,1抗体的产生：B淋巴细胞产生的抗体具有特异性。 2单克隆抗体的制备 (1)原理： 。 过程：,四、单克隆抗体,细胞膜的流动性和细胞增殖,单克隆抗体生产中两次筛选的目的有什么不同？ 提示第一次筛选是为了 ，第二次筛选是为了 。,注意：1.诱导融合的2种细胞名称及作用 免疫过的B淋巴细胞(浆细胞)产生抗体; 骨髓瘤细胞无限增殖。 2.2个培养提取场所 体外培养培养液提取。 体内小鼠腹腔中培养小鼠腹水中提取。,得到杂交瘤细胞(用选择培养基筛选),得到能产生特定抗体的杂交瘤细胞(抗体、抗原杂交检测),(2)杂交瘤细胞特点：既能大量，又能产生。 (3)单克隆抗体的优点： 、

15、产量大。 3意义：最重要的用途 。 4单克隆抗体的应用 (1)作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质并特异性结合。 (2)用于治疗疾病和运载药物：制成“ ”。,增殖,单一抗体,特异性强、灵敏度高,生物导弹,是制备单克隆抗体,1.用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是 A.将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞 B.用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 C.用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D.筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体,B,2.（2007上海高考）如图表示用生物工程制备人抗A抗体的过程。请回

16、答下列问题：,(1)人的红细胞膜表面有被称为凝集原的特异_；从免疫学角度看，这种凝集原是_。 （2）图中细胞1是小鼠体内注入人A型血红细胞后而获得的_细胞，这种细胞具有产生_ 的特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞2，是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，这种细胞在体外培养时能_ ，但不能产生抗体。,糖蛋白,抗原,经免疫的B淋巴,单一的抗A抗体（或单一的特异性抗体）,快速大量增殖,（3）为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的细胞3，这种细胞称为_。把它在乙培养皿中进行培养，则能产生大量的细胞群，这种方法称为_。 （4

17、）过程的主要目的是_ 。通过过程或的培养方法能产生大量_抗体。,杂交瘤细胞,单克隆,筛选出能产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞,抗A单克隆,3.下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较，描述正确的是（ ） A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导融合的方法也完全相同 B.只有植物体细胞杂交技术可以跨越种属间的生殖隔离，突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能 C.利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为生产单克隆抗体开辟了新途径 D.目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交，得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并使它们的性状全部得以体现,C,【解析】选C。两技术融

18、合方法有不同，有无灭活病毒诱导是区别点。两者都可以跨越种属间的生殖隔离，突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。植物体细胞杂交使两种生物性状全部体现目前尚未达到。,二、非选择题（共2题，共38分） 4.（18分）（2010天津模拟）如图为制备单克隆抗体的流程图，据图回答。,（1）制备单克隆抗体的原理是，克隆_细胞形成的细胞群，并产生_ 的抗体。 （2）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，一般情况下，细胞中有D或S途径即能分裂繁殖。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙

19、二醇促融，获得杂种细胞。请设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说明原理。 方法：_ 。 原理：_ 。,B淋巴,大量、单一,在上述试管中加入氨基嘌呤后，收集能分裂繁殖的细胞,淋巴细胞不能分裂，鼠骨髓瘤细胞的D途径被阻断，也不能分裂，而杂种细胞中有S途径，可分裂增殖,（3）杂交瘤细胞具备 _ 的特点。 （4）在单克隆抗体制备过程中，还应用了细胞工程中的_和_两大技术。 【解析】（1）经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单一抗体；（2）杂交瘤细胞有两种合成DNA的途径，因此在选择培养基上只有杂交瘤细胞能生存并无限增殖；（3）由上不难看出，生产单

20、克隆抗体，应用到了两种细胞工程技术：细胞融合和动物细胞培养。,大量繁殖（或无限繁殖）、产生特定抗体,细胞融合,动物细胞培养,答案：（1）B淋巴 大量、单一 （2）方法：在上述试管中加入氨基嘌呤后，收集能分裂繁殖的细胞 原理：淋巴细胞不能分裂，鼠骨髓瘤细胞的D途径被阻断，也不能分裂，而杂种细胞中有S途径，可分裂增殖 （3）大量繁殖（或无限繁殖）、产生特定抗体 （4）细胞融合 动物细胞培养,5.如图为细胞融合的简略过程,请据图回答： (1)若A、B是植物细胞,在细胞融合之前已用 处理,除去了 ;A、B 到C的过程中,常用的物理方法是 , 融合完成的标志是 。,纤维素酶和果胶酶,细胞壁,电刺激、振动、离心,产生新的细胞壁,(2)若A、B是植物细胞,则形成的D细胞还要应用 技术把D培养成植株。 (3)若A、B是动物细胞,一般取自 , 然后用 使其分散开来;从 A、B到C的过程中,常用的但不用于植物细胞培养 的手段是 ,所形成的 D称为 。,植物组织培养,动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织,胰蛋白酶,用灭活的病毒诱导杂种细胞融合,杂种细胞,(4)若该过程是