动物的血样采集和血清分离技术

1、动物的血样采集和血清分离技术动物的血样采集和血清分离技术张丽娟.张桂芳,于宪仓,李俊(鹤岗市畜牧兽医水产局动物疫控中心黑龙江鹤岗154100)随着我国养殖业的发展,国家对动物疫病防控工作高度重视,基层动物防疫体系建设也日趋完善,开展动物疫病普查和免疫监测工作成为动物疫病预防,控制,净化及免疫工作督导检查的重要手段.每年免疫大会战后上级部门都会以现场监督抽检血样,基层集中送样等各种形式进行抗体监测以检查基层防疫工作进展情况和免疫质量.以前为应付工作常会出现杀只鸡宰头猪,一份血分成多份而应付检查,现在随着监测任务的增大,上级领导亲自下乡督导的频率增多,以前的做法给自己增加了采血成本和麻烦.采血和血

2、清分离这项基础工作是基层防疫工作者面临的难题,下面就笔者在基层实验室工作十六年的采血实践,结合理论知识,简要介绍在临床实践中动物的血样采集和分离血清技术.一,不同动物采血部位和方法1,家禽采血:心脏采血法易使被采血家禽因失血过多而死亡,所以在常规免疫监测中较少使用.常选以翅下静脉采血,助手抓住两鸡腿,将家禽右侧卧右翅压鸡体身下,采血者右手持5ml一次性注射器,左手食指中指固定左翅拇指压住近心端翅静脉,右手将针尖接近平行刺破表皮和血管壁,感觉无阻力时缓缓拉动注射器的活塞,血液便缓缓进入注射器内.鸡皮和血管壁薄,应注意针尖斜面与角度倾斜大或力度大会刺破双层血管而发生血肿现象.采血完毕后,用干棉球压

3、紧采血部位拔出注射器,持续压采血部位1-2min,至不出血为止,采血部位消毒.2,猪的采血:a猪采血较困难,一舟殳/j趟诹前腔静脉采血.前腔静脉的解剖位置及采血的部位:猪的前腔静脉是注入右心房的静脉干,左,右颈静脉和左,右腋静脉汇合于胸腔前门.当小猪仰卧在第一肋骨与胸骨柄结合部的前侧方会出现两个凹陷窝.多于右侧凹陷窝进行采血(左侧有膈神经).采血时针头向对侧肩胛角方向或稍偏向中央及胸腔方向刺人,根据猪体大小刺人深度不同大约在2.5cm6cm之间.一般30kg以下的猪其体重,体型都比较小一点,采取仰卧保定方式.一位保定人员抓住小猪的后腿向后拉或倒提,一位保定人员左手把住嘴使头部贴地稍向右偏,另一

4、只手把住猪的一只前腿.消毒皮肤后,采血人员左手可以调整猪的一条腿使前肢与体中线基本垂直,这时凹陷窝达到最深的程度右手持5ml一次性注射器向右侧凹陷窝处,由上而下针尖对准对面的肩胛角或稍偏向中央及胸腔方向刺人,轻抽采血针活塞见有回血可采血,如不见回血可稍将针头前后左右调整即可有回血,大约35毫升即可,采血完毕,左手拿酒精棉球紧压针孑l处,右手迅速拔出采血针管,左手压迫片刻以防出血,并涂擦碘酒消毒.b成猪或稍大些的猪采取套猪器套住猪的上颌向上提拉保定,选取耳静脉采血,以前用一次性注射器耳静脉易瘪,造成血量不够,我的经验是用种,引进种羊,应单独隔离养殖4个星期,观察无病时方可混群.用羊痘弱毒疫苗预防

5、接种健康羊只,可产生免疫力.发病山羊立即进行隔离治疗和消毒,病死山羊尸体立即焚烧或深埋,防止病源扩散.场地用2%的烧碱彻底消毒.2,治疗:预防为主,及时接种山羊痘疫苗,病重羊只一般无治疗意义;发病早期的羊,每头股内侧皮内注射1015头份羊痘弱毒冻干疫苗,同场健康羊每头股内侧皮内注射57头份羊痘弱毒冻干疫苗.同时结合对症治疗可有效减少羊的死亡.hfwww.zoov/ojcorn33佣l疫病防制人用一次性真空采血管,先用针刺破血管有血回流后再另头插入真空管内,此法采血有如下的好处:a一次性真空采血管内含对血液有促凝血,促血清分离作用的惰性凝胶物质和促凝剂,可以使血清分离快,分离血清多不易受外界温度

6、的影响.b一次性真空采血管,还可以减少溶血现象的发生.真空采血管内涂有硅酮防止红细胞粘附于试管壁.如果使用普通试管红细胞附于试管壁离心时红细胞碎裂易溶血.真空采血管有一定的负压使血流量增大,减少了采血时间保证了测定结果准确性.e一次性真空采血管配有一次性安全粘合封口,采血管内的血液成分和外界环境始终处于隔离状态,防止了血液被污染,从而使血液在采集,运送,编号,离心过程中不易外溢,降低采血人员接触血样的机会,加强了对采血人员的保护防止了人员感染和环境污染.3,牛,马,羊的采血部位是颈静脉.采取站立保定动物,颈静脉沟剪毛,消毒,术者站立用一手压迫颈静脉下端,使颈静脉充沛怒张,另一手持好5ml一次性

7、注射器斜45.角刺人颈静脉l一2em,血液即可流出,中止采血后,先松手,后拔出针头,并用消毒棉球压榨采血部位1min.以前用16号针头用力掼进血管有时因力度大血管压力大往往照成血液喷出尤其在布病检疫过程中易造成采血人员感染,而一次性注射器则避免了这点,由于5ml注射器针尖细而锋利牛羊感觉不到疼痛也利于保定.二,血清分离注意事项1,采血时,采血者要认真做好自身防护工作,采血设备需经消毒干燥以防溶血同时要做好采血记录.2,采集血液样品后,应立即将注射器内的血液沿着试管壁慢慢注入,避免产生气泡,更不能振荡,倾斜3o45.角放置好.夏天在常温下即可,冬天要在201230c下静置30min45min,以

8、利血清析出.或者先放在温水中静止30分钟后再移动运送,否则不易析出血清.3,在送样过程中,血样不可剧烈摇晃以免溶血,血样送至实验室后可用离心机2000转/分3000转/分立即分离得到血清,不能立即分离的需及时置于25以上的地方过夜以便析出血清.4,如果是鸡血或血量在2ml3ml左右也可放在注射器内但一定要将活塞拉出血面一段距离也就是血面和活塞中间留有一段距离的空气,距离越大越好.在拉动过程要缓慢不要出现气泡这样才易析出血清.5,在采血过程中一定要注意如果用一次性真空管时血液应不间断地流人管中一旦血流间断要另换管否者不易析出血清.6,我们在做血清分离的时候,有时把血液离心后会出现血清变成胶冻样,

9、笔者总结几点原因:采血后放置时间不够;动物个体差异;采血时间应在采食前或采食后2小时以后;室温低.当出现胶冻时要将胶冻与血凝块分离将胶冻放于温度35左右的温箱内一段时间胶冻会自动化开或用玻璃棒挤压胶冻也可析出血清.7,由于不同动物不同个体间静脉的深浅不同,要求使用的采血针也是不同的,要根据经验来选择不同注射器及针头.采血用的注射器最好使用一次性的,防止采血动物感染及血样的溶血,如果不是一次性采血器具一定要保持采血器具的清洁干燥与无菌.8,不同动物不同个体的大小不同,要灵活采用不同保定方式.保定后要使动物体相对稳定,不能乱动,尤其是保定猪时不能让猪左右摇摆或后缩.胸前凹陷窝一定要充分暴露,才能顺利进行前腔静脉采血.采血时动作不要粗暴,要尽量用抚摸动作,保持安静.特别在套嘴套或鼻钳子时,要避免人被咬伤或动物口腔鼻腔受伤.9,采血时,应该准备好