甲型流感病毒实验室检测技术方案

1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。甲型 h1n1 流感病毒实验室检测技术方案(试行 )本方案旨在为全国流感监测网络实验室提供甲型h1n1 流感病毒实验室检测技术方案, 不用作商业活动或赢利目的。一、 标本的采集种类和要求1、 推荐采集的呼吸道标本种类疾病发病后应尽快采集如下标本: 鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液, 并立即用冰块或冰排保存或置于4 ( 冰箱 ) , 并马上送至实验室。( 临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。 ) 采样同时填写疑似人感染甲型 h1n1 感染病例标本

2、采样单。 ( 附表 1)2、 拭子的选择标本应使用头部为合成纤维的拭子 ( 例如 , 聚酯纤维 ) , 用铝或塑料做柄。 不推荐棉拭子和木柄。 标本采集管应包含 3 毫升病毒采样液 ( 含有蛋白质稳定剂 , 阻止细菌和真菌生长的抗生素 , 缓冲液 )3、 临床标本储存要求保存在 4 ( 不能超过 4 天 ) 或者 -70或 -70以下。 有条件的实验室均应保存在 -70或 -70以下。不应保存在 -20。4、 标本的分装处理标本送至实验室后 , 立即进行处理 , 避免重复冻融。将原始标本分为三份 , 一份用于核酸检测 , 一份用于病毒分离 , 一份保存待复核。资料内容仅供您学习参考，如有不当或

3、者侵权，请联系改正或者删除。5、 标本的运输疑似人感染甲型h1n1感染病例列为a 类,用un2814包装运输。填写疑似人感染甲型h1n1感染病例标本送检单(附表2)。二、 核酸检测基于pcr 原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法,在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。1、基于 real-time rt-pcr 的方法检测新的甲型h1n1 流感病毒(引物和探针序列为美国cdc设计 ) :4 月29 日who网站上公布了美国cdc设计的针对此次甲型h1n1 流感病毒的real-time rt-pcr 引物和探针 , 此实验用于检测疑似甲型 h1n1 流感病例的呼吸道样本, 因此 , 用此 r

4、eal-time rt-pcr的方法 , 建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和h5n1 禽流感病毒。 real-time rt-pcr 方法参见附件 3( 中文翻译版 ) , 附件 4( 英文原版 ) 。2、基于 rt-pcr的方法检测新的甲型h1n1 流感病毒 ( 引物序列为国家流感中心设计) :当前国家流感中心设计了rt-pcr 方法检测新的甲型h1n1 流感病毒。 rt-pcr 的方法参见附件5。三、 病毒分离鉴定可采用鸡胚和 /或 mdck 细胞进行流感病毒分离。具备相应条件的网络实验室在收到标本后24h 内进行病毒接种。 具体方法参见附件 6 和 7。四、 适用于实验室工作

5、人员的甲型h1n1 流感病毒生物安全资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。( 一) 实验室级别及个人防护1、 对采集自属于感染甲型h1n1 流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作 , 在 bsl-2 实验室内进行。 所有样本操作均应在生物安全柜 ( bsc) 内进行。遵循生物安全三级个人防护。2、 对采集自属于感染甲型h1n1 流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作, 应在 bsl-3 实验室内进行 , 并遵循生物安全三级个人防护。( 二) 健康监测1、 所有人员均应自测发热及其它症状。2、 感染甲型h1n1 流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛

6、、呕吐、 腹泻、 头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适, 应立即向上级报告。3、 如有人员在无防护情况下暴露于甲型h1n1 流感确诊病例的临床标本或活病毒, 应考虑在暴露后的7 天时间里使用奥司她韦或扎那米韦进行抗病毒药物预防。五、 附表和附件附表1疑似人感染甲型h1n1感染病例标本采样单附表2疑似人感染甲型h1n1感染病例标本送检单附件3:real-time rt-pcr方法检测甲型h1n1流感操作规程( )(中文 )附件4:real-time rt-pcr方法检测甲型h1n1流感操作规程( )( 英文 )资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。附件 5:rt-pcr 方法检测甲型流感病毒附件 6: 甲型 h1n1 流感病毒鸡胚分离方法附件 7: 甲型 h1n1 流感病毒 mdck 细胞分离方法资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。附表 1疑似人感染甲型h1n1 流感病毒病例标本采样单姓名性别年龄职业现住址标本 #标本量采