CD间变性大细胞淋巴瘤研究进展样本

1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。+CD30 间变性大细胞淋巴瘤研究进展关键词 :淋巴瘤 ;间变大细胞 ; CD 30+是非CD30 间变性大细胞淋巴瘤 ( anaplastic large cell lymphoma,ALCL)霍奇金淋巴瘤中的一个特殊类型 , 其特征为淋巴结副皮质区和窦状隙内有表示 CD30 的间变性大淋巴细胞浸润 , 临床进展较迅速 , 常伴有 B 症状和结外病变 , 特别多见皮肤和骨的累及。 ALCL的免疫表型主要为 T 细胞型 , 部分为裸细胞型 , 少数具有 B 细胞表型的间变大细胞淋巴瘤在 REAL及新的 WHO分型中已划入弥漫性大 B

2、 细胞淋巴瘤。还有部分 ALCL在形态学和免疫表型上与霍奇金病有重叠。自1985 年 Stein 等首次提出以来 , ALCL 在形态学、遗传学、临床特征及治疗等方面均得以较为深入的研究,现将有关进展作一总结。1. 形态学特征及分类 :ALCL病理表现主要是淋巴结副皮质区浸润和窦状隙内播散。由于肿瘤细胞形态变化较大并伴有反应性细胞 , ALCL在形态学上主要分为普通型、 小细胞型、淋巴组织细胞型、 大细胞型、 类霍奇金病型及一些少见类型 , 其中前三种较为常见。1.1 普通型 1 : 可见成片的大淋巴细胞 , 胞核呈马蹄形 , 染色质较少 , 可见多个核仁。这类细胞在所有 ALCL亚型中均可见

3、到 , 为 ALCL的特征性细胞。1.2 小细胞型 2 : 具有大小不等的细胞 , 其中小、 中细胞胞核不规则 , 而大细胞常分布于小血管的周围。 该型具有一些普通型的特征 ( 成片的 CD30+大细胞 ) 并能够转化为普通型。1.3淋巴组织细胞型 3 :间变性肿瘤细胞被大量的组织细胞所掩盖,但可经过CD30免疫标记区分。组织细胞为反应性细胞,增殖活性低 , Ki-67 和 CD30 标记均阴性。由于肿瘤细胞较普通型小,在 Kiel分型中被错划为周围T 细胞淋巴瘤。2. 遗传学特征 :资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。1994 年 Morris 等 4 首次发现 A

4、LCL最常见的染色体异常为 t(2;5)(p23;q35),2号染色体上的ALK基因与5号染色体上的 NPM基因融合。约的30+60CD ALCL患者有涉及 ALK的基因重排,在儿童及年轻人中阳性的比例更高。阳性ALKALKALCL预后相对较 ALK阴性者好可能与前者发病年龄较轻有部分关联。2.1 NPM(Nucleophosmin, 核磷酸蛋白 ): NPM基因由一个金属结合位点、 两个氨基酸丛集区、 两个核定位信号 ( NLS) 组成。 NPM蛋白是一个 38kD 的高度保守的核仁磷酸蛋白 , 能往返于胞浆和核仁 , 将新合成的蛋白运送到核仁内 , 其发挥功能依赖于 N 端的寡聚结构域和

5、C 端的核定位信号。 NPM蛋白在有丝分裂中被高度磷酸化,参与前核糖体颗粒装配的晚期阶段。Okuda 等5发现在有丝分裂中由CDK2/cyclin E介导的磷酸化作用启动中心体的复制时, NPM充当了CDK2/cyclin E的作用靶点。在淋巴瘤细胞中,普遍存在的NPM启动子能够使NPM-ALK融合基因处于高表示状态,而且由NPM片断介导的寡聚作用导致NPM-ALK蛋白的活化。2.2 ALK(anaplastic lymphoma kinase):ALK 基因位于 2 号染色体 p23, 编码了一个含 1620 个氨基酸的受体型酪氨酸激酶6 。ALK分子具有穿膜 RTK的典型结构 , 包括一个

6、较大的细胞外片断、 亲脂性穿膜区以及胞浆内的酪氨酸激酶活化区。 NPM-ALK蛋白中与 NPM融合的仅是 ALK分子的胞浆部分。 ALK的细胞外区与白细胞酪氨酸激酶 ( LTK) 的细胞外部分非常类似 , 故被归入胰岛素受体亚家族。 ALK是一个在进化上保守的酪氨酸激酶 , 经 Northern 杂交检测到其在鼠的大脑和脊髓中表示 , 并经免疫杂交发现在新生鼠的大脑中高表示 , 而成年鼠大脑中的表示程度较低 , 而造血组织中未发现 ALK 的表示。在人类也已证实 ALK仅在神经系统表示。 ALK在新生大脑中的大量表示提示其在大脑发育过程中发挥着受体作用 , 可是敲除 ALK 基因的小鼠无明显的

7、异常 , 特别在神经系统未发现有缺陷。因此 ALK及其配体的正常功能还有待于进一步研究。有研究发现 pleiotyrophin 可能是 ALK的一个配体 7 。Pleiotyrophin 是一个多肽生长因子 , 能够诱导包括上皮细胞、 内皮细胞及基质细胞等多系列细胞的增殖。Pleiotyrophin 能使 ALK自身磷酸化 , 二者可能是一个生长因子 / 受体对。资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。有研究发现一些实体瘤患者血清 pleiotyrophin 水平明显升高 , 并在动物实验中也证实 pleiotyrophin 对肿瘤生长、 浸润及转移中起着一定作用 , 可

8、是在这些细胞中均未能检测到 ALK的表示。 pleiotyrophin 是否是 ALK唯一的配体 , 以及二者在生理状态下的相互作用仍有待进一步研究。2.3 NPM-ALK8-9 : NPM-ALK融合基因编码一个 80kd的NPM-ALK杂合蛋白 ,包含 NPM分子的 N端的 117个氨基酸和 ALK蛋白完整的胞浆部分 ( 1058 1620个氨基酸 ) 。互补的 ALK-NPM融合基因转录水平较低 , 在 ALCL的发病机制中无重要作用。经免疫组化染色发现 NPM-ALK可同时存在于胞浆和胞核。活化的 ALK区段能与磷脂酶 C 的 GRB2和SH2区段结合 , 其相互作用能诱导促有丝分裂活

9、性 , 与肿瘤的形成有关。用NPM-ALK融合基因转染小鼠的造血细胞可发生具有种植性的淋巴系肿瘤 ,在体外实验中也发现 NPM-ALK能使纤维母细胞发生变异,这些研究都支持NPM-ALK嵌合蛋白具有致癌性的观点。Bischof 等用能够介导寡聚作用的TRP( translocated promotor region)替代 NPM形成的 TPR-ALK嵌合蛋白也能成功地转化纤维母细胞 ,提示在 NPM-ALK对细胞的转化作用中 , NPM的功能可能仅仅是介导寡聚反应 ,而其它的潜在作用还有待进一步研究。在Roberto Chiarle 10最近报道的一项研究中 ,将NPM-ALK融合基因转入小鼠

10、 T细胞 ,在较短的潜伏期后所有的转基因小鼠均出现恶性淋巴增殖性疾病,为ALCL提供了一个良好的体内研究研究模型。NPM-ALK阳性细胞表现出大量的NPM-ALK自身酪氨酸磷酸化反应,以及其它一些蛋白质的磷酸化反应。 ALK分子的胞浆部分在生理情况下经过配体结合形成同源二聚体而产生活性。 具有 N 端寡聚作用的 NPM与 ALK的胞浆酪氨酸激酶区融合使激酶触发结构域激活,类似于经过一个自然配体使受体发生寡聚作用,使ALK 的酪氨酸激酶组成性激活。有关机制的推测可能是致癌性酪氨酸激酶募集( recuit)并依次激活 ,触发促有丝分裂级联反应,导致细胞的转化。 NPM ALK是一个高度自身磷酸化的

11、分子,其包含 21 个可能的自身磷酸化位点可作为含有SH2-( Scr homology 2)或 PTB-( phosphotyrosine binding)结构域分子的对接位点 ( docking region) ,从而激活特异性的信号传导通路。资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。2.4 ALCL的其它染色体异常9,11:包括t(1;2)(q21;p23)产生TPM3-ALK融合基因 , t(2;3)(p23;q21)产生TFG-ALK基因 , inv(2)(p23;q35)产生ATIC-ALK基因 , t(2;22)(p23;q11)产生 CLTCL-ALK基因

12、, 以及 t(X;2)(q11 12;p23) 产生的MSN-ALK基因等,导致多种具有寡聚结构域的蛋白替代而形成变异型ALKNPM嵌合蛋白 ( 非 NPM-ALK) , 这类患者的临床特征与ALK-NPM阳性者相似 (附图1) 。2.5 ALK 融合蛋白的细胞内定位及其检测: NPM蛋白的 N端具有寡聚结构域 ,正常情况下可形成同源寡聚体。在ALCL中, NPM-ALK嵌合蛋白可与野生性 NPM形成异二聚体 ,并依赖后者 C端的核定位信号而使 NPM-ALK能定位于细胞核内。由于NPM-ALK蛋白中的 NPM片断缺乏核定位信号 , NPM-ALK自身形成的同源寡聚体只能存在于胞浆。因此 ,

13、NPM-ALK融合蛋白可同时定位于胞浆及胞核。可是其它变异型 ALK嵌合蛋白由于缺乏 NPM上的核定位信号只能分布于细胞浆内 ( 附图 2) 。有推测认为 NPM-ALK的细胞核内定位并非是淋巴瘤发病机制中所必须的因素。例如能转化纤维母细胞的 TPR-ALK嵌合蛋白全部定位于胞浆 , 而且多种变异型 ALK嵌合蛋白也只存在于胞浆内 , 这些证据均支持了只有胞浆内的 NPM-ALK才在 ALCL的发病机制中发挥重要作用 9 。以往主要经过常规细胞遗传学、Southern blot、 RT-PCR以及双色FISH(fluorescence in situ hybridization)等方法检测NP

14、M-ALK易位 ,但结果差异较大且操作繁杂。 ALK及 NPM特异性抗体的出现为 NPM-ALK及其它变异型 ALK嵌合蛋白的检测提供了更为快捷高效的方法即免疫组化染色 12 。由于除神经系统以外的其它正常组织不表示 ALK蛋白 , 如这些组织 ALK免疫组化染色阳性则提示 ALK 的异常表示。用 ALK抗体行免疫组化检测时 , NPM-ALK胞浆及胞核染色均阳性 , TFG-ALK和ATIC-ALK为胞浆内弥漫性染色 , 而TPM3-ALK的弥漫性胞浆染色具有外围着色较强的特征 , CLTC-ALK为胞浆内细颗粒状染色 , MSN-ALK 则具有 ALK染色局限于细胞膜的特点 11 。这些结

15、果表明 ALK的激活发生于不同的细胞区域 , 而且不同的 ALK免疫组化染色模式提示可能存在不同的细胞遗传学变化。而对于NPM抗体检测 , NPM-ALK阳性者胞浆及胞核染色均阳性, NPM-ALK阴性者则染色仅限于资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。胞核。 ( 图解见附图 )2.6ALK基因重排与其它疾病:除了以外,ALK基因重排还可见于其它一ALCL些疾病及部分健康人 9 。例如炎性纤维母细胞瘤中涉及染色体2p23 的重排可形成 TPM3-ALK、TPM4-ALK等融合基因 ,而且在来源于组织单核细胞的罕见肿瘤中也发现有 t(2;5)异常 13 。用高敏感性 RT

16、-PCR检测 NPM-ALK及 ATIC-ALK14 时发+现 ,这些融合基因除了在ALKALCL中有高表示以外 ,还在霍奇金病、反应性淋巴组织及正常人外周血中有低水平表示,认为这些融合基因可能存在于正常(旁观 )细胞 ,提示仅 ALK 基因重排本身可能不足以引起肿瘤形成,并对实时定量 RT-PCR检测微小残留病 ( MRD) 的可靠性提出质疑。3. 临床分型及特征 :ALCL 临床上可分为原发型 (de novo) 和继发型 ( 由另一种淋巴瘤间变性转化+而来 ) 。原发型 ALCL根据分子学和临床特征又能够分为原发系统型ALKALCL、原发系统型 ALK ALCL和原发皮肤型 ALCL。3

17、.1 原发系统型+ALKALCL原发系统型+15多小于 30岁( 特ALKALCL具有以下特征: 发病年龄较小 ,别多见于 10-30岁 )。男性多于女性。发现时多为疾病晚期( 期 ) , 常伴有 B 症状 ( 75%) ,特别是高热。结外侵犯多见 ( 60%) ,约 40%患者有 2 个或 2 个以上结外病变。在一项大样本研究中发现结外累及部位的比例如下: 皮肤占 21%, 骨占 17%( 孤立或多发 ) , 软组织占 17 , 肺 11,肝脏 8,而肠道和中枢神经系统罕见。用HE 染色分析时骨髓侵犯约11%, 如用免疫组化检查则达到 30左右。化疗疗效好 ,生存率较高。在二项较大样本的研究

18、中+, ALK与的5年生存率在分别是 v,和 v46。ALK ALCL71615%11793.2 原发系统型男/ 女比例较低 ( 0.9) ,结外病ALK ALCL: 发病年龄相对较大 ,变的发生率较低 ,但常规治疗疗效较差 ,预后不良。3.3 原发皮肤型 ALCL: 原发于皮肤 , 常为无症状的孤立性肿瘤 , 表面可形成溃疡。多见于老年患者 ( 中位年龄 60 岁) , 约占皮肤淋巴瘤的 9, 一般不表示资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。ALK 蛋白 ,与系统型 ALCL 相比预后较好。局限性病灶经手术切除( 加或不加放疗 ) 能获得较高的生存率。 可是播散性的皮

19、肤病变侵犯皮肤以外组织的危险性较大 , 需要进行多药联合化疗。4 ALCL的其它分子标志 :164.1 CD 30 : ALCL 细胞表示的 CD30是属于肿瘤坏死因子 (TNF) 受体超家族的一个120kd的穿膜细胞因子受体 , 一般表示于活化的 T细胞 , 还可见于霍奇金病、 上皮细胞肿瘤等。经过配体 ( CD30L) 刺激 CD30可引发多种效应 , 包括在不同类型细胞的增殖及凋亡作用。有研究发现 CD30L能诱导 NPM-ALK阳性的 ALCL细胞系Karpas299细胞凋亡 ,但对于 NPM-ALK阴性霍奇金病来源的细胞系HDLM-2无相应作用 ,表明 CD30与NPM-ALK在功能

20、上具有一定联系。Mir 等也证发现 CD30活化可使TNF受体相关因子2( TRAF2)功能选择性恢复,并削弱细胞激活促生存转录因子( pro-survival transcription factor) NK-B的能力 ,从而诱导 ALCL细胞凋亡。可是这些作用与 NPM-ALK间的联系尚未得以明确。 有推测认为引起 ALK杂合蛋白的染色体易位可能发生在恰巧表示CD30的特定分化阶段的 T细胞 ,表示 CD30仅是一个表面现象 ,而与 ALCL的发生无功能上的关系。一些研究发现NPM-ALK能够转化 CD30阴性的造血系统细胞系 , 而且在小鼠实验中用 NPM-ALK诱导的淋巴瘤为 CD30

21、 阴性 , 都支持了上述观点。 Roberto Chiarle 10 对NPM-ALK转基因小鼠的研究中发现约有 50%的 ALK T细胞共表示CD30,推测转化的NPM-ALK 细胞发生了一些非特异性的变化,导致包括 CD30在内的其它一些基因转录上调,而这些基因其转录因子的表示有可能是ALK介导的。CD30表示是否与ALCL的发生有关当前尚无定论,可是激活 CD30能引起 ALCL细胞凋亡 ( apoptotic death)的作用提示可应用能激活CD30的抗体治疗 ALCL, 而且在动物实验中已取得一定进展。4.2 MUC1( EMA) 17 : MUC1粘液素也被称为上皮细胞膜抗原(

22、epithelialmembraneantigen,EMA), 是一个大分子量穿膜糖蛋白,一般表示于腺上皮细胞内膜面。在腺癌中 , MUC1的过表示与肿瘤恶化及转移能力的增强有关。大部分浆细胞肿瘤及 ALCL也有 MUC1的高表示 ,表示率分别为 85%和60%。在 ALCL中, MUC1资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。+表示与 ALK具有相关性 ,即MUC1的高表示主要见于原发系统型ALKALCL, 因此MUC1的预后价值也主要与 ALK有关。在原发系统型 ALK ALCL、 原发皮肤型 ALCL及经典霍奇金病中MUC1均为低表示或不表示,可是前者与后两者相比预后较差。+尽管 MUC1可作为 CD3O 淋巴瘤的一个辅助标志,+可是对于 ALK CD3O 淋巴瘤的鉴别诊断并非是一个有用的指标。MUC1表示与正常B细胞的晚期分化阶段有关,可能是与激活相关的一种表型,而且正常的外周血T细胞也仅在活化后才表示MUC1。先前已有究表明ALK表示与一些细胞毒素蛋白的表示密切相关,因此推测原发系统+型 ALKALCL可能来源于表示MUC