花粉生活力萌发试验

1、.实验二 花粉生活力的测定悬滴培养法一、 实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。二、 实验材料：二月兰花粉三、 实验仪器及药品：凹玻片、盖玻片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温箱、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。四、 实验原理：花粉是植物自然授粉和人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关键。在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时再用于授粉（花粉在低温02、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。花粉贮藏的原理就是创造代谢强度低的环境，以延长花粉的寿命）；或者双亲不在同一个地方，必须由外地邮寄花粉供应。经过贮藏或外地邮寄的花

2、粉是否已经丧失生活力，必须经过测定才能确定。 鉴定花粉生活力的方法主要有四种：一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。此法的缺点是需要的时间较长，且实验的结果易受气候条件的影响。二是将待测花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况。根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。后两种方法都是根据花粉的萌发率来反映生活力的高低，有一定的参考价值。但是萌发的不一定都能受精，特别是人工萌发还受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性。四是用染色方法来鉴定花粉的生活力。其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶的存在，它可以促进过氧化

3、物（如H2O2）放氧分解。这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化，常用无色联苯胺、萘酚等还原剂做指示剂，这些还原剂被氧化后表现红色或玫瑰红色。如果花粉是活的，那么会很快被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉保持原色。此法优点是比较快捷，但是比较间接。本试验采用悬滴培养法鉴定花粉生活力。五、 实验步骤：1. 配培养液：用蒸馏水和蔗糖分别配成5、10%、15的蔗糖溶液，并在各培养液中加少量硼酸。2. 取盛开的正在散粉的二月兰花朵。3. 播花粉：在凹玻片的凹点滴一滴清水。在盖玻片中央滴一滴培养液，用镊子轻轻夹取二月兰的花药，在培养液中央轻轻蘸一下，使花粉均匀的分散在培养液

4、的球面上。在盖玻片的四角涂抹少量的凡士林，用镊子夹住盖玻片在上提的过程中迅速把它翻转过来，小心放在凹玻片上，使培养液处在盖玻片和凹点形成的小密室中。每个凹玻片分别做蔗糖溶液的三个浓度，并用蒸馏水做对照。4. 培养：做好的凹玻片上贴好标签，注明花粉种类、培养液的浓度以及时间，然后小心放到铺有湿润滤纸的培养皿中，放到2224的恒温箱中培养5h。5. 观察：从恒温箱中取出凹玻片，在低倍镜下随机观察三个视野，计算花粉的萌发率。以花粉管长度达到花粉粒径的2倍及以上视为萌发。六、 结果分析1. 分析花粉萌发率高或低的原因。2. 本实验关键性步骤总结及实验中所存在问题的讨论。七、 作业1. 绘制一幅花粉粒萌

5、发形态图。2. 花粉生活力测定在杂交育种中的重要意义？测定花粉生活力的方法有哪些？ 一般 2核花粉粒较3核花粉粒高，对不适宜环境 （温度、湿度、辐射化学处理）抵抗力强。 原因：1、营养消耗 2、代谢旺盛 3、外壁薄等 花粉生活力的研究对于农业、林业来说，具有很重要的理论及生产实践意义。它为植物的育种、培育、栽培，为进行人工授粉和杂交授粉，提供理论依据。 一般来讲，花粉生活力的长短，即决定于植物的遗传性，又受环境因素的影响。 一般情况下，花粉生活力的长短依种而异，大多数植物的花粉只能活几个小时、几天或几个星期。 一般来看：木本植物草本植物 2胞花粉3胞花粉 影响花粉生活力的主要环境因素有：温度、

6、湿度及空气。 现在延长花粉生活力的措施主要有：超低温（-192的液态空气，-196的液态氮）、真空、降低氧分压、快速冷冻干燥等方法贮存。 影响花粉粒生活的因素主要一般低温（ 150c），低湿（相对湿度20/100-50/100）低氧。正常情况，液态氮进行超低温保存，如：水稻10 0C，85/100的湿度 24小时；玉米50C 90/100的湿度89天。但禾本科要求高湿。研究花粉储藏对解决花期不遇问题相当重要。：()植物盛花期采集发育良好的花粉；()将花粉干燥至适宜贮藏的含水量，封装在耐低温容器内；()经预冷处理或直接置于低温、超低温条件下贮藏；()根据需要，随时取出封存花粉的容器进行缓慢或快速

7、升温解冻，使花粉复苏；()采用花粉染色法、萌发法、授粉结实法鉴定花粉生活力；()具有生活力的花粉用于育种。实验十七 花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。一、花粉萌发测定法【原理】正常的成熟花粉具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。【器材与用具】载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。【试剂】培养基(10蔗糖，10MgL硼酸，05的琼脂)：称10g蔗糖、1Mg硼酸、05g琼脂

8、与90Ml水放入烧杯中，在100水浴中溶化，冷却后加水至100Ml备用。【方法】1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25左右的恒温箱(或室温20条件下)中孵育，510Min后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。【注意事项】1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度、离体时间、环境条件等因素对花粉活力的影

9、响。3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。二、碘碘化钾染色测定法【原理】多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】I2-KI溶液：取2gKI溶于510Ml蒸馏水中，加入1g I2，待完全溶解后，再加蒸馏水300Ml。贮于棕色瓶中备用。【方法】采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片

10、上，加1滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加12滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察23张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。【注意事项】此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色。三、氯化三苯基四氮唑(TTC)法【原理】具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)还原成红色的TT（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】05TTC溶液：称05g TTC放入烧杯中，加入少许95酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100Ml。溶液避光保存，若发红时，则不能再用。【方法】采集任何植物的花粉，取少许放在干洁