医学检验毕业论文

1、h u 南通体臣南通体臣卫卫校校 毕业论毕业论文文 题题目目三种肺炎支原体三种肺炎支原体检测检测法法 的的临临床床应应用分析用分析 地地 市市: 南通市南通市 学学 校校: 体臣体臣卫卫校校 准考准考证证号号: 考生姓名考生姓名: 陆陆施燕施燕 指指导导老老师师: 2015 年年 5 月月 24 日日 h u 三种肺炎支原体三种肺炎支原体检测检测法的法的临临床床应应用分析用分析 摘摘 要要 目的目的 探探讨讨肺炎支原体（肺炎支原体（mp）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链酶链反反应应 （ （pcr）法和血清）法和血清 mp 被被动动凝集法（凝集法（mp-ab

2、）等方法在儿童）等方法在儿童 mp 感染感染诊诊断治断治疗过疗过程程 中的敏感性方法中的敏感性方法 采用采用 3mp 检测检测法法对对 362 例例临临床床拟诊拟诊呼吸道（非呼吸道（非细细菌性）感染的菌性）感染的 患儿的咽拭子和血清患儿的咽拭子和血清标标本本进进行配行配对对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和研究，每患儿取咽拭子做快速培养和 pcr， ， 同同时时取血清做取血清做 mp-ab 检测检测， ，对对 3 种方法的种方法的检测结检测结果与果与临临床床诊诊断治断治疗疗病例病例进进行回行回 顾顾性分析。性分析。结结果果 回回顾临顾临床病例床病例诊诊断断 mp 感染患儿感染患儿 152 例。例

3、。mp 快速培养法快速培养法检检出出 阳性阳性 78 例，阳性率例，阳性率为为 51.3%，病程，病程为为（ （4.52.6）天；）天；pcr 法法检测检测出阳性出阳性 103 例，阳例，阳 性率性率为为 67.8%，病程，病程为为（ （6.23.5）天；）天；mp-ab 法法检测检测出阳性出阳性 127 例，阳性率例，阳性率 83.5%，病程（，病程（8.14.5）天。）天。结论结论 3 种种 mp 检测检测法的敏感性与病程有相关性，法的敏感性与病程有相关性，临临床床 医生医生应应根据患儿病程根据患儿病程选选取取检测检测方法，以提高阳性方法，以提高阳性检检出率和敏感性。出率和敏感性。 关关键

4、词键词 肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链酶链反反应应，血清抗体，配，血清抗体，配对对研研 究究 h u 目目 录录 前前 言言.5 第一章第一章 文献文献综综述述.6 1.1 肺炎支原体的定义.6 1.2 肺炎支原体的发病机制.6 1.3 肺炎支原体的分类.6 1.4 肺炎支原体的临床表现.6 1.5 肺炎支原体的临床诊断.7 1.6 肺炎支原体的实验室检查.7 第二章第二章 材料和方法材料和方法.8 2.1 样本.8 2.2 方法概述.8 2.3 临床诊断 mp 感染的诊断标准.8 2.4 实验方法.9 2.5 统计学方法.9 第三章第三章 结结果果.

5、10 第四章第四章 讨论讨论.11 h u 结结 论论.12 参考文献参考文献.12 致致 谢谢.13 附附录录.14 。 。 h u 前前 言言 肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,mp）是婴幼儿、青少年急道感染的主 要病原体之，临床上表现为呼吸道感染综合征，其中约 3%10%可发展为支原 体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由 mp 或病毒、细菌等病原体引起的儿童呼 吸道感染，给临床治疗带来一定的困难。笔者采用 3 种 mp 检测法对 362 例临床 拟诊为呼吸道（非细菌性）感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，通过病 例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法，以协助

6、临床准确做出诊治。 h u 第一章第一章 文献文献综综述述 1.1 肺炎支原体的定义 小儿肺炎支原体肺炎多见于 515 岁儿童，婴幼儿患病常表现为毛细支气管 炎。多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性干咳， 常有咽痛，头痛等症状。x 线改变明显，多为单侧病变，也可见双侧病变，以下叶 为多见，有时病灶呈游走性，少数呈大叶性阴影；病程 23 周不等，x 线阴影完全 消失比症状消退更延长 23 周之久，偶有延长至 6 周者。 1.2 肺炎支原体的发病机制 肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，mpp）的发病机制仍 不十分清楚，目前主

7、要有呼吸道上皮吸附作用、mp 直接侵入和免疫学发病机制 等学说，其中免疫调节异常在 mpp 的发生发展中可能起重要作用 1.3 肺炎支原体的临床表现 1. 多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性干咳， 常有咽痛，头痛等症状。 2. 可出现多系统多器官的损害，皮肤粘膜表现为麻疹样或猩红热样皮疹；偶见非 特异性肌痛和游走性关节痛；也有表现心血管系统、神经系统损害、血尿及溶血 性贫血等。 3. 全身症状比胸部体征明显。体检肺部体征不明显，偶有呼吸音稍低及少许干湿 罗音者 1.4 肺炎支原体的临床诊断 病原学诊断 h u 肺炎支原体快速鉴定培养法优于被动凝集法，在肺炎支原体肺

8、炎感染的早期可 提供重要的依据，可做为临床诊断 mp 感染的优先试验8；气管肺泡灌洗液 mp- dna 测定不仅能诊断 mp 感染,且支气管肺泡灌洗术可促进呼吸道症状的改善 及体征恢复，且通过纤维支气管镜收集支气管肺泡灌洗液 mp-dna，痰液 mp- dna 及血清 mp 抗体检测阳性率没有差异。crp 的检测是肺炎病原体的辅助诊 断方法，一定程度可区分细菌性肺炎和支原体肺炎。聚合酶链反应(pcr)技术检 测 mp 具有可靠、特异性高的特点，逐渐成为早期特异诊断的有力武器。 1.5 肺炎支原体的实验室检查 急性期 mpp 患儿血清 hs-crp、c3、ca、igm、igg 明显升高，iga

9、明显降低；而恢 复期 hs-cr、igg 仍然较高，而 igm 和 iga 均没有明显变化，补体 c3、c4 在恢复 期内也没有明显变化，因此血清 c-反应蛋白、免疫球蛋白和血清补体的监测对诊 断急性期或恢复期 mpp 有重要意义。mp-igm 和冷凝集试验同时检测可提高小 儿支原体肺炎实验诊断的准确率；支原体肺炎患儿外周血白细胞大多正常占 80%，中性粒细胞增高占 61%；65.6%患儿 c-反应蛋白增高；53.6%患儿血沉增快； 58.4%患儿心肌酶谱增高；24.0%患儿肝酶增高；16.8%患儿尿酸增高。5 流行病学 特点及进展 mp 肺炎发生率约为 22.3%，912 岁感染率最低,36

10、 岁最高,1012 月是 发病高峰月,小儿支原休肺炎发病率有所上升,发病年龄有趋小倾向,秋冬季发病 率高,肺炎支原体只要通过呼吸道进行传播，尤其发病率较高的地区，局部区域每 隔 3-5 年可发生一次肺炎支原体感染，每 2-6 年可发生一次大范围的肺炎支原体 感染，每次感染的时间都持续较长，有的感染可持续一年左右，因此，有关部门 h u 一定要采取相应的预防措施，切断呼吸道飞沫传播途径对控制疾病发生和流行 具有重大意义。控制支原体感染的发生和流行。 第二章第二章 材料和方法材料和方法 2.1 样本 收集黄河中心医院检验科 2013 年 1 月 1 日8 月 6 日在儿科就诊住院患儿 病例，有呼吸

11、道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿 362 例作为研究对象， 其中男 175 例，女 187 例；年龄为 2 个月12 岁，病程为 190 天。 2.2 方法 具体方法有：（1）用 mp 快速培养法、pcr 法和 mp-ab 法等 3 种 mp 检测法 对 362 例研究对象同时进行检测，记录结果。 （2）通过研究对象病历回顾统计 mp 感染的例数，并按年龄、病程和 3 种 mp 检测法结果进行统计学分析。 2.3 临床诊断 mp 感染的诊断标准 按文献1、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断即患儿经红霉素治疗 有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等；以及实验室检查 3 种检测法至少有一 种

12、阳性。病程计算方法：以病历本记录为准，即在患儿开始有症状或体征时开始 计算，到患儿来就诊检测时为止进行计算。 2.4 mp 快速培养法 支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清 晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽拭子 h u 用无菌生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37 培养；培养基液 体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时，瓶底有 蓝色颗粒或物质沉淀为阳性，5 天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或 物质沉淀为阴性。pcr 法：试剂由中山大学达安基因股份有限公司提 供。应用 pcr 法检测 mp-dna，严格按试剂盒说明书进行，以在紫外 灯下出

13、现 180 bp 扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对 照（阳性对照为 mp 质粒，阴性对照为无菌生理盐水），由专人进行操 作，质量控制。mp-ab 法：试剂为日本瑞必欧株式会社 mp-ab 检测试 剂 serodia-myco凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书操作， 抽取患儿静脉血 3 ml，采用明胶颗粒被动凝集法，用血清检测，结果 以140 判断为阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒 和阳性、阴性血清进行测定。 2.5 统计学方法 计量资料用均数标准差（xs）表示，各年龄组与 3 种检测方法结果比较用 spearman 检验；各年龄组间确诊病例的阳性率比较用 2 检验；3

14、 种检测方法阳性 结果与病程之间的比较用 q 检验。 第三章第三章 结结果果 3.1 阳性样本 经过回顾性诊断，在配对研究组 362 例研究对象中有 152 例符合 mp 感染 的诊断标准，即有 152 例确诊病例，其中肺炎 45 例，支气管炎 56 例，上呼吸感 染 49 例，支气管哮喘 2 例。mp 快速培养法检测出 78 例阳性，pcr 法检测出 103 h u 例阳性，mp-ab 法检测出 127 例阳性。 3.2 结果分析 各确诊病例的年龄分布，见表 1。表 1 显示儿童 mp 感染的年龄以 34 岁 年龄段的病例最多，为 46 例，阳性率最高，为 70.77%，与其余年龄组段比较

15、p0.05。不同病程患儿 3 种检测法的检测结果，见表 2，表 2 显示 mp 快速培养法为阳性的患儿病程均值较短为（4.52.6）天，pcr 法为阳性的患儿病 程均值为（6.23.5）天，mp-ab 法为阳性的患儿病程均值较长为（8.14.5）天。3 组 之间两两比较，差异有统计学意义（p0.05）。表 1 不同年龄组 mp 感染确诊病例 和 3 种检测方法结果对比分析注：代表与年龄组 34 岁组段比较结果表 2 不 同病程患儿 3 种检测方法阳性结果对比分析注：代表三组之间的两两比较 第四章第四章 讨论讨论 mp 感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与一般病毒性感冒相 混淆。在

16、临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓 性痰，偶带血丝。 （2）可有咽痛、头痛、胸痛，全身症状比体征明显。 （3）肺部体征不 典型而胸片炎症显著，可见云雾状大片阴影。 （4）wbc 正常或升高。 （5）青霉素类、 磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗生素有效。 （6）实验室 mp 检验有 1 项或 1 项以上阳性具备以上 2 个条件或以上者可初步诊断为 mp 感染。 多时候，临床医生为了尽快缓解患儿的症状，需根据患儿的症状、体征和病史做 h u mp 感染的诊断性治疗，但应与肺结核相互鉴别。 2 近年来由于诊断技术的提高，mp 感染报道日渐增多，一般认为

17、 mp 感染以年 长儿发病较多，本文表 1 资料显示，28 岁年龄段是发病的高峰期2。占同期 呼吸免疫科住院患儿的 9.3%，比有关文献报道各年龄组支原体肺炎占肺炎发病 的 10%20%低。说明 mp 感染的发病年龄有提前，且年龄越小，临床表现愈不 典型。 3临床实验室检测 mp 的方法很多，过去所用的冷凝集试验法诊断 mp 感染缺乏 特异性，敏感性也差，易受病程的影响3。本文采用配对资料研究，对疑为 mp 感染的患儿进行 3 种 mp 检测法，以探讨 mp 快速培养法、pcr 法和 mp-ab 法 等方法在儿童支原体肺炎诊断治疗过程中的敏感性。提示临床医生根据患儿不 同的病程选取不同的检测方

18、法，以提高实验室的阳性检出率。 4 mp 快速培养法是利用 mp 生长代谢产物使培养基液体中指示剂颜色发生改变 来判断 mp 生长；标本中的其他支原体和细菌则因培养基中加入了青霉素和醋酸 陀均被抑制。该法阳性结果可 48 h 检出。结果显示，培养法阳性率为 51.3%（78/152），低于另外两种方法的阳性率。可能与在检测前患儿已经用了 mp 敏感药物有关。表 2 结果显示，该法阳性病例病程最短。提示病程时间较短的患 儿选择此方法对检测的阳性率较高。mp 培养是诊断 mp 的金标准4。 5 咽拭子 pcr 法检测质粒核酸，该法快速、敏感和特异，通过一技术可从患儿 痰中检测 mp-dna。由于此方法相当敏感，易受污染，故实验室操作时应特别小 心。统计结果显示，该法的阳性率为 67.76%（103/152），高于快培法。此法弥补了 极微量的和被药物杀死的 mp 不能通过快速培养法检出的病例。表 2 结果显示， 该法阳性病例，病程为（6.23.5）天。详细资料显示，有病程在 30 天以上的患儿经 抗 mp 治疗，该法仍可为阳性，说明 mp 的生存力相当强，要系统化治疗。 h u 血清 mp-ab 法阳性率是 3 种检测方法中最高的，为 8