一目的学习和初步掌握稻麦或棉的花粉生活力测定方法

1、实验,19,花粉生活力测定,一、目的,学习和初步掌握稻、麦或棉的花粉生活力测,定方法,实验,19,花粉生活力测定,二、内容说明,作物杂交工作中，往往会遇到父母本花期,不遇，必须采集花粉短暂贮藏，经贮藏的花粉,及其生活力如何，必须经过测定，以保证杂交,效果。此外，花粉的生物学研究，作物雄性不,育和远缘杂交都要鉴定花粉育性和生活力,花粉生活力测定的方法较多，常用的有,形态鉴定,染色鉴定,花粉发芽鉴定,实验,19,花粉生活力测定,形态鉴定,花粉有无生活力在形态上有明显差异，即形,态是否发育正常，其内部淀粉等内含物是否充实,发育不正常的花粉，内含物不充实而空秕，形,状也不规则，大小参差不齐。而正常花粉

2、内含物,充实饱满，形状规则，大小整齐。因内部含有较,多淀粉粒而遇,1%I-IK,溶液呈深紫色反应，遇水,易吸涨而破裂。一般适用于不育系及远缘杂交后,代花粉形态和育性的鉴定,实验,19,花粉生活力测定,染色鉴定,用不同的化学试剂如氯化三苯基四氮唑,2,3,5,triphenyl,tetrazolium,chloride,C,12,H,15,N,4,Cl,简称,TTC,或四唑）、联苯胺茶酚等,快速鉴定花粉生活力,花粉发芽鉴定,配制一定浓度的蔗糖溶液等作培,养基，在人工控制条件下进行花粉发芽试验，根,据花粉发芽率的高低衡量花粉生活力。也可以在,授粉数小时后直接观察柱头花粉萌发伸长情况,实验,19,花

3、粉生活力测定,三、所需用品和操作方法,一）用品,当天采集的稻、麦或棉任何一种作物的新鲜花,粉。冰箱、荧光显微镜、普通显微镜、恒湿箱,载玻片、盖玻片、培养皿、滴管、镊子、解剖针,吸水纸、滤纸、标签、铅笔等,Na,2,HPO,4,KH,2,PO,4,K,3,PO,4,NaOH,MnSO,4,Ca,NO,3,2,H,3,BO,3,1%I-IK,溶液、乳酸、苯酚、甘油,棉蓝、苯胺蓝、冰醋酸、蔗糖、琼脂、马铃薯,淀粉、蒸馏水,实验,19,花粉生活力测定,实验,19,花粉生活力测定,三、所需用品和操作方法,二）操作方法,花粉的育性和生活力可由浅入深按以下顺序,观察鉴定：外形观察,I,IK,测定内含物的充实

4、,度,染色法鉴定花粉酶学性质,花粉发芽试验,观察花粉在柱头上萌发和伸长情况,实验,19,花粉生活力测定,1,形态鉴定,1,在载玻片上置少量正常的稻、麦或棉的新鲜花粉，于,低倍显微镜下观察花粉形态。不同育性和生活力的花粉,在形态上有明显差异。水稻和小麦不育花粉空秕畸形,可育花粉饱满球形；棉花不育花粉呈半圆形和棒状，大,小也参差不齐，可育花粉均为圆形，大小整齐一致,2,与形态观察相同，但在有花粉的载玻片上滴,1,滴,1%I,IK,再观察花粉是否染色和染色深浅情况，以判断花粉,内含物的充实度。正常花粉应有较多的淀粉粒，遇,I,IK,呈紫黑色，不正常的染色浅或不染色,实验,19,花粉生活力测定,2,染

5、色鉴定,1,试剂配制,Sorensen,磷酸缓冲液,0.2%TTC,溶液,2,TTC,染色,取已成熟尚水开花的水稻、小麦或棉花,花粉,5,10,个，切断花药两端，放入小烧杯中，加,0.2%TTC,溶液，使花药完全浸入反应液中，在,30,左右温度下染色,30,60,分钟,3,压片镜检,取出花药，置于载玻片上，用解剖针压,出花粉，去掉花药药壁组织，盖上盖玻片，镜检观,察，取,5,个视野，统计着色花粉百分率。凡花粉粒变,红有生活力，染色越深生活力越强,实验,19,花粉生活力测定,3,花粉发芽鉴定,1,配制培养基,水稻,称取马铃署淀粉,6g,蔗糖,20g,H,3,BO,3,0.01g,加,100ml,

6、加蒸馏水,煮沸呈糊状，然后置温箱内保,温保湿备用,小麦,称取蔗糖,10g,琼脂,3.5g,H,3,BO,3,0.02g,加蒸馏,水,100ml,加热融化后置温箱内保温保湿备用,棉花,称取蔗糖,25g,MnSO,4,0.07g,Ca(NO,3,2,0.04g,H,3,BO,3,0.04g,加蒸馏水,100ml,加热融化后置温箱内,保温保湿备用。以上培养基,pH5.2,6.0,实验,19,花粉生活力测定,3,花粉发芽鉴定,2,置床发芽,将配制好的培养基，乘未凝结时均匀地在载,玻片上涂一薄层，制成发芽床。置室温,27,29,下,5,分钟后，用毛笔蘸取刚开花的花粉,轻轻地将花粉弹落在床上，密度要稀而均

7、匀，使,花粉发芽力保持正常均一，也便于观察统计,实验,19,花粉生活力测定,3,花粉发芽鉴定,3,镜检观察,花粉置发芽床后，把载玻片放入铺有湿润滤,纸的培养皿中，加盖，水稻在,27,29,下保温保,湿,5,分钟，小麦于,22,26,下,1,2,小时，棉花于,30,32,下培养,2,3,小时，然后镜检观察，凡花,粉管伸长超过花粉粒直径的即为发芽的花粉，统,计花粉发芽率,实验,19,花粉生活力测定,4,观察花粉在柱头上的萌发,1,棉蓝染色法,水稻、小麦,取授粉后一定时间（水稻授粉后,10,30,分钟,小麦授粉后,2,4,小时）的整个雌蕊，放在载玻片,上，滴几滴棉蓝溶液（按乳酸：苯酚：甘油：蒸馏,水

8、：棉蓝为,25,25,25,25,0,8,配制），盖上盖,玻片，在盖玻片上一侧滴入,40,甘油，在另一侧用,滤纸将染料吸去，如此重复进行，直至盖玻片下部,为甘油所浸透，然后置显微镜下观察，花粉管为蓝,色，而柱头组织无色或淡蓝色。注意染色时间不宜,过长,实验,19,花粉生活力测定,4,观察花粉在柱头上的萌发,1,棉蓝染色法,棉花,授粉后,4,6,小时，用刀片切取整个花柱，置于,70,水浴中,10,15,分钟，取出，纵剖成两半，室,温下用,0.1,棉蓝溶液染色,3,4,小时，用乳酚透明,过夜，并用新鲜乳酚封固，次日压片观察花粉管,伸长情况,实验,19,花粉生活力测定,4,观察花粉在柱头上的萌发,2,荧光显微镜观察,固定,取水稻开花授粉后,10,15,分钟、小麦,2,4,小时,的整个雌蕊，棉花授粉后,4,6,小时的整个花柱,用卡诺固定液固定,2,小时后移入,70,酒精中保,存备用,实验,19,花粉生活力测定,4,观察花粉在柱头上的萌发,2,荧光显微镜观察,软化,制片前，水稻、小麦的材料用,8N,NaOH,软化,10,分钟（煮沸）。棉花的用,10N,NaOH,软化,10,小,时，然后水洗去碱,镜检,将染色的材料置于载玻片上，盖上盖玻片，压,片后置荧光