中孢子子实体多糖论文

1、Multiple-Fingerprint分析调查的质量控制中孢子子实体多糖食品安全与营养研究中心,城市农业重点实验室(南)、Bor Luh食品安全研究中心、农业与生物学院、上海交通大学,年上海,中国食品科学学院、福建农业和林业大学,中国文摘:,检测和隔离多糖构成特定的问题。在这项研究中,multiple-fingerprint进行分析利用化学计量学评估质量和抗氧化活性多糖:中孢子果期的身体从不同的来源。真实源表现出不同的铁减少氧自由基吸收能力和抗氧化能力外在来源。多糖提取物的红外光谱、高效液相色谱指纹和建立了真实的来源应用于评估外国来源的多糖质量。使用皮尔逊相关系数分析红外指纹给相关系数r值的

2、0.788和0.828两个外国来源,分别表示不同的真实的来源。分析的高效液相色谱指纹使用监督方法中药不能区分来源(r 0.9),但主成分分析的红外光谱和高效液相色谱指纹杰出的来源。介绍食用菌是重要的营养和用药来源。金色的金针菇或enokitake是全球第四大受欢迎的食用蘑菇,由于它的美味和高营养属性,包含低热量和脂肪和高的比例的氨基酸、纤维和维生素。 1大量的论文强调了蘑菇的强大的抗氧化活性多糖、24和f中孢子作为一个优秀的纤维和多糖表现出的来源抗氧化、2降胆固醇、5抗炎、免疫调节,7和抗肿瘤activities.8多糖的抗氧化等生物活性依赖于各种结构参数主要包括单糖成、糖苷链债券类型、性质和

3、聚合度和分支,灵活性和空间的配置多糖链。9、10 f中孢子也可能影响的来源生物活性多糖的礼物。评估在f中孢子多糖的质量果期身体目前阻碍了潜在的健康好处,因为碳水化合物的检测和分离,尤其是长链多糖,是非常具有挑战性的。简单和可靠分析技术来评估复杂多糖还没有广泛使用。指纹分析结合化学计量学特征已经被证明是有效的复杂的分子系统和识别和技术资格批准的世界卫生组织在1991.11(dis)相似的方法包括主成分分析(PCA)用于评估的真实性或检测掺假食品和草药。12日,13日在这项研究中,multiple-fingerprint分析包括光谱和色谱方法化学计量学是评估多糖和执行f .中孢子果期身体的抗氧化活

4、性真实的和外国来源。的多个指纹多糖的合格的或真实的来源建立和应用于检测外国来源。材料和方法化学物质。标准包括葡萄糖、核糖、甘露糖半乳糖、木糖和6-hydroxy-2、57,8-tetramethylchroman-2-carboxylic酸(Trolox)从Sigma-Aldrich购买(上海、中国)。1-Phenyl-3-methyl-5-pyrazolone(PMP)购买Adamas-beta(上海,中国)。高效液相色谱级乙腈和水从Anpel购买(上海,中国)。所有其他的化学物质和溶剂是最高的商业级,并购买从Sigma-Aldrich(上海,中国)。源材料。十批f中孢子果期的尸体真实的来源

5、是由Infinitus提供(中国)有限公司命名为ZJ样品后在中国浙江的发展位置。各一两个外国来源来自四川和福建,命名为SC和FJ样本分别在当地市场购买。制备多糖提取物。多糖提取根据以前报道的方法制备。14的果期60f中孢子被风干的尸体10 h和C磨成细颗粒使用DS-Y250轧机(Dingshuai电动车,中国上海)通过一个40筛网。5克的粉100毫升dd-water在80C 4 h,搅拌和提取冷却到室温和在4000转离心10分钟。上清收集和除蛋白60毫升的观点使用CHCl3 /正丁醇Sevag method.15上层wascollected和使脱色通过添加30%(v / v)水性过氧化氢。的解

6、决办法是集中在真空和沉淀3量的95%(v / v)水乙醇,然后孵化在4C过夜。多糖沉淀离心获得的在4000转10分钟,洗用丙酮和顺序醚。多糖提取是利用氮气和干存储在一个干燥器进行进一步的傅立叶变换红外光谱分析。氧自由基吸收能力(ORAC)测定。氧自由基吸收能力的测定多糖进行了如前所reported16使用无限的F200 PRO标(Tecan、瑞士)。样品准备在DMSO和Trolox标准,所有其他试剂准备在75毫米磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)。简单地说,每一个好在96 -板包含30L样本(或DMSO的空白控制),225L 81.63纳米荧光素。盘子里了在37C和孵化20分钟,和25L 0.36

7、2,2-azobis(2 -amidinopropane)盐酸盐(AAPH)被添加到每个好开始反应,导致最后280L的总量。的荧光是每5分钟记录1 h(485/538交货/ em,海里)在37C。Trolox等价物相对面积计算根据曲线相比,Trolox标准曲线准备下相同的实验条件。反应进行的一式三份,结果表示为微摩尔Trolox多糖的等价物每克。铁降低抗氧化能力(收紧)测定。的铁降低抗氧化能力分析是基于减少Fe3 + -tripyridyltriazine(TPTZ)蓝色的铁+ -TPTZ。17、18收紧试剂制备混合300毫米醋酸缓冲(pH值3.6),10毫米TPTZ,20毫米氯化铁的比率10

8、:1:1(v /v / v)。然后,3毫升的收紧20L样本或试剂加入Trolox和孵化为30分钟37C。吸光度测定在使用无限F200 PRO酶标590海里(Tecan,瑞士)。Trolox被作为标准,和适当的样品稀释测定。反应进行的一式三份,结果报告为Trolox等价物(TE)每克多糖。酸水解。多糖水解使用两个方法。完全酸水解、多糖(10毫克)三氟乙酸水解在2毫升的2米(TFA)在一个安瓿密封在氮气氛和孵化在110C5 h。部分酸水解,2毫升的0.05米的TFA是补充道在110C和孵化2 h。冷却后的房间温度、反应在4000转离心5分钟,和上层清液在减压干燥。甲醇是两次添加和真空下蒸发去除残余

9、从教。傅立叶变换红外光谱以及最优化分析。傅立叶变换红外光谱使用PerkinElmer nonhydrolyzed多糖被获得红外光谱谱100。光谱被记录在吸光度模式从4000年到400厘米1 4厘米1的决议。四个复制光谱为每个样本收集。光谱的每批ZJ样本导出到Excel 2010来计算的意味着色谱仪。皮尔森相关系数r(11)计算使用1.13情商评估指纹的相似性制备PMP衍生品完成后酸水解。单糖标准或者水解多糖样品溶解在10毫升dd-water。标准或水解样品(0.2毫升)和0.2毫升的0.5米甲醇溶液1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone(PMP)和0.20.3毫升氢氧化钠

10、和搅拌在70C冷却后60分钟。房间温度、中和反应是0.2毫升的0.3米HCl,增加了1毫升氯仿和搅拌30年代之前在2000转离心5分钟。氯仿相wasdiscarded,和提取过程重复两次删除多余的PMP试剂。水层的收集,由与dd-water 5毫升,并通过0.45m过滤膜。部分酸水解后制备PMP衍生品。部分水解多糖溶解在2毫升dd-water和0.5毫升0.2和0.2毫升的甲醇解决1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone(PMP)0.2和0.2毫升M氢氧化钠和搅拌。随后的步骤如上所述完全酸水解。高效液相色谱分析。PMP衍生品进行分析安捷伦1260高效液相色谱系统(美国安捷伦

11、科技)。分离是通过使用反向阶段洗脱5m Shim-pack VPODS吗列(4.6毫米250毫米,5m,日本岛津公司,京都,日本)配备了一个4.6毫米10毫米Shim-pack GVP-ODS警卫队列(日本岛津公司)。色谱条件如下:流率= 0.8毫升/分钟,进样体积= 20L;列温度= 30C。流动相由82%(v / v)0.05米磷酸钠(pH值6.8)含有18%(v / v)乙腈权力平等主义的洗脱。收集光谱的波长245纳米。数据分析。抗氧化活性数据报告为手段标准偏差。单向方差分析和LSD测试水平0.05被用于识别的差异意味着使用SPSS窗口(10.05版本rel。1999年,SPSS Inc

12、 .)、芝加哥,美国)。所有原料预处理、提取、处理和光谱/色谱指纹图谱和数据处理进行提出了在流程图上的相似(图1)。使用皮尔逊相关系数r FT-IRfingerprints决心使用Excel 2010计算。高效液相色谱指纹图谱的相似度确定使用色谱的相似性评价体系2004年中医指纹版本(中国药典委员会),它是专门设计的相似性分析LC和GC指纹国家食品药品监督管理局推荐的China.19,20个完整的色谱的相关系数概要文件的样本计算。的化学指纹多糖从12批f中孢子果期尸体分析了相似性分析和主成分分析(PCA)是使用SIMCA-P 11.5(期刊Umetrics AB,执行瑞典)。结果与讨论多糖的抗

13、氧化活性。中孢子果期的身体。氧自由基吸收能力()和铁降低抗氧化能力(收紧)分析进行探讨抗氧化剂活性多糖样品,确定whetherdifferent激进系统影响研究结果。多糖从真实的来源(样本ZJ-1ZJ-10)和外国来源(样品SC和FJ)了观察氧自由基吸收和减少功率如图2所示。活性氧influenceof f中孢子多糖(图2)表明,抗氧化能力是最高的果期的尸体从陆地,类似于SC和大部分的ZJ样品(p 0.05),氧自由基吸收值32至52mol TE / g多糖。还原能力作为潜在的抗氧化活性的重要指标,这发现类似的在果期尸体从大多数ZJ样品吗和SC在FJ最低(p 0.05),在5的范围11mol

14、TE / g多糖。抗氧化的变化提取活动从不同的来源中孢子果期的身体显示多糖的结构不同,这可能会影响其他生物的活动。中孢子果期bodies.9,10在子实体多糖的质量不能仅从蘑菇的外表,和现有的来决定高通量方法无法区分由于区分真实和外国来源复杂的多糖结构是非常具有挑战性的。因此,替代方法需要质量控制f .中孢子果期的身体。傅立叶变换红外光谱指纹:相似性分析和主成分分析。的光谱指纹nonhydrolyzed多糖提取从10批合格ZJ样本进行了分析通过红外,ZJ-7指纹显示作为一个例子(图3)。吸收峰在3400、3400和1420cm O1对应于H,CH和C羧基O组拉伸,而乐队在1246厘米1的结果从

15、一个OH变形振动。拉伸高峰在934年,885和882厘米1可能来自-glycosidic联系糖和水分子之间的绑定到多糖导致了吸收带,享年1643岁厘米1。SC和FJ样本的红外色谱图(图3 b、C)ZJ相似,但关键的差异传播一些山峰的百分比明显。12个不同批次的相似性中孢子果期尸体从各种来源被计算评估相关系数与原数据。所有光谱导出到Excel 2010,相关系数r计算。SC的指纹,FJ相比标准资料来源于ZJ样本。值为1表明一个完美的标准配置文件之间的关联。1310批ZJ样本,r值0.973和之间的不同0.996,表示高度的相似性(r 0.9)。的rSC和FJ样本值分别为0.788和0.828,分

16、别表示从ZJ显著差异样本。主成分分析应用于确认的歧视的来源f .基于傅立叶变换红外光谱指纹数据中孢子果期的身体原始的多糖提取。的基础上皇帝的停止规则,只有因素与特征值 1被认为是分析。21 10特征色谱峰(图3)加工使用主成分分析,因子1和2特征值为8.60和1.07,代表96.7%的累计方差。因此,因素1和2被用来可视化数据不均匀性。一个二维主成分分析的情节红外光谱数据预处理后的指纹构造如图4所示。分散的小三角形代表PCA分数显示真实的样品(ZJ-1ZJ-10)是集群密切,而SC和陆地样本吗更加分散。这表明,红外指纹数据的主成分分析可以用来区分真实和外国的来源吗f .中孢子果期的身体。高效液

17、相色谱指纹图谱:相似性分析和主成分分析。的多糖的单糖组成中孢子果期后用高效液相色谱法研究了尸体完全酸水解和揭示了葡萄糖的存在,甘露糖、半乳糖、核糖、木糖(图5)。这个概要文件显著不同的菌丝的组织中,葡萄糖唯一的单糖。14葡萄糖,摩尔比率为85.04%,是主要的单糖,其次是甘露糖(6.81%)、半乳糖(6.09%)、木糖(1.65%)和核糖(0.39%)。f .中孢子的子实体也包含arabinose22和之前报道的那样吗fructose.23相似性分析是应用于高效液相色谱指纹部分酸水解后,因为太少山峰完全酸水解后的高效液相色谱指纹。的高效液相色谱法简介12批次f中孢子果期的身体并从10 ZJ批次

18、(平均色谱图6)揭示了17个特征峰适合相似分析。10 ZJ批次的相关系数计算相似度评价体系中药色谱指纹图谱软件和从0.930到0.998不等。SC的r值和FJ样本分别0.955和0.982,(图6 b,C),这意味着该软件无法相似区分来源主成分分析是应用于高效液相色谱从precolumn PMP概要文件部分酸水解后衍生化。相对峰17个特征色谱峰面积(图6)用于主成分分析,三个因素特征值为7.18,2.22,和1.49,代表90.7%的累积方差。因此,三维高效液相色谱色谱的PCA的阴谋概要文件构建如图7所示。分散的点代表了PCA分数表明,合格的样品(ZJ-1ZJ-10)集群密切在几何空间中,而SC和FJ样本更分散。这意味着,PCA的部分水解PMP衍生品可以用来区分真实和外国吗f .来源中孢子果期的身体。用光谱和色谱指纹监督/无监督数据分析技术包括(即相似参数。相关系数)和主成分分析已经应用于检测外国f中孢子的来源果期的