奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质检查新方法

1、奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质检查新方法奥沙拉秦钠胶囊为水杨酸类药物 , 通过偶氮键连接两分子 5- 氨基水杨酸 , 到达结肠部位后其偶氮桥在细菌作用下断裂 , 分解为二分子 5- 氨基水杨酸并作用于结肠炎症黏膜 ,抑制前列腺素合成 , 抑制炎症介质白三烯的形成 , 降低肠壁细胞膜的通透性 , 减轻肠黏膜水肿 , 用于轻中度急慢性溃疡性结肠炎的治疗1.EP7.0 美沙拉秦原料质量标准中对苯胺杂质检查控制 , 苯胺杂质对人体健康能产生高铁血红蛋白血症、溶血性贫血和肝、肾损害 , 由于奥沙拉秦钠含有二分子美沙拉秦2, 因此对苯胺杂质进行考察、控制。本文参考EP7.0 美沙拉秦原料质量标准项下杂质 K 检

2、查方法3, 建立了 HPLC 法测定奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质的含量 , 方法专属性、灵敏度、耐用性等符合要求 , 可以满足奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质检查。1材料1. 1仪器 Agilent 1260 高效液相色谱仪 （ 包括 VWD 检测 器、G1311C 自 动 调 配 泵、G1329B 标 准 自 动 进 样 器、G1316A 可调柱温恒温箱、Agilent 色谱化学工作站等 ） ;电子分析天平。1. 2药 品 与 试 剂苯 胺 对 照 品 （99%, Aladdin IndustrialCorporation） ;奥 沙 拉 秦 钠 胶 囊 （ 批 号 :110203、110206、110

3、209） ;甲醇 （ 色谱级 , 美国 Tedia 有限公司 ） ;其他试剂均为分析纯。2方法与结果2. 1色谱条件的选择和系统适用性试验 色谱柱 :AgilentC18（4.6×250 mm, 5 μm） ;流动相 :甲醇 :混合溶剂 （ 含 1.41g/L 磷酸二氢钾和 0.47 g/L 磷酸磷酸氢二钠二水化合物的混合溶液并用 42 g/L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 8.0）1585 ;流速 1.0 ml/min, 检测波长为 205 nm ;柱温为 40 ;取苯胺盐酸盐对照品 27.8 mg, 置于 100 ml 容量瓶 , 用流动相溶解并稀释至刻度 , 再吸取 0

4、.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流动相稀释至刻度 , 再吸取 0.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流动相稀释至刻度 , 作为对照品溶液 , 进样量 50 μl.对照溶液主峰信噪比至少为 10.2. 2有关物质检查 精密称取装量差异项下内容物的细粉适量 （ 约 40 mg）， 置于 20 ml 容量瓶中 , 加流动相溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液作为供试品溶液。取苯胺盐酸盐对照品 27.8 mg, 置于 100 ml 容量瓶 , 用流动相溶解并稀释至刻度 , 再吸取 0.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流动相稀释至刻度， 再吸取0.2 m

5、l置于20 ml容量瓶， 用流动相稀释至刻度，摇匀过滤即得。精密量取上述两种溶液各 50 μl, 分别注入液相色谱仪。供试品中苯胺杂质峰不得大于对照品溶液中苯胺峰面积 （10ppm）。2. 3方法的专属性 取苯胺盐酸盐对照品 27.8 mg, 置于100 ml 容量瓶 , 用流动相溶解并稀释至刻度 , 吸取 0.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流动相稀释至刻度 , 吸取 0.2 ml 置于20 ml 容量瓶 , 用流动相稀释至刻度 , 作为苯胺定位用溶液。精密量取 50 μl, 注入液相色谱仪。取奥沙拉秦钠胶囊装量差异项下内容物的细粉适量 （ 约40 mg）， 精密称定

6、, 置 20 ml 容量瓶中 , 加流动相溶解并稀释至刻度 , 过滤 , 取续滤液作为供试品溶液。精密量取 50 μl,注入液相色谱仪。在苯胺对照品溶液和奥沙拉秦钠样品色谱图中 , 苯胺峰保留时间位置处无干扰峰。2. 4检测限 对照品溶液 :取本胺盐酸盐对照品 27.8 mg,至 100 ml 容量瓶 , 用流动相溶解并稀释至刻度 , 再吸取 0.2 ml至20 ml容量瓶， 用流动相稀释至刻度 , 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶 , 用流动相稀释至刻度。精密量取对照品溶液 10 μl进样。性噪比 3 时 , 检测限4为 2.78×10-4μg.2. 5强

7、制破坏试验2. 5. 1酸破坏 取奥沙拉秦钠样品约 40 mg, 置于 20 ml 容量瓶中 , 滴加 7 mol/L 的盐酸 5 滴 , 再加 10 ml 流动相溶解 ,室温下放置2 h后， 用2 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至中性，后加流动相稀释至刻度。2. 5. 2碱破坏 取奥沙拉秦钠样品约 40 mg, 置于 20 ml 容量瓶中 , 滴加 2 mol/L 的氢氧化钠溶液 10 滴 , 再加 10 ml 流动相溶解 , 室温下放置 2 h 后 , 用 2 mol/L 的盐酸调节 pH 至中性 , 后加流动相稀释至刻度。2. 5. 3高温破坏 取奥沙拉秦钠样品约 40 mg, 置于

8、20 ml容量瓶中 , 加流动相溶解并稀释至刻度 , 后放置水浴中 3 h.2. 5. 4光照破坏 取奥沙拉秦钠样品约 40 mg, 置于 20 ml容量瓶中 , 加流动相溶解并稀释至刻度 , 在光照 （4500±500）Lx条件放置 2 d.2. 5. 5氧化破坏 取奥沙拉秦钠样品约 40 mg, 置于 20 ml容量瓶中 , 加入 30% 双氧水 1 ml, 再加 10 ml 流动相溶解 , 室温下放置 2 h 后 , 后加流动相稀释至刻度。分别取上述溶液各 50 μl 注入液相色谱仪 , 均未检出苯胺杂质 , 说明奥沙拉秦钠较为稳定 , 在较为剧烈条件下未降解产生苯胺

9、杂质。2. 6溶液稳定性 取上述样品溶液 , 分别于 0、2、4、6、8 h 进样 50 μl 注入液相色谱仪 , 记录色谱图 , 结果见表 1.2. 7耐用性 将色谱条件中的参数作适度变化 , 采用不同色谱柱、不同柱温、不同流速 , 考察对测定结果的影响情况 ,性噪比均能达到 10, 方法耐用性良好。2. 8有关物质检查结果 对某制药企业 111203、111206、111209 三批按2.2 有关物质检查;方法检查 , 均未检出苯胺杂质。3小结奥沙拉秦钠样品在酸、碱、高温、光照、氧化条件下破坏 ,均未检出苯胺杂质。EP7.0 奥沙拉秦钠原料质量标准项下未将苯胺订入标准。但苯胺作为特定杂质 , 奥沙拉秦钠含有美沙拉秦结构 , 本法可作为奥沙拉秦钠可能含有苯胺杂质检查的检查方法。为使奥沙拉秦钠在色谱系统中尽快洗脱 , 可以在苯胺峰保留时间之后 , 设定较高比例甲醇 , 对奥沙拉秦钠等相关成分洗脱。参 考 文 献1 范竹萍 , 曾民德 . 国产奥沙拉秦钠胶囊治疗溃疡性结肠炎 149例 . 中国临床药理学与治疗学 , 1999, 4（1）：12-16.2 陈龙珠 , 陈珏 . 奥沙拉秦钠胶囊溶出度测定 . 西北药学杂