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文档简介

DNA 的限制性内切酶酶切分析,1. 酶切 组分 加入体积 （2人一组） ddH2O 7ul 10buffer EcoRI 2ul 质粒DNA 8ul EcoRI 3ul 盖紧，混匀，稍离心，37 水浴反应1h,限制性内切酶(Restriction Endonuclease, RE): 由细菌自身产生，能识别双链DNA分子中特定的碱基顺序，以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键，产生粘性末端或平头末端。,实验原理,EcoR I的作用模式图:,产生5 突出粘性末端,*GAATTC* *CTTAAG*,5 ,3 ,5 ,3 ,EcoR I,*G,*C T T A A,5 ,3 ,3 ,5 ,OH,P,A A T T C*,G*,5 ,3 ,3 ,5 ,P,OH,EcoR I,Bcl-2 (1.9kb),pBS (2.96kb),pBS-Bcl-2 (4.86kb),Bcl-2重组质粒的酶切模式图,2. 点样:取4l 6上样缓冲液加入20l 酶切产物. 混匀后取10ul加到点样孔中。 3. 电泳：100V稳压进行电泳30分钟。 4. 观察结果：紫外分析仪上观察DNA存在处显亮绿色荧光条带,DNA Marker,样品,2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp,2961bp,190

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