药剂药效的测定方法

1、药剂药效的测定方法药剂药效的测定方法2010-05-06 17：49测定一种药剂的药效好坏，可通过室内毒力测定和林间药效试验。室内毒力测定主要是测定一种药剂的毒性、毒力或比较几种药剂毒力的大小。室内试验的结果，除可作为药剂的初步筛选的根据外，还可为林间试验提供参考。有时在林间发现的问题必须拿回室内作比较精细的试验研究。林间试验主要测定或比较药剂在林间条件下的药效，其结果比较接近实际情况，为生产防治提供可靠的依据。1.室内毒力测定进行室内试验要注意：供试生物应该是由同一环境下培养得来的，或采自林间同一环境的，在生理、发育上愈一致愈好。供试药剂必须纯净(原油或原粉)，至少要有确切的有效成分含量。在

2、控制的条件下进行试验，施药要均匀一致。试验一般要求每种处理有3-5个重复，每个处理要有50-100头昆虫(菌类孢子一般为在显微镜1010视野内有100个左右，每次计算必须移动玻片检查3次)。各种试验必须设立对照。所设对照有：完全不处理的(在自然状况下的)，即所谓空白对照；不含有效成分的制剂或清水对照，用标准药剂处理的对照。(1)杀虫剂的毒力测定方法1)喷雾法：模拟林间实际防治情况下而设计的喷雾方法，为了减少试验误差，使每一个供试昆虫尽量接受到相同的药量，要求喷雾器有一定的压力，使雾点大小一致，喷雾均匀。2)液浸法：将供试昆虫分别放入不同浓度的稀释药液中浸渍一下，立即取出，放在吸水纸上吸去过多的

3、药液，移入每一组的盛器中，给以新鲜叶片作饲料，盛器上加盖纱布或纱网，饲养于室内，记录室温，观察不同时间下中毒死亡情况。3)药膜法：将药剂喷撒在一定面积的表面上，形成一层均匀的药膜(常用垫有滤纸的培养皿，或将针叶在药液中浸渍一下后取出)，然后让供试的害虫在上面，任其与药膜接触一定时间后，再移回正常的容器中饲养，或就在接触药膜过程中，观察中毒死亡情况。4)点滴法：用定量的药液微滴，滴加在供试昆虫的胸部背面，然后定时观察中毒死亡情况。此法优点是：剂量可用每克虫体接受的药量(常用微克)表示，药量容易控制，试验误差较小；缺点是费时，处理所用的溶剂、点滴的部位和液滴的大小等都可影响毒力。在采用本法时，应当

4、考虑这些因素，尽量取得一致，才能得到准确的结果。(2)杀菌剂的毒力测定方法1)孢子萌发测定法：将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量滴加孢子悬浮液，药液接触后，经一定培养时间，镜检孢子萌发的百分率。2)抑菌圈法：将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀，冷凝后，在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药液的圆形滤纸片(直径6毫米左右)，经定温培养一定时间后，由于药液的扩散作用，使病菌生长受到抑制，即形成抑制圈。测量抑制圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。3)生长速率测定法：在琼脂培养基中加入药液，冷凝后接菌的方法，经24-48小时后，观察菌落生长情况，计算生长速率，并与不含药剂的对照组生长速度相比较

5、。(3)杀虫剂、杀菌剂的毒力表示方法：药剂的杀虫或杀菌毒力，常用致死中量表示，即杀死生物种群半数(50%)所需用的剂量(median lethal dose，毫克/千克)常简写为LD50。如果浓度表示剂量，则为致死中浓度，简写为LC50。杀菌剂则以ED50或EC50来表示，即抑制50%孢子萌发所需的剂量或浓度。在测定药剂毒力时，一般常用一系列的剂量(或浓度)对多组生物分别测定死亡百分率，再以不同剂量与相应的死亡率画成剂量-死亡率毒力曲线。在纵坐标从死亡率50%处引出一平行于横坐标的线与曲线相交。该处的剂量(或浓度)即为LD50(或为LC50)。但是由于这一曲线是S形的，不易精确地求得LD50或

6、LC50的数值，同时用S形曲线也不易与其他曲线进行比较。因此，必须把这一呈S形曲线改成一条直线，常用统计方法是将剂量用对数值表示，将死亡率用机率值表示，就可以将S形曲线改为一根直线，这一根直线常称剂量对数-机率值直线。死亡率查机率(见附表2机率与死亡百分率换算表)。从这一直线的坡度，还可得知供试生物对该种药剂敏感性差异的程度，即坡度越大，表示供试生物个体间差异越小；坡度越小，表示差异越大。室内毒力测定时，在不施药的对照组中，出常出现少数自然死亡的个体，如果自然死亡率在5%以下，一般仅把处理组的死亡率减去自然死亡率即可得到校正死亡率。当自然死亡率达到5%20时，就不能用直接相减的方法，应按照下列

7、公式计算处理组的校正死亡率，如果自然死亡率超过20%时，则该批供试生物不宜作试验或试验应重做。对照组生存率-处理组生存率处理组的校正死亡率(%)=-100%对照组生存率2.林间药效试验林间药效试验的小区或大区的面积大小，取决于地形条件、林木种类、病虫习性和试验要求。用药处理前后，必须调查病虫害为害程度的变化，通常采用随机取样方法调查，常有对角线法、大五点法、棋盘式法、平行线法、分行法等。病虫害发生比较普遍，分布比较均匀，危害较重，可采用五点取样法或棋盘式法；病虫害分布不均衡，形成大小及形状不相同的核心分布型，并自核心向外放射性蔓延，可采用平行线法。取样大小(如标准株数)直接关系到结果的正确程度

8、，应根据具体条件、病虫种类等情况，决定取样大小。例如调查金毛虫虫口密度时，虫口密度大的，抽标准株数少些；虫口密度小的，抽标准株数多些，一般约20-30株。药效试验结果，最常用的是害虫死亡率、虫口减退率、枯梢率等。病害试验结果可用发病率、普遍率、感染指数等表示。一般当害虫虫口密度基本上是一定的，则处理后的虫口数一定减少，而不会增加。对这类害虫试验结果的统计，只要计算死亡率或虫口减退率即可。施药前害虫平均活虫数?施药后害虫平均活虫数害虫死亡率(或虫口减退率)(%)=-100%施药前害虫平均活虫数当自然死亡率在5%-20%，应进行校正。为此，在试验设计时应加不施药的对照区，这样就能计算校正死亡率或校

9、正虫口减退率。施药区死亡率(减退率)-不施药对照区死亡率(减退率)害虫校正死亡率(%)=-100%100-不施药对照区死亡率(减退率)另一类害虫(主要是蚜、螨)。它们的繁殖力很加，不仅对照区虫口数要比施药前增加，就是施药区的虫口数也有减有增。因此，运用上述校正死亡率或校正虫口减退率(%)公式时，凡遇不施药对照区虫口数增加的，则在公式中改用+号。杀菌剂药效试验的调查及结果的处理方法也因病害种类、危害性质而异。如苗期病害，可随机或定点取样，检查一定数量的苗株，计算发病率。根据施药前、后的发病率，计算病害减退率或防治效果。病苗(株、叶、秆)数发病率(或普遍率)(%)=-100%检查苗(株、叶、秆)数

10、有些病害如落针病、叶斑病等，因同一植株上或不同植株上危害程度有轻重之别，可根据落针数或叶上的病斑数，分成若干等级，例如分为0、1、2、3、4、5等六级，级数可按具体情况或多或少。分别检查药剂防治区别和不施药对照区的各级病叶数，计算防治区和对照区的病指情指数。计算方法如下：(级别代表值本级病株数)病情指数(或感病指数)(%)=-100%检查总株数最高级别代表值式中：是各级乘积数值的总和。用病情指数进一步计算防治效果：对照区病情指数(或发病率)-防治区病情指数(或发病率)防治效果(%)=-100%对照区病情指数(或发病率)关于除草剂的除草效果可用下式计算：对照区杂草数量(鲜重，克)-施药区杂草残留

11、量(鲜重，克)防治效果(%)=-100%对照区杂草数量(鲜重，克)%在田间药效试验中如何减少试验误差在进行农药田间药效试验之前，必须制定试验计划和方案，明确试验的目的、要求、方法以及各项技术措施的规格要求，以便试验的各项工作按计划进行，也便于在进行过程中检查执行情况，保证试验任务的完成。田间试验设计的主要目的是减少试验误差，提高试验的精确度，使试验人员能从试验结果中获得无偏差的处理平均值及试验误差的估计值，从而能进行正确而有效的比较。在药效试验中要减少试验误差，就必须对试验误差来源，通过试验设计加以克服。在试验过程中如何减少试验误差应注意以下几个方面：1.试验地的选择选择有代表性的试验地是使土

12、壤差异减少至最少限度的一个重要措施，对提高试验准确度有很大作用。选择试验地要考虑到：a、试验地的地势应平坦，肥力水平均匀一致。B、试验地的作物生长整齐、树势一致，而且防治对象常年发生较重且为害程度比较均匀，且每小区的害虫虫口密度和病害的发病情况大致相同。特别是杀菌剂试验，要选择高度感染供试对象病害的品种进行试验。C、试验地的田间管理水平相对一致，并符合当地的实际情况。D、试验地应选择离房屋、道路、水塘稍远的开阔农田，以保证人、畜安全和免受外来因素的偶然影响。E、试验地周围最好种植相同的作物，以免试验地孤立而易遭受其它因素为害。2.试验药剂处理供试农药和对照农药的剂型和含量要合乎规格，无变质、失

13、效现象，并有详细的标签和说明书，标明生产厂家、出厂日期等。评价一种农药产品不同剂量的药效试验，至少要有供试产品的3个浓度梯度、1个常规标准农药的常用浓度和1个空白对照等5个处理。如供试的农药产品是混配制剂，而且各个单剂已登记过，除设混剂本身3个浓度梯度和1个空白对照外，还应设混剂中各个单剂的常规处理浓度，共6个处理。3.设置重复次数试验设置重复次数越多，试验误差越少。但在实际应用中，并不是重复次数越多就越好。因为多于一定的重复次数，误差的减少很慢，而人力、物力的花费也大大增加，是不值得的。重复次数的多少，一般应根据试验所要求的精确度、试验地土壤差异的大小、供试作物的数量、试验地面积、小区的大小

14、等具体决定。对试验精确度要求高、试验地土壤差异大、小区面积小的试验，重复次数可多些，否则可少些。通常情况下，要求把试验误差的自由度控制在10以上，即(处理数-1)*(重复数-1)10。一般每个处理的重复次数以3-5次为宜。大区试验和大面积示范可不设重复。4.采用随机区组排列为使各种偶然因素作用于每小区机会均等，那么在每重复内设置的各种处理只有用随机排列才能符合这种要求，反映实际误差。例如某种药剂药效好坏究竟是由于其所在小区病、虫密度不均匀，还是药剂本身的原因，就不容易判别了。为了解决这一问题，可将试验地按重复次数划分为数量相同的区组(即重复)，再将每一区组按处理数目划分小区(包含药剂处理和对照

15、区)，然后将每种药剂在区组中随机排列，即每种药剂在区组中仅出现一次。用随机区组和重复组合，试验就能提供无偏的试验误差估计值。5.小区面积与形状小区面积的大小和形状对于减少土壤差异的影响和提高试验的精确度是相当重要的。小区面积的大小，应根据土壤条件、作物种类、病虫草害的生物学特性和试验目的而定。一般要求：a、差异较大的田块，小区面积宜大一些。B、凡植株高大、株行距较大的作物，单位面积上株数较少的作物，种植密度小的作物小区面积可大些，反之可小些。C、活动性强的害虫，小区面积宜大些；活动性较差的如蚜虫等，小区面积可小些。D、测产的试验，小区面积宜大些，否则可小些。E、田间药效试验的小区面积一般为15

16、-50m2，果树每小区不少于3株。产量试验至少为25 m2。2小区的形状一般以长方形尤其是狭长形为好，采用狭长小区能较全面地包括不同肥力的土壤，相应减少小区间的土壤差异，提高精确度，其试验误差比方形小区小。小区的长宽比可依试验地形状与面积、土壤肥力梯度、栽培方式、株行距的大小、小区的多少和大小等决定。如已知试验地的肥力梯度时，小区的方向须使长的一边与肥力变化最大的方向平行，以提高精确度。一般长宽比可在3-10范围内。但小区的宽度应考虑到喷雾器喷施的幅度范围。6.施药时间施药适期掌握不好会使试验前功尽弃，施药时间的不同也会影响试验的准确度。试验田的施药时间应根据不同的防治对象、种群密度消长情况和

17、为害特性及作物和杂草的生育期、药剂的性能等来准确掌握。如杀虫剂试验中，对一些食叶性害虫可以在害虫种群密度较明显上升，尚未造成较大危害之前开始喷药。对钻蛀性害虫或为害隐蔽的害虫，应在害虫种群密度开始上升和为害形成之前喷药，也可用卵量消长作为指示，密度大时可以从卵盛期开始，卵密度低时可在卵峰期或幼虫初孵期施药。病害防治一般以预防为主，应考虑作物的发病程度、作物的感病期、常年的发生时间及气候条件(主要为雨量和湿度)等来确定施药适期，一般掌握发病初期施药为宜。杂草的防除适期主要决定于施药的方法和杂草的生育期和药剂的性能。7.施药方法施药方法不当，施药不均也会影响试验的准确度。农药的使用效果好坏不仅取决

18、于药剂的分散度，也取决于适当的施药方法。农药的田间使用方法以喷雾法、喷法粉、颗粒撒施法等应用最广泛。此外，还有土壤处理、拌种、浸种、浇灌、包扎、涂抹、注射、点滴、熏蒸、烟雾，以及近年来发展的结合地膜覆盖的除草剂使用方法。按照目前农药使用时的药剂形态及主要使用对象，其相应的使用方法参见下表：使用对象液态药剂固态药剂气态药剂气溶胶植物叶喷雾喷粉熏蒸(帐幕法)烟雾法茎杆涂抹、包扎、注射涂抹(悬液)熏蒸(帐幕法)烟雾法根浇灌土壤处理土壤熏蒸-种子浸种拌种熏蒸-土壤浇灌土壤处理土壤熏蒸-储藏场所喷雾消毒粮食拌药、撒粉仓库熏蒸烟雾法8.施药设备施药设备是否完好无损，也关系到试验结果的准确度。在试验前要认真

19、检查施药机械是否完好无损、性能良好、不漏水、无堵塞等现象；试验前要认真清洗施药机械；喷雾器的喷头和喷片孔径是否适合，喷头的型号、孔径的大小要记载；配制药液和称量用的吸管、量杯、天平等要用标准品，称量要准确，使用前要作适当测定。9.调查方法药效试验的调查是农药试验中的一个重要环节。其取样方法和取样多少是影响试验结果的重要因子。限于人力和时间，不可能将试验区的供试对象进行逐一调查，也很难全部调查。因此，只能通过抽取有代表性的样点对总体进行评估。由于各种病、虫、草、鼠和生物学特性不同、被害作物在田间的分布也不同，在取样调查时，必须明确调查的对象、项目和内容，根据调查对象在田间的分布型，采用适当的取样

20、方法和足够的样本数，使调查得到的数据更能反映出客观真实的情况。在田间调查观察病虫草对作物的为害情况，取样通常有以下5种方法：五点取样法、对角线取样法、棋盘式取样法、平行线取样法、Z字型取样法。在进行田间药效试验时，田间调查采用哪种取样方法，应根据该种病虫及其被害作物在田间的空间分布型来确定。在田间药效试验调查中还应注意三点是：一、同一试验要专人调查记载，以减少人为误差。二、在试验地防治其它病虫草害时，各小区使用的农药产品及剂型要一致，且应为同一厂家生产的产品，同时使用剂量、兑水量要相同，并采用相同喷洒工具均匀喷施。三、由于试验地有限，这次试验结束后，最好不要在这块试验地进行下一个试验，因为上次

21、试验时，处理区与空白对照区受害不一致，造成作物的生长也不一致，进行下一个试验常常会出现低剂量防效高于高剂量防效的现象，这样就难以反映药剂的真实效果。在田间药效试验中掌握好以上几个方面，并结合当地实际情况和工作经验，就能很好地在试验中减少试验误差，提高试验的精确度。$田间药效试验结果计算方法(一)杀虫剂药效试验结果的计算杀虫药剂田间药效试验结果，常以死亡率或虫口减退串表示，亦称相对防治效果。但在自然死亡数量大的情况下，还要计算校正死亡率或校正虫口减退串。死亡率或虫口减退率(%)=(防前活虫数-防后活虫数)/防前活虫数100校正死亡率或校正虫口减退率(%)=(防治区虫口减退率-对照区虫口减退率)/

22、(100%-对照区虫口减退率)100(二)杀菌剂药效试验结果的计算杀菌剂田间药效试验结果，常用发病率和病情指数的变化，计算防治结果。发病率或普遍率(%)=病苗(株、叶、秆)数/检查苗(株、叶、秆)100病害防治效果(%)=(对照区病情指数(或发病率)-防治区病情指数(或发病率)/对照区病情指数(或发病率)100(三)化学除草剂药效试验结果的计算化学除草剂田间药效试验结果，常以单位面积内杂草株数、鲜重及结籽实情况的变化，计算除草效果。除草效果(%)=(时照区杂草株数(或鲜重)-处理区杂草株数(或鲜重)/对照区杂草株数(或鲜重)100(四)增产率的计算增产率(%)=(防治区单位面积产量-对照区单位

23、面积产量)/对照区单位面积产量100如发现有药害情况，则应把药害的表现、严重程度分别记载清楚。&农药常识-药剂药效的测定技术摘要：室内毒力测定时，在不施药的对照组中，出常出现少数自然死亡的个体，如果自然死亡率在5%以下，一般仅把处理组的死亡率减去自然死亡率即可得到校正死亡率。当自然死亡率达到5%20时，就不能用直接相减的方法，应按照下列公式计算处理组的校正死亡率，如果自然死亡率超过20%时，则该批供试生物不宜作试验或试验应重做。关键词：药剂，药效，毒力测定测定一种药剂的药效好坏，可通过室内毒力测定和林间药效试验。室内毒力测定主要是测定一种药剂的毒性、毒力或比较几种药剂毒力的大小。室内试验的结果

24、，除可作为药剂的初步筛选的根据外，还可为林间试验提供参考。有时在林间发现的问题必须拿回室内作比较精细的试验研究。林间试验主要测定或比较药剂在林间条件下的药效，其结果比较接近实际情况，为生产防治提供可靠的依据。1.室内毒力测定进行室内试验要注意：供试生物应该是由同一环境下培养得来的，或采自林间同一环境的，在生理、发育上愈一致愈好。供试药剂必须纯净(原油或原粉)，至少要有确切的有效成分含量。在控制的条件下进行试验，施药要均匀一致。试验一般要求每种处理有3-5个重复，每个处理要有50-100头昆虫(菌类孢子一般为在显微镜1010视野内有100个左右，每次计算必须移动玻片检查3次)。各种试验必须设立对

25、照。所设对照有：完全不处理的(在自然状况下的)，即所谓空白对照；不含有效成分的制剂或清水对照，用标准药剂处理的对照。(1)杀虫剂的毒力测定方法1)喷雾法：模拟林间实际防治情况下而设计的喷雾方法，为了减少试验误差，使每一个供试昆虫尽量接受到相同的药量，要求喷雾器有一定的压力，使雾点大小一致，喷雾均匀。2)液浸法：将供试昆虫分别放入不同浓度的稀释药液中浸渍一下，立即取出，放在吸水纸上吸去过多的药液，移入每一组的盛器中，给以新鲜叶片作饲料，盛器上加盖纱布或纱网，饲养于室内，记录室温，观察不同时间下中毒死亡情况。3)药膜法：将药剂喷撒在一定面积的表面上，形成一层均匀的药膜(常用垫有滤纸的培养皿，或将针

26、叶在药液中浸渍一下后取出)，然后让供试的害虫在上面，任其与药膜接触一定时间后，再移回正常的容器中饲养，或就在接触药膜过程中，观察中毒死亡情况。4)点滴法：用定量的药液微滴，滴加在供试昆虫的胸部背面，然后定时观察中毒死亡情况。此法优点是：剂量可用每克虫体接受的药量(常用微克)表示，药量容易控制，试验误差较小；缺点是费时，处理所用的溶剂、点滴的部位和液滴的大小等都可影响毒力。在采用本法时，应当考虑这些因素，尽量取得一致，才能得到准确的结果。(2)杀菌剂的毒力测定方法1)孢子萌发测定法：将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量滴加孢子悬浮液，药液接触后，经一定培养时间，镜检孢子萌发的百分率。2)抑菌

27、圈法：将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀，冷凝后，在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药液的圆形滤纸片(直径6毫米左右)，经定温培养一定时间后，由于药液的扩散作用，使病菌生长受到抑制，即形成抑制圈。测量抑制圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。3)生长速率测定法：在琼脂培养基中加入药液，冷凝后接菌的方法，经24-48小时后，观察菌落生长情况，计算生长速率，并与不含药剂的对照组生长速度相比较。(3)杀虫剂、杀菌剂的毒力表示方法：药剂的杀虫或杀菌毒力，常用致死中量表示，即杀死生物种群半数(50%)所需用的剂量(median lethal dose，毫克/千克)常简写为LD50。如果浓度表示剂量，则

28、为致死中浓度，简写为LC50。杀菌剂则以ED50或EC50来表示，即抑制50%孢子萌发所需的剂量或浓度。在测定药剂毒力时，一般常用一系列的剂量(或浓度)对多组生物分别测定死亡百分率，再以不同剂量与相应的死亡率画成剂量-死亡率毒力曲线。在纵坐标从死亡率50%处引出一平行于横坐标的线与曲线相交。该处的剂量(或浓度)即为LD50(或为LC50)。但是由于这一曲线是S形的，不易精确地求得LD50或LC50的数值，同时用S形曲线也不易与其他曲线进行比较。因此，必须把这一呈S形曲线改成一条直线，常用统计方法是将剂量用对数值表示，将死亡率用机率值表示，就可以将S形曲线改为一根直线，这一根直线常称剂量对数-机

29、率值直线。死亡率查机率(见附表2机率与死亡百分率换算表)。从这一直线的坡度，还可得知供试生物对该种药剂敏感性差异的程度，即坡度越大，表示供试生物个体间差异越小；坡度越小，表示差异越大。室内毒力测定时，在不施药的对照组中，出常出现少数自然死亡的个体，如果自然死亡率在5%以下，一般仅把处理组的死亡率减去自然死亡率即可得到校正死亡率。当自然死亡率达到5%20时，就不能用直接相减的方法，应按照下列公式计算处理组的校正死亡率，如果自然死亡率超过20%时，则该批供试生物不宜作试验或试验应重做。处理组的校正死亡率(%)=(对照组生存率-处理组生存率)/对照组生存率100%2.林间药效试验林间药效试验的小区或大区的面积大小，取决于地形条件、林木种类、病虫习性和试验要求。用药处理前后，必须调查病虫害为害程度的变化，通常采用随机取样方法调查，常有对角线法、大五点法、棋盘式法、平行线法、分行法等。病虫害发生比较普遍，分布比较均匀，危害较重，可采用五点取样法或棋盘式法；病虫害分布不均衡，形成大小及形状不相同的核心分布型，并自核心向外放射性蔓延，可采用平行线法。取样大小(如标准株数)直接关系到结果的正确程度，应根据具体条件