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文档简介
1、大肠杆菌的分离鉴定、药敏实验及生化实验,目的要求,熟悉鉴别培养基的原理 了解大肠杆菌的主要生理生化特性,一、鉴别培养,培养基类别,菌种,分离鉴定-麦康凯培养基,原理:在培养基中含有胆盐,可抑制大部分革兰氏阳性菌的生长,培养基含乳糖,大肠杆菌能分离乳糖,使pH下降(中性指示剂5.5-7.5,红-黄)形成红色菌落,而沙门氏菌和志贺氏菌,不能分解乳糖,菌落小且为无色,术式,两试管斜面移植时,左手斜持菌种管和被接种管,管口相齐,管底放在拇指和食指间,松动两管棉塞,将管口进行火焰灭菌,使其靠近火焰,将接种环深入管内,先在无菌生长的培养基上接触使之冷却,再挑取少量的细菌后,拉出接种环,立即伸入另一管斜面培
2、养基上,勿碰到斜面和管壁,直达斜面底部,从底部开始划曲线,向上到斜面顶端,管口火焰灭菌,塞好棉塞,接种完毕。接种环火焰灭菌后,放下接种棒最后在斜面管壁上注明日期、接种者。置370C,温箱培养,结果判定,鲜桃红色或微红色,菌落中心呈深桃红色 圆形,扁平,边缘整齐,表面光滑,湿润,二、药敏试验,方法:取一菌种,用灭菌的接种环致密划线于琼脂表面(可重复来回划线),用无菌镊子,将各种抗菌药物圆纸片,分别贴于培养基表面。各片距离相等,370C,24h后,观察结果,药敏结果判定,三、生化实验 1糖发酵试验,原理:各种细菌具有不同的酶,有的细菌能分解某些糖类而产酸产气,有的细菌虽能分解某种糖类,但只产酸不产
3、气,有的细菌则不能分解。从而鉴别细菌。 方法:将需要鉴别的细菌纯培养物,分别接种在各种含指示剂的糖发酵管内,将发酵管倒置与370C温箱内培养24h 结果:培养液不变色-无变化() 培养液变为黄色-产 酸(+) 培养液变黄并有气泡-产酸产气(,2 硫化氢试验,原理:某些细菌能分离蛋白质中的含硫氨基酸,生成硫化氢,遇培养基中的铅盐或铁盐,形成黑色的沉淀物。 方法:将需要鉴别的细菌纯培养物,分别接种在硫化氢培养基中,370C温箱内培养24h 结果:培养基变黑为阳性,不产生黑色为阴性。大肠杆菌为阴性,沙门氏菌为阳性,3 硝酸盐还原实验,原理:有些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,在酸性条件下,亚硝酸盐与对位氨基苯磺酸起作用后,在与-萘胺反应,生成红色偶氮化合物。 方法:将被检细菌接种于硝酸钠蛋白胨培养基内,370C温箱内培养24h。 结果:再加
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