浙大版第一章事件及其概率

1、15药物分析课件-第十四章-维生素类药物的分析 第十四章 维生素类药物的分析概 述维生素维持正常生理功能所必需的、微量营养 物质，人体不能合成维生素。必须从外界食物中摄 取。The Discovery of Vitamin维生素的发现是20世纪的伟 大发现之一。1897年,C.艾克曼在 爪哇发现只吃精磨的白米即可患脚 气病，未经碾磨的糙米能治疗这种 病。并发现可治脚气病的物质能用Christiaan Eijkman 1929 诺贝尔生物医学奖水或酒精提取,当时称这种物质为 “水溶性B”。发现简史公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A。1747年-苏格兰医生林德发现柠

2、檬能治坏血病，也就是后来的维C。 1831年-胡萝卜素被发现。 195年-科学家认糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。 1922年-维E被发现 1933年-维E首次用于治疗必需维生素 13种维生素A，维生素B，维生素C，维生素D， 维生素E，维生素K，维生素H（生物素）， 维生素P，维生素PP，维生素M，维生素 T，维生素U，水溶性维生素。分类维生素水溶性脂溶性VitB族(B1、B2、B6、 B12)VitC、叶酸 （VitM）、烟酸、 烟酰胺（VitPP）VitA、D2、 D3、

3、E、K1 等ContentsAB1 Vitamins C D E维生素A的简介 是鱼类肝脏中提取的一种不饱和脂 肪醇，又称鱼肝油。目前主要采用 人工合成。在体内以视黄醇的形式储存，缺乏会 影响视色素的合成，导致夜盲症，视 力减退。结构共轭多烯醇侧链的环己烯全反式黄色棱形，62-64 淡黄色棱形，57-58无定型，28-29易发生脱氢、脱水、聚合反应H3C CH39 8CH37 6 5 4CH33 1 2CH2OHCH3去氢维生素 VitA2CH2H3CCH39 8CH37 6 5 4CH33 2 1CH3去水维生素 VitA3性质溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶

4、，在水 中不溶。 ? 不稳定性：含有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被 紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。?2 VitA ? ? ? ? ? ?紫外线、O 、氧化剂 O VitA醛 ? 环氧化物 ? ? VitA酸或有金属离子存在时氧化 临床使用时成酯后，溶于植物油中；阴凉干燥处保 存，还需加入N2或一定抗氧剂提高稳定性。?紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大吸收，可用于鉴别。H3CCH39 8CH37 6 5 4CH33 1 2CH2ORCH3max相对生物效价顺反异构维生素A新维生素Aa325.5328100%75%

5、全反式2顺新维生素Ab 320.5新维生素Ac 310.5 异维生素Aa 异维生素Ab 323 32424%15% 21% 24%4顺2，4顺 6顺 2，6顺?天然维生素A主要是反式?与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳定的蓝色VitA ? ? ? 蓝色 ? 紫红CHCl3可用于鉴别和含量测定SbCl 3鉴别实验（一）Carr-Price反应与三氯化锑呈色反应三氯 三氯甲烷SbCl3化锑不稳定 的蓝色Vit A蓝色紫红色CHCl3(无水无醇)+CH 2-SbCl 5RCOO蓝色+CH 2-SbCl 5 RCOO紫红条件： 无水、无醇SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失要求仪器

6、和试剂必须干燥无水， 三氯甲烷必须无醇（二）UV法VitA ? ? ? ? ? ? ? ? 去水VitAmax为326nm 一个吸收峰H3C CH39 8无水乙醇HClCH37 6 5 4CH33 1 2max为350390nm 三个吸收峰CH2ORCH 2CH3五个共轭双键六个共轭双键最大吸收峰红移维生素A在无水乙醇溶 液中溶解,立即进行UV 扫描,在360nm处有一最大吸收峰.当盐酸水浴加热30s,迅 速冷却,此过程发生脱 水反应,扫描时出现三 个吸收峰（三）TLC法展开剂： 环己烷-乙醚（80：20）BP对照品法 显色剂 三氯化锑USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值均显蓝色斑点，

7、维生素醇（ Rf= 0.1） 维生素醋酸酯（ Rf= 0.45） 维生素棕榈酸酯（ Rf= 0.7）杂质检查? 酸值取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中， 加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定 液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本 品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴 定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大 于2.0（附录VIIH）杂质检查? 过氧化值取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振 摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果 用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠

8、滴定液 （0.01mol/L）不得过1.5ml。含量测定维生素A的测定 CHP收载三种UVHPLC三氯化锑法（一）UV法（三点校正法）维生素A在325328nm的波长范围内有最大吸收，可用紫外 法进行含量测定但维生素A原料常混有杂质如：杂质的吸收? ? ? ? ? ? 对维生素A有影响的杂质主要有以下几种： (1)VA2 (345350nm)和VA3 (2)维生素A的氧化产物 (3)维生素A在光照下产生的无活性的聚合物 (4)维生素A的异构体等。 以上这些杂质在310nm-340nm的波长范围内有吸收， 干扰维生素A的测定。维生素A的氧化产物维生素A在光照下产生的无活性的聚合物1. 三点校正法

9、? 即在三个波长处测得吸光度，在规定条件下以校正公 式进行校正，再进行计算，消除干扰，求得维生素A 的真实含量。2. 测定原理? 杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且 随波长的增大吸收度减小； ? 物质对光的吸收具有加和性。3. 波长的选择? ?1 ? ?2 VitA的?max（如VitA酯 328nm） ?3 分别在?1的两侧各选一点第一法等波长差法?3 ? ?1 ? ?1 ? ?2测定对象：VitA醋酸酯时，ChP2015规定?1 ? 328nm, ?2 ? 316nm, ?3 ? 340nm ? ? 12nm第二法等吸收比法6 A?2 ? A?3 ? A?1 7测定对象：

10、 VitA醇时，ChP2015规定?1 ? 325nm, ?2 ? 310nm, ?3 ? 334nm合成的或天然的维生素A 均为酯式维生素A，根据供试品中干扰杂质的多少，可采用： （1）直接测定法 （2）皂化法4. 测定方法（1）基本步骤A选择，A328测定或A328校正A % % 求 ?1cm ( 样 ) ?1cm ( 样 ) ? C (%) ? l求效价% ? E ? 换算因数 效价（IU / g） (样 ) 1cm ( 样 )求标示百分含量（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定） 1）方法 取样品适量，精密称定，加环己烷溶解在300、316、328、340、360

11、nm测吸收度，以确定最大吸收波长（ A328或A328校正）。a.计算吸收度比值（Ai/A328）：与中国药典的吸收度比值相 比较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02。b.判断法 ? 最大吸收波长在326-329nm之间，且5个波长下的绝对值 差值均不超过0.02时，可直接用328nm波长处的测得的吸 收度值求得吸收系数。最大吸收波长在326-329nm之间，计算5个波 长下的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应 按以下的方法进行判断：A328校正=3.52（2 A328 A316-A340）（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素 A醋酸酯的测定） 1）方法 取样品适量，精密称

12、定，加环己烷溶解 在300、316、328、340、 360nm测吸收度， 确定A 2）计算 a.吸光系数E1%1cmb.求效价（IU/g）：效价指每g供试品所含维生素 的A的国际单位数。 1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯 IU/g=E1% 1cm? 换算因子效价（IU / g） 换算因子 E1% cm ( 纯 , ? )max每克纯品相当多少个单位（IU）? 1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯1 ? 10 ?g 效价（IU / g） ? ? 2907000 0.344?g效价（IU / g） 2907000 换算因子 ? % E1cm ( 纯 ) 15306? 19001IU

13、? 0.300?g维生素A 醇1 ? 10 ?g 效价（IU / g） ? ? 3330000 0.300?g效价（IU / g） 3330000 换算因子 ? % E1cm ( 纯 ) 18206? 1830c.求维生素A占标示量的百分含量A ? D ? 换算因子 ? W 标示量（%） ? ? 100% W ? 100 ? L ? 标示量AA328或A328校正 D供试品的稀释倍数 换算因子维生素A醋酸酯在环己烷中1900； 维生素A醇在异丙醇中1830 W为平均内容物重量；W为称取内容物重量（供试品取用量） L 比色池厚度 标示量为处方中规定的每粒中所含的国际单位数VitAD胶丸中VitA

14、的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异 项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至 250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密 量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至 刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波 长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为A300 A316 A328 A340 A360：0.354 ：0.561 ：0.628 ：0.523 ：0.216A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328：0.555 ：0.907 ：1.000 ：0.811 ：

15、0.299求本品中维生素A的含量？A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328：0.564 ：0.893 ：1.000 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299= = = = =+ 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04A328?校正 ? ? 3.52?2 A328 ? A316 ? A340 ? 3.52?2 ? 0.628 ? 0.561 ? 0.523? ? 0.605f ?A328 ( 校正) ? A328 A328? 100%? ?3.7% ? (?15% ?3%)A 32

16、8?校正? ? 1900 平均丸重 标示量% ? ? ? 100% C(g / 100ml ) 标示量 0.605 ? 1900 0.08262 ? ? ? 100% 2 1 10000 0.2399 ? ? ? 100 250 20 ? 99.0%（2）第二法（等吸收比法） 皂化法、6/7A法 适用于维生素A醇 第一法无法消除杂质干扰时用此法脂溶性 ?VitA醋酸酯 ? VitA醇 ? KOH /乙醇 S ? ? ? 皂化液? ? ?植物油 ? 甘油和脂肪酸盐 ? 水溶性?乙醚提取 ? ? 除去植物油的干扰 ?挥干乙醚 ? ? 异丙醇 溶解 ? 稀释至915 IU / ml ? 于300、

17、310、 325、 334nm处测Ai? 判断?max是否在323327nm之间是 否? 计算A300A325取未皂化样品采用 色谱法纯化后再测 定? 判断 A300 /A325 是否大于0.73是 否取未皂化样品采用色谱 法纯化后再测定? 计算A325(校正)f ?A325 ?校正? ? 6.815 A325 ? 2.555 A310 ? 4.260 A334A 325( 校正) ? A 325 A 325? 100%A325?校正?3%A3250fA325?校正?3%高效液相色谱法 流动相：正己烷异丙醇（9973） 检测波长：325nm 系统适用性实验考察分离度 是否能将维生素A醋酸酯顺式

18、和反式分开三氯化锑比色法标准曲线法VitA ? SbCl 3 ? 蓝色max 618nm620nm优点： 简便 快速呈色不稳定 （5 10s内）H 2O水分干扰SbCl 3 ? ? ? SbOCl ?缺点： 与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性小结维生素A共轭多烯醇侧链的环乙烯 性质：脂溶性；不稳定，可与三氯化锑呈色 鉴别：三氯化锑反应；UV；TLC 含量测定：紫外-分光光度法（三点校正）三氯化锑比色法ContentsAB1 Vitamins C D E维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消 化的正常功能。主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。

19、维生素B1（盐酸硫胺）结构与性质H3C3 4 2 1 N 6 5NNH2 CH22 1S5OHN34CH3氨基嘧啶环亚甲基 噻唑环Cl , HCl氯化4-甲基-3(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基-5-（2羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐第二节 维生素B1的分析结构与性质性质 1. 溶解性维生素B1为白色结晶或结晶性粉末 易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚 水溶液呈酸性2.硫色素荧光反应噻唑环 ? ? 开环并与嘧啶环上氨基环合 ?铁氰化钾氧化 ? ? 硫色素 ?正丁醇 ? 蓝色荧光OH ?3.UV噻唑环、嘧啶环共轭双键 12.5g/ml盐酸溶液（9 1000）max = 246nmE1% 1cm 40

20、6 4364.与生物碱沉淀试剂反应杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应， 生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。5.氯化物的特性6.硫元素反应与NaOH共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑 色沉淀；7.红外光谱特征二、鉴别试验（一）硫色素荧光反应为维生素B1所特有CH3 N N NH2 CH2 N ClS CH2CH2OH HCl CH3NaOHCH3 NCH3 N NNNH2 O CH2NC NH S NaCH2CH2OH CH3H2OS Na NCH2CH2OH CH3CH3 NNN NS NaCH2CH2OH CH3环合CH3 N N H N N S CH2CH2OH CH3O 2HC

21、H3 N N N N S CH2CH2OH溶于丁醇，显蓝色荧光硫色素CH3Thiochtome维生素B1沉淀反应VitB1 ?K 2 HgI4 ? ? ?淡黄 ? B ? H 2 HgI 4 ? + HH B 2 ? SiO 2 ?OH ?2 硅钨酸 ? ? ? ?白色 + H ? 12WO 3 ? 4 H 2 O 苦酮酸 ? ? ? ?白色扇形 + H? ? ? ?红色 ? B ? HI ? I 2 ? +I 2 ? KI硫元素反应和氯化物反应NaOHVitB ? ? ? ? ? NaS ? ? ? ? ? PbS ? ?AgNO ? NH ? ? H ? OS元素反应 Pb ?Ac ? ?

22、 ? ? AgCl ?白 ? ? ? ? ? HNO3 ? ? HNO3? ? ? Cl ? ? ? ? ? ? ? 蓝H+Cl-反应MnO ?KI ? 淀粉试纸三、含量测定非水溶液滴 定法? Nonaqueous Titrimetry紫外分光光 度法? UV硫色素荧光 法? Thiochrone Fluoremetrywww.themegallery. comCompany Logo非水溶液滴定法CH3 N N NH2 CH2 N ClS CH2CH2OH HCl CH3?B? Cl ? ? HCl ? ? HClO ? Hg （Ac ） ? ? ? ? ? ?B ? ClO ? ? ? H

23、ClO ?高氯酸滴定液（0.1mol/L）的滴定度(T)为16.86mg/ml。 喹那啶红亚甲蓝 (紫红天蓝)? V样 ? V空 ? T ? F 含量% ? ? 100%W紫外分光光度法维生素B1分子中具有共轭双键，在紫外区有吸收24610.1M HCl 2H20 3H3PO4 buffer 4alcohol232255注意维生素1的紫外吸收峰随溶液的pH 变化而不同：? pH2.0时，最大吸收波长在246nm处； ? pH7.0时，2个吸收峰：232233和266；可采用差示分光光度法，消除背景和 辅料的干扰，测定其含量；维生素B1片的测定吸收系数法ChP片剂、注射剂1% E1cm = 42

24、1A = ECL（每片）相当于标示量的%= A D 平均片重 1 % 100 W 标示量 E1 cm 100 %硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应1、原理铁氰化钾VitB? ? ? ? ? 硫色素 ?NaOH? ? ? 荧光异丁醇2. 方法VitB1对照液铁氰化钾 NaOH硫色素异丁醇ex-365nm 荧光 em-435nm+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇 + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇S d A b供试液A?b 5ml 供试品溶液中维生素 B1的 g数 ? ? 0 .2 ? 5 S?d3、（ 1）特点? 灵敏度高，线性范围宽

25、。? 专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用于制剂 （2） 分析，体液分析等，但操作比较复杂，受干扰因素多。 ? 本法中使用的氧化剂，除铁氰化钾，尚可用氯化汞或 （3） 溴化氰小结维生素B1（盐酸硫胺）氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成季铵盐。 性质：水溶性；硫色素反应；可与生物碱沉淀剂反应 鉴别：硫色素反应；沉淀反应；Cl、S反应 含量测定：非水滴定；紫外分光光度法； 硫色素荧光法ContentsAB1 Vitamins C D E维生素C是胶原蛋白形成所必需的， 有助于保持间质的完整，维生素C 缺乏可导致齿龈肿胀，出血，皮下瘀点，关节及肌肉疼痛，毛囊角化，严重缺乏可引起坏 血病。所以维

26、生素C又称为抗坏血酸。结构与性质L-抗坏血酸L-去氢抗坏血酸(有生物活性)L-二酮古罗 糖酸无生物活性1. 溶解性 易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶 于三氯甲烷或乙醚 2.酸性 一元酸H CH 2OH 6 C OH 5 O4 3 2 1C3OH的 pKa = 4.17 C2OH的 pKa = 11.57O OHHO3. 旋光性手性C（C4、C5）含有四个光学异构体 L(+)抗坏血酸 活性最强 比旋度 +20.5+21.5CH OH 2 6 H C5 OH * O*4 3 2 1O OHHO4.还原性CH2OH H C OH O HO二烯醇结构CH 2 OH HO CH CHOHO OHC

27、H 2OHH+COH-O O有活性H C OH O O OCO OCOONa H有活性无活性与碱反应 5. 水解反应 弱碱中生成单钠盐， 强碱中水解? ? 单钠盐? ? ? ? ? 酮酸盐NaOH 水解Na2CO3CH 2 OHNa2CO3CH2OH H C OH O HOH C OH O NaOO OHHOCH 2 OH CH CHOHO OH? ? ?NaOHC CO OCOONa6. 具糖的性质 结构与糖类相似糖类的显色反应H? 脱水五碳糖维生素C糠醛 吡咯 ? ? ? ? ? 显色 糠醛衍生物VitC ? ? ? ? ? 糠醛 ? ? 蓝色H? 脱水 吡咯507. UV特征维生素C具有

28、共轭双键CH 2OH 6 H C OH 5 O4 1 3 2O OH? ?max 243nm ? ? ?max 265nmOH 1% E1 cm ? 560?H?HO鉴别试验 利用还原性：与氧化剂的反应VitC ? ? 去氢抗坏血酸CH2OH H C OH O HOO ? ?OO CH 2 OH H C OH O OO OOH（一）与AgNO3反应黑色去氢抗坏血酸（二）与2，6 - 二氯靛酚反应2， 6 ? 二氯靛酚 ? ? 无色氧化型Cl HO Cl N OVitC还原型Cl HO Cl H N OH蓝色 (碱性)玫瑰红色 （酸性）无色（三）与其他氧化剂反应与碱性酒石酸铜反应碱性酒石酸铜 ?

29、 ? ? Cu ? O ? 红砖红色沉淀VitC与KMnO4反应KMnO ? ? ? Mn ? ? 试剂褪色VitC与磷钼酸反应? ? 钼蓝 磷钼酸 ?VitC（四）薄层色谱法（五）糖类反应维生素C可在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热至50 产生蓝色CH2OH O CH2OH O H C OH O OH HO H C OH OCH2OHH2OHO H ON HCHOH(CHOH)2C OC OOH-CO2NH2O+ ON CH50O-3H2OCHOCH2OH CH OH (CHOH)2 C O H蓝色糠醛戊糖（五）紫外光谱法BP20100.01mol

30、/L HCl? max ? 243nm1% E1cm ? 545 585杂质检查 （一）溶液的澄清度与颜色检查控制有色杂质维生素C脱羧 空气、光线、温度 高于或低于pH.0-6.0内酯环水解糠醛缩合呈色维生素C（二）铁、铜离子原子吸收分光光度法（三）草酸的检查?草酸与金属离子作用形成沉淀；所以对Vc的原料，尤其是注射液，要进行草酸检查；?加入CaCl2，比浊法；（二）铁、铜离子 原子吸收分光光度法四、含量测定碘量法 维生素C 二氯靛酚法 紫外分光光度法 维生素C制剂 高效液相色谱法（一）碘量法 原理：利用Vc强的还原性CH 2OH H C OH O HOO OH? I?HAcCH 2OH H

31、C OH O O+ 2 HIO O指示剂 淀粉指示液2、方法 原料药取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷 水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液 1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至 溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。3、注意事项 （1）新沸冷H2O赶走水中O2， 减少O2的干扰 （2）酸性环境 稀醋酸 减慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定（4）附加剂干扰的排除 片剂 过滤 注射剂 抗氧剂丙酮甲醛Na2SO3 Na2S2O3NaHSO3 Na2S2O5（二）2，6 - 二氯靛酚滴定法 1.

32、原理Vit CO N 玫瑰红 有氧化性 ClHO H N 无色 还原型酚亚胺 ClCl OHH+去氢Vit CCl OH自身指示终点快速滴定，专属性强，用于含Vit C的制剂与食品分析2. 方法样品 空白 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?HPO 3 ? HAc 二氯靛酚液V样 V空3.注意事项 （1）酸性环境（2）快速滴定HPO3-HAc 稳定VitC 2min内防止其他还原性物质干扰 （3）亦可剩余比色测定二氯靛酚 ? ? 测A（定量过量） （测剩余染料）VitC（4）二氯靛酚不稳定，须临用前配制并标定配制方法：NaHCO3 42mg+水50 ml，加二氯靛 酚钠二水合物0.5g +水

33、200 ml,过滤，即得。 标定方法：用干燥的维生素C对照品进行标定专属性强，多用于含 Vc的制剂和食品的分析（三）高效液相色谱法人血浆中VitC浓度的HPLC法测定1、色谱条件2、标准溶液的制备 3、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法 4、方法学考察 5、测定标准溶液制备：? 取V C对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加 10%偏磷酸稀释至刻度，得维生素C储备液浓度为 1mg/ml，置冰箱中2保存，3日内可用。血浆样品预处理：? 取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中， 3000rpm离心5min；取血浆0.5ml，加入0.5ml 10%偏 磷酸溶液，涡旋混合0.5min，离心

34、，分取上清液，置 冰箱2贮存，直至测定。稳定性考察：? VC在血浆中不稳定，在5%偏磷酸溶液中也 难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离 和处理时间。样品测定：? 每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条 标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双 样本质控样品。小结维生素C（L抗坏血酸） 烯二醇结构 性质：水溶性；酸性；旋光性；还原性；水解性 糖类性质；紫外吸收特性 鉴别：硝酸银反应；二氯靛酚钠反应； 氧化反应；TLC；糖类反应；紫外 杂质检查：澄清度与颜色检查 铁、铜离子检查 草酸检查 含量测定：碘量法；二氯靛酚滴定法； 高效液相色谱ContentsAB1 Vitamins C D E第四节维生

35、素D的分析Function?促进钙、磷的吸收； ?促进骨骼和牙齿的正常生长； ?调节柠檬酸的代谢Sources ? Sunlight ? Foods ? Fortified Milk ? Fish OilsDeficiency ? 佝偻病 ? 牙齿松动 ? 鸡胸 ? 骨质疏松 ? 脚成弓形维生素D是一类抗佝偻病维生素的总称，目前有10 多种，都是甾醇衍生物。胆甾醇-2HHO7-脱氢胆甾醇维生素 D3 (胆骨化醇)UVHOB HO麦角甾醇维生素 D2(麦角骨化醇)UVCH3 CH2 HO H HHHCH3CH3 CH3CH3 CH2 HHHCH3CH3 CH3HCH3 HO H维生素D2维生素D

36、3维生素D2、D3无色针状结晶或白色结晶性粉末； 无臭，无味；遇光或空气均易变质。?溶解性:维生素D2在三氯甲烷中极易溶解,在丙酮乙醇乙醚中易溶；维生素D3在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。?不稳定性:毒性增强.含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。?旋光性:有五到六个手性碳原子,均具有旋光性.维生素D2 6个手性碳原子 维生素D3 5个手性碳原子CH3 CH2 HO H H H H CH3 CH3 CH3 H CH3 HO H CH2 H CH3 H H CH3 CH3 CH3?显色反应甾类化合物 醋酐氯仿溶液硫酸黄色红色紫色绿色?

37、紫外吸收特性无水乙醇 265nm 1% E 维生素D2 1cm为460490 维生素D3 E1% 为 465 495 1cm二、鉴别试验（一）显色反应 1与醋酐-浓硫酸反应 氯仿溶液醋酐黄色红色紫色绿色硫酸2与三氯化锑反应 本品1,2-二氯乙烷 三氯化锑试液橙红色粉红色3其它显色反应 维生素D三氯化铁二氯丙醇 乙酰氯橙黄色 绿色（二）比旋度鉴别 无水乙醇溶液维生素D2维生素D3比旋度为102.5至107.5比旋度为105至112（三）其它鉴别方法薄层色谱法、HPLC法制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱（四）维生素D2、D3的区别反应红色max570nm维生素D2 96%乙醇 维生素D3 10

38、ml取0.1ml 和85%硫酸5ml乙醇1ml黄色 max495nm三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查维生素D290%乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀（二）前维生素D的光照产物（三）有关物质检查四、含量测定含量测定USP34-NF29BP2010 光谱法化学法色谱法微生物法化学法色谱法Ch.P 2010NP-HPLC正相高效液相色谱法 （一）维生素D测定法 含量以单位表示每单位相当于维生素D 0.025g注意：计算的是维生素D及前维生素D经折 算成维生素D的总量固定相：硅胶 ? 流动相：正己烷正戊醇（997：3） ? 检测波长：254nm?第一法：用于无维生素A醇及其他干扰的供试品

39、第二法：(1)皂化提取 ;(2)净化用色谱柱系统分离收集维生素D，得供试品溶液 B;(3)按第一法进行测定。 第三法：当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后，前维生素D峰仍受 干扰时，采用此法。小结维生素D抗佝偻病维生素的总称 性质：脂溶性；不稳定；旋光性； 显色反应；紫外 鉴别：显色反应；比旋度； VD2、VD3区别 杂质检查：麦角甾醇； 前维生素D光照产物；有关物质 含量测定： 三法Contents主要讲解AB1 Vitamins C D E第五节 维生素E的分析维生素E早在20世纪20年代就被人们 发现，Evans和他的同事在研究生殖 过程中发现，酸败的猪油可以引起大 鼠的不孕症。

40、是与生育有关的维生素的总称 1936 年分离出结晶体 1938 年被瑞士化学家人工合成维 生 素 E 胶 囊维生素E的显微照片维生素E类结构与相对活性名称 -生育酚 -生育酚 -生育酚 -生育酚R1 CH3 CH3 H HR2 CH3 H CH3 H烃链 C16H33 C16H33 C16H33 C16H33相对活性 1.0 0.5 0.2 0.1-生育酚CH3HC16H270.5维生素E的结构-生育酚醋酸酯? 2R*(4R*,8R*)-3,4-二氢-2,5,7,8-四甲基-2(4,8,12-三甲基十三烷基)-2H-苯并吡喃-6-醇醋酸酯生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10 （天然品） （合成品）维生素E的性质? 性状:黄色或金黄色粘稠状透明液体 ? 脂溶性:溶于丙酮、乙醇、乙醚或植物油等有机溶剂中 ? 水溶性:不溶于水? 稳定性:无氧时对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，遇光可被氧化，色渐变深，H ? orOH ?VitE ? ? ? ? 生育酚 醌型化合物 ? ? UV：乙醇溶液中max284nmO 二、鉴别试验（一） 硝酸反应维生素E在硝酸酸性条件下，水解生成生育酚水解CH 3 H 3C HO CH 3 OCH 3CH 3 C 16 H 33HNO3H 3C O OOCH 3 C 16 H 33生育酚生育红（橙红色）（二） 三氯化铁联吡啶反应VitE