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文档简介

1、,免疫浊度的测定,抗原抗体在特殊缓冲液（PEG 6000）中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。 当抗原抗体相遇后立即结合成小复合物（19S），几分种到几小时才形成可见的复合物（19S）。作为快速比浊测定，这种速度太慢，加入聚合剂（或促聚剂）可加速大的免疫复合物形成。目前促聚剂多用聚乙二醇（MW60008000），浓度约为4。 聚乙二醇(PEG)是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲水性，可以破坏溶液中蛋白质表面的水化层，使蛋白质沉淀，即使浓度很高也不会引起蛋白质变性。,实验原理,免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪

2、测定（nephelomitermeasure）。本实验采用前者。,当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时，被其中的免疫复合物反射、吸收而减弱。在一定的范围内，透射光吸收的量（吸光度值）与免疫复合物量呈正相关，而免疫复合物的量与相应抗原和抗体的量呈函数关系，当抗体量恒定时，根据所测吸光度值（与一系列的抗原标准品对照）即可计算出待测抗原量。,A=KLC,待测血清（用生理盐水1：50倍稀释） 抗人IgG血清（用4.3PEG已经1：20稀释） IgG标准（原浓度11.43mg/ml） 生理盐水 加样枪、一次性枪头 分光光度计、37水浴箱,主要试剂与器材,注：2人/组；一次性的物品请适量取材，实验结束

3、时，多余的请放回原处。,取试管分别编号 IgG标准稀释（加样单位） 每管中加入1.5ml抗人IgG （用4.3PEG已经1：20稀释） ，充分混匀 37 水浴30min 各管混匀后用分光光度计测吸光度值（492nm，用4.3PEG稀释的抗人IgG调零）。,实验步骤,记录各管的吸光度值。 用IgG浓度为横坐标，相应吸光度值为纵坐标，制作标准曲线，求出待测血清中的IgG含量。,实验结果,测吸光度前，要将试管中的液体充分混匀 。 抗人IgG血清要求效价高（双扩效价1：32）而且特异性强 。 标准曲线必须与待检样品同时制备，不可一次做成，反复使用 。,注意事项,抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物，造成测定误差，测定单克隆蛋白时这种更易出现。 应维持反应管中抗体蛋白量始终过剩，这个值要预先测定，使仪器的测定范围在低于生理范围

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