医学交流课件：CD133+细胞治疗糖尿病足临床与基础研究

1、CD133+细胞治疗糖尿病足: 临床与基础研究,2016-12-24,提 纲,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF临床疗效评价-5年 3. 自体CD133+ EPCs治疗DF I、II期临床试验结果 4. DF相关基础与机理研究,http:/,1.1 DF 定义及发病机制,定义： 糖尿病足是神经病变使下肢保护功能减退， 大血管和微血管病变使动脉灌注不足致微循环障碍， 发生溃疡和坏疽的疾病状态。分早、中、晚三期,1.2 现有治疗方法及问题,A. 药物治疗 代谢控制 降糖药物、胰岛素 扩血管和活血化瘀 前列腺素E、西洛他唑、低右、丹参 神经病变治疗 维生素B族 抗生素使用 合并感染时,http:

2、/,Tang T, Ye M, Pei E, Li M. Genotype-guided dosing of coumarin anticoagulants: a meta-analysis of randomized controlled trials. J Cardiovasc Pharmacol Ther 2015 Jan 8. pii: 1074248414565666. PMID:25575537(IF, 3.9,1.2 现有治疗方法及问题,B. 外科手术 切开取栓/内膜切除 局限性腔内血栓，完全闭塞 搭桥（Bypass） 长段/多发性血栓，完全闭塞 人造血管/自体血管（大隐静脉）

3、截肢 不可挽回的肢体坏死，防止感染蔓延 清创及皮瓣移植,重建大血管循环,http:/,1.2 现有治疗方法及问题,C. 腔内治疗技术（介入治疗） 球囊成形术 髂动脉膝下动脉足部 支架成形术 髂动脉腘动脉，部分胫腓干 血栓旋切 大血管 腔内激光治疗 大血管,http:/,提 纲,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF临床疗效评价-5年 3. 自体CD133+ EPCs治疗DF I、II期临床试验结果 4. DF相关基础与机理研究,http:/,2000年4月，首例PTA,DF临床疗效评价,同济大学标准-指标,同济大学“五点法皮温” （髌骨下缘、外踝、足背、足底、额温） ABI，TBI（正常、轻度

4、、中度、重度） CTA，主髂动脉、股腘动脉、膝下动脉 （单发，双支病变、多发病变） 微泡造影（灌注指数、达峰时间、分布曲线等） 白介素水平（2,4,6,8,12） TFT，（趾/指氧饱和度比值,同济大学标准-分型,0 期，正常（1.79%，4/223） I 期， 轻度（4.03%，9/223） II 期，中度（87.44%，195/223） IIa 期，35/223 IIb 期，76/223 IIc 期，84/223 III 期，重度（6.72%,15/223,时间：2009.01.01-2014.12.31（5年） 累计：223例 通畅率： 12月，18月，24月，36月，48月，60月，6

5、0月 89%， 81%，76%， 45%， 30.3%，19.1%，10.2% 治疗次数：累计，426次， 平均：1.91次（1-7次） 死亡原因:感染/心衰，79例,DF临床疗效评价,糖尿病外周血管病介入治疗的几点认识（述评） 介入放射学杂志 2006：15（7）：391,II型糖尿病患者下肢动脉病变血管造影的特征 上海医学 2007；30（12）：897,糖尿病膝下动脉病变经皮腔内血管成形术短期疗效（通讯作者） 上海医学 2010;33(3):287-289,糖尿病足早期诊断及其疗效评价的研究进展 （通讯作者） 临床放射学杂志 2014；33(11)；1783,DF临床疗效评价,越来越深，

6、越来越烦,1.2 现有治疗方法及问题,技术问题：1.血栓脱落,http:/,1.2 现有治疗方法及问题,技术问题： 2.近段再次狭窄 3.支架内再狭窄,1.2 现有治疗方法及问题,全身多发性血管狭窄闭塞,1.2 现有治疗方法及问题,方法存在问题： 适应症局限性 膝下动脉及足部动脉弓 高再狭窄率Eur. J Vasc. 45:673681 1 年再狭窄率: 9%12% 2 年再狭窄率: 15% 37,http:/,提 纲,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF临床疗效评价-5年 3. 自体CD133+ EPCs治疗DF I、II期临床试验结果 4. DF相关基础与机理研究,http:/,http

7、:/,3.1 Why CD133+ EPCs ,临床实用性 取 材外周血管采血即可 细胞处理简便高效， 磁珠分选获得 免疫排异自体细胞无排异 医学伦理国家法律、法规,3.2 CD133+ EPC治疗质控,采血：无菌，输血专业设备及储存袋,100ml，动脉血 分选得到细胞量： 10.443.78107（ 5.20-15.20107） 细胞活性： 96.981.16%（ 95.00-98.70%） 细胞回输过程中， 无副反应出现 （皮肤瘙痒、心悸、喘息、血压下降、意识改变,3.2 CD133+ EPC治疗质控,细胞分选与检测：同泽和济GMP认证实验室 检 测 标 准,3.2 CD133+ EPC治

8、疗质控,出具检测报告,http:/,3.2 CD133+ EPC治疗质控,回输：无菌操作，注射泵，30持续匀速,3.3 CD133+ EPC体外示踪,动物模型：裸鼠下肢缺血模型 实验细胞：hNIS基因标记人体CD133 细胞数量：约5X107 标记核素：131I 0.5mCi 显像方法： 尾静脉注射进裸鼠体内， 2h后尾静脉注射131I 0.5mCi, 2h后SPECT，131I特异性浓聚甲状腺和下肢缺血损伤处,CD133+EPCs，能特异性附着在损伤血管和组织,3.4 期临床安全性评价,时 间：2012.122013.06 病 例 数： 10例 不良反应：无 肝 功 能：ALT,Alb,Bi

9、l治疗前后无差异 肾 功 能：Scr治疗前后无差异 血液系统：RBC,WBC,PLT治疗前后无差异,http:/,RBC,WBC,PLT,3.4 期临床安全性评价,安全无副作用,肝肾功能：Alb，ALT，Tbil，Scr,3.4 期临床安全性评价,安全无副作用,病例纳入/排除标准,糖尿病史5年 年龄75岁 下肢缺血2Rutherford分级4 ABI 0.7 DSA明确患肢腘动脉远端的胫前、胫后和腓动脉，其中1支或2支动脉狭窄超过50（含修复后,血红蛋白10 mg/dl，肌酐清除率30 ml/min 曾经接受过干细胞治疗，患有精神疾病 治疗随访期间，餐后2hr血糖监测连续4周超过11.1mmo

10、l/L 治疗随访期间，任何原因导致终止糖尿病基础治疗 治疗随访期间，心脑血管疾病，心功能III-IV级 治疗随访期间，患肢外伤导致截肢 治疗随访期间，终止常规抗血小板治疗 治疗随访期间，出现凝血功能障碍 患有或在治疗随访期间，罹患恶性肿瘤,纳入标准,排除标准,3.5 期临床阶段性结果,CRF表格/知情同意书,3.5 期临床阶段性结果,伦理委员会批件,3.5 期临床阶段性结果,基本情况：II型糖尿病，治疗组25例，对照组27例 年龄：55-83岁；男：7例；女：7例 随访日前：2012.12.18-2014.12.30 平均年龄： 69.779.66岁 下肢疼痛缓解：24/25 Vs. 23/2

11、7 下肢寒冷好转：23/25 Vs. 24/27 溃疡愈合：2/2 Vs. 2/5 ABI提高：24/25 Vs. 21/27 保肢：25/25 Vs. 23/27,http:/,对照组， 南医大南京医院同期治疗患者,保肢时间COX回归分析： 细胞治疗组优于对照组 （OR 1.23，95%CI: 0.575-2.627，P=0.594,随访结果,3.4 期临床阶段性结果,随访结果,3.5 期临床阶段性结果,3.5 期临床阶段性结果-典型病例,DF，无主干病变： CD133+ EPCs only 女，68岁，糖尿病5年，拜糖平控制血糖在7.0mm/L，右下肢行走麻木1月；出现行走600米后出现右

12、足麻木 查体： 右足背动脉搏动稍减弱，双足未见溃疡 右足神经感觉稍异常（10g尼龙丝检查) ABI（踝肱指数）:0.8,3.5 期临床阶段性结果-典型病例,3.5 期临床阶段性结果-典型病例,术后八周： 患者ABI:0.9，右足行走500米无麻木跛行,术 前,术后6W,术后8W,术后5M,3.5 期临床阶段性结果-典型病例,3.5 期临床阶段性结果,Chenhui Lu1, Jianping Gu2, Wensheng Lou,2 Jia Qian,1 Xu He,2 Xiaoping zhang1,Georges Uzan3, Maoquan Li1 .Transcatheter infus

13、ion of arterial blood-sorted autologous CD133 positive cells in diabetic hindlimb ischemia: the results of 18 months follow-up. Circulation,2015, IF 15.202（under review,提 纲,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF临床疗效评价-5年 3. 自体CD133+ EPCs治疗DF I、II期临床试验结果 4. DF相关基础与机理研究,http:/,科研项目：累计经费：584万,1）内皮细胞释放器的设计及治疗血管狭窄的运用 （06年上

14、海市自然科学基金No：06ZR14162，5万） （2）糖尿病性下肢动脉病变的早期诊断和介入综合干预 （07年上海市科委创新行动计划No.07jc14054，8万） （3）雷公藤红素保护的内皮前体细胞治疗下肢外周动脉闭塞的研究 （07年国家自然科学基金 No.30770614，28万） （4）雷公藤红素联合粘附因子的慢性外周动脉缺血分子影像诊断及治疗 （08年上海市科委创新行动计划，No.08jc1419700，15万） （5）雷公藤红素纠正内皮前体细胞缺陷及分子机制研究 （10年国家自然科学基金，No.81071242，33万） (6) iPS细胞技术诱导内皮前体细胞移植治疗糖尿病足 (10

15、年中美国家重大科技合作支撑计划，2011DFB30010，140万) （7）雷公藤红素纠正内皮前体细胞功能及其iPS细胞诱导研究 (11年上海市卫生局新百人计划，No.XBR2011048 100万) （8）糖尿病足纳米诊断及细胞移植治疗技术合作研究 (12年中法国家科技合作支撑计划，2013DFG32170，215万) （9）自体内皮前体细胞的功能恢复及治疗糖尿病足的影像示踪研究 (12年上海市优秀学科带头人计划12XD1403900，40万,4.1 DF发病机制,发病机制,Erli Pei, Jue Li, Chenhui Lu, Maoquan Li. Effects of lipids

16、 and lipoproteins on diabetic foot in people with type 2 diabetes mellitus: a meta-analysis (通讯作者） J Dia 28(4):559-564 （IF,3.731,发现： 高密度脂蛋白,Erli Pei, Jue Li, Chenhui Lu, Maoquan Li. Effects of lipids and lipoproteins on diabetic foot in people with type 2 diabetes mellitus: a meta-analysis (通讯作者） J

17、Dia 28(4):559-564 （IF,3.731,4.1 DF发病机制,Figure Changes in high-density lipoprotein levels from fixed-effects model analysis (parallel analysis with random effects model) with overall weighted SMD and 95% CI,Table . Demographic characteristics of selected variables among three groups in male and femal

18、e,Abbreviations: PAD, patients with peripheral arterial disease; DFU, patients with a diabetic foot ulcer;BMI, body mass index; HbA1c, glycated haemoglobin; TC, total cholesterol; TG, triglyceride; LDL-C, low-density lipoprotein cholesterol; HDL-C,high-density lipoprotein cholesterol. *P 0.05, *P 0.

19、01, compared with the same gender with controls,http:/,Chenhui Lu, Georges Uzan, Maoquan Li. Endothelial progenitor cells in vascular repair: How can we clear the hurdles between bench and bedside? (通讯作者） Frontiers Bioscience 2014;19(01):34-48. (IF, 4.386,4.2 DF-EPCs 损害机制,http:/,Chenhui Lu, Georges

20、Uzan, Maoquan Li. Endothelial progenitor cells in vascular repair: How can we clear the hurdles between bench and bedside? (通讯作者） Frontiers Bioscience 2014;19(01):34-48. (IF, 4.386,4.2 DF-EPCs 损害机制,4.3 EPCs细胞功能异常,Lu C, Zhang X, Zhang D, Pei E, Xu J, Tang T, Ye M, Uzan G, Zhi K, Li M. Short time trip

21、terine treatment enhances endothelial progenitor cells functions via heat shock protein 32. J Cellular Physiol. 2015 ;230(5):1139-47 ( IF,4.218,适当浓度Tripterine处理后，受损EPC迁移能力、成管能力明显改善,4.3 EPCs细胞功能异常,Lu C, Tang T, Han S, Zhang X, Zhang D, Uzan G, Li M. Tripterine treatment improves endothelial progenito

22、r cells functions via integrin-linked kinase in atherosclerosis mice. J Mol Cell Cardiol.2014. IF,5.218,Tripterine处理EPC自体植入检测： 可明显增强细胞活力，促进微血管生成和改善后肢缺血,Lu C, Tang T, Han S, Zhang X, Zhang D, Uzan G, Li M. Tripterine treatment improves endothelial progenitor cells functions via integrin-linked kinase

23、 in atherosclerosis mice. J Mol Cell Cardiol.2014. IF,5.218,4.3 EPCs细胞功能异常,机制： Tripterine上调HSP32表达量，抑制信号通路蛋白JNK表达，抑制EPCs凋亡，对其有保护作用,4.3 EPCs细胞功能异常机制,Lu C, Zhang X, Zhang D, Pei E, Xu J, Tang T, Ye M, Uzan G, Zhi K, Li M. Short time tripterine treatment enhances endothelial progenitor cells functions

24、via heat shock protein 32. J Cellular Physiol.2014. IF,4.218,发明专利： 1.编号： 201110038698.2，2011年 2.名称： 雷公藤红素对内皮前体细胞功能的改善作用,4.5 内皮前体细胞（EPCs,4.6 ADSC的研究,动物研究(功能调节,Kangkang Zhi, Zhiwei Gao, Jun Bai,Maoquan Li, Lefeng Qu. Application of adipose-derived stem cells in critical limb ischemia（通讯作者) Frontiers Bioscience 2014;19(01): 768-776. (IF, 4.386,4.7 LPAM-1 Vs.动脉粥样硬化,Zhi K, Gao Z, Bai J, Wu Y, Li M. 47 Integrin (LPAM-1) is upregulated at atherosclerotic lesions and is involved in athe