生物技术制药：针对HER2 +细胞系高效选择性Affibody-Auristatin E缀合物

1、,针对HER2 +细胞系高效选择性Affibody-Auristatin E 缀合物,Affibody-Auristatin E Conjugate With a Potent and Selective Activity Against HER2+ Cell Lines,目录,contents,背景介绍,目录,contents,药物组成部分,抗体 Affibody,大肠杆菌重组表达affibody,药物组成部分,噬菌体展示技术,特异性分子,特异性分子：对蛋白质如肿瘤坏死因子、白细胞介素(IL)-8、CD28、 人表皮生长因子受体2 ( HER-2)和表皮生长因子受体(EGFR)等有特异性,药

2、物组成部分,海兔毒素10 dolastatin10,2-氨基-1-苯基丙基-1-醇,试验药物介绍,标记蛋白,抗HER2 affibody抗体区,连接区,MMAE,(ZHER2:4)2 DCS-MMAE共轭物,目录,contents,模型药物制备与纯化检测,圆二色谱法确定螺旋,归一化热变性（黑线）和复性（虚线）曲线证明稳定性,diaffibody构建体 克隆到pET-30a载体,E. coli Bl21CodonPlus (DE3)-RIL中表达 sds-page电泳、质谱,模型药物制备与纯化检测,实验药物(ZHER2:4)2 DCS-MMAE构建,PABC：对氨基 苯甲酸,sds-page电泳

3、结果,亲和力测定,流式细胞术测定 异硫氰酸荧光素（FITC）荧光标记,亲和力测定,重组HER2蛋白固定在传感器芯片和diaffibody 注入三浓度：0.01，0.1，和1M 使用简单的1:1朗格缪尔结合模型计算结合参数,药物疗效测定,SK-BR-3细胞培养72 h 图1、2形态无明显变化，图3细胞圆形，数量显著降低 结论：共轭可杀死绝大多数的SK-BR-3细胞,（非治疗）,药物疗效测定,结果：(ZHER2:4)2 DCS-MMAE的影响取决于HER2的表达水平， (ZHER2:4)2 DCS-MMAE影响效力随在细胞表面表达HER2的数量。,活性无影响,活性影响小,HER2+阳性细胞系 T-

4、47D轻微表达,药物疗效测定,阴性细胞系,结果：HER2阴性细胞对试验药物不敏感，共轭浓度最高时细胞存活率为60%-80%。,药物疗效测定,细胞毒的共轭基于HER2 diaffibody， 因此有效地破坏了HER2阳性肿瘤细胞。,结 论,目录,contents,不足与展望,1、毒性效应可能是由HER2介导的内吞作用引起diaffibody auristatin共轭在内含体释放auristatin， 但不能排除细胞外或细胞表面相关的蛋白酶切割缬氨酸和瓜氨酸的连接，从而释放药物进入细胞的可能性 2、对auristatin 类ADC 易发生聚合和耐药,参考文献,1 A Conjugate Based

5、 on Anti-HER2 Diaffibody and Auristatin E Targets HER2-Positive Cancer Cells. Anna M. . J. Mol. Sci. 2017, 18, 401; doi:10.3390 2 Targeting, bio distributive and tumor growth inhibiting characterization of anti-HER2 affibody coupling to liposomal doxorubicin using BALB/c mice bearing TUBO tumors. Ja

6、vad Akhtaria. Journal of Pharmaceutics Volume 505,Issues 12, 30 May 2016. 3 A Novel Affibody-Auristatin E Conjugate With a Potent and Selective Activity Against HER2 Cell Lines. Alicja M. Journal of Immunotherapy. 39(6):223232 4 Thomas, A.; Teicher, B.A.; Hassan, R. Antibody-drug conjugates for cancer therapy. Lancet Oncol. 2016, 17,e254e262. 5 affibody分子：一类具有高度亲和力的新配体