血型鉴定与交叉配血.ppt

1、,血型鉴定与,交叉配血,血型鉴定,原理,根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定ABO血型。,正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。,血型抗原,红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原 其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原,血型抗体,常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类,*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)-单体结构,分子较小，通

2、常以单体形式存在。多经妊娠或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏红细胞发生凝集。,1、 IgG 抗体,IgG structure,分子最大的一种Ig，多以五聚体形式存在。在盐水介质中能直接连接相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应，因此又称为完全抗体。,2、 IgM抗体,IgM structure,血型血清学检测的基本原理,Reaction of antibodies,（一）盐水介质法,ABO血型鉴定实验原理,抗原抗体反应在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两

3、种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原判断血型。,含某种凝集原的红细胞,+,含相应凝集素的血清,红细胞凝集反应 (agglutination),实验原理,血型不相容的两人血液 混合,则红细胞可凝集成簇,抗A,抗B,试剂,抗A、抗B试剂血清 5%的A型、B型红细胞悬液 受检者血清 5%的受检者红细胞悬液 取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5红细胞悬液。,实验步骤,1. 玻片法 （1） 取玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2） 用滴管吸取红细胞悬液，分

4、别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （3） 竹签两头分别混合，搅匀。用两根 分别用来混合A型和B型 血清和红细胞悬液,（4）观察结果 如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （5） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。,2.试管法(正定型),A B A标准血清 2滴 B标准血清 2滴 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 取出观察结果: 完全凝集:管底部有红细胞的凝块，管底细胞边缘

5、呈花边状，轻弹试管凝块不散； 完全不凝:血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为均匀的悬液； 轻微凝集:必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。,试管法(反定型),Ac Bc 受检者血清 2滴 2滴 2滴 5%的A型红细胞悬液 1滴 5%的B型红细胞悬液 1滴 立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。 轻轻扣动试管底部，观察结果-同前,血型判定,Rh血型鉴定,一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液,二、操作 1、取1275mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清12滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转

6、/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性,交叉配血试验,1、原理 血型抗体与对应红细胞抗原在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞(主侧)以及受血者红细胞与供血者血清(次侧)之间有无凝集现象，判断受血者与供血者之间有无ABO血型不合的情况。,红细胞血型系统交叉配血试验,交叉配血试验的内容,主侧配血 用患者血清与供 者红细胞进行试验 次测配血 供血者血清与患 者红细胞进行试验,交叉配血的要求,主侧配血要求： 绝对不可以有凝集或溶血现象。 次测配血要求： 供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有溶血。,交叉配血

7、试验方法,盐水介质配血 酶介质配血 菠萝酶，无花果酶，木瓜酶 抗球蛋白介质配血 经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法 聚凝胺介质配血 凝胶方法配血,盐水介质配血方法,离心 看结果,凝聚胺(Polybrene)配血法,原理：凝聚胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红细胞的Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。,当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开；如果血清中不存在IgM或IgG类

8、血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。,凝聚胺(Polybrene)配血方法,室温放置 1 分钟,主次侧均 加凝聚胺、低离子溶液,凝聚胺(Polybrene)配血方法,离心,凝聚胺引起红细胞非特异性凝集,主次侧均 加重悬液 看结果,操作步骤 1. 取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受血者血清(血浆)1滴，和供血者35红细胞悬液1滴，次侧管受血者35红细胞悬液l滴，加供血者血清(血浆)1滴。 2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。,3普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。 4

9、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。 5最后加入悬浮液2滴，轻轻转动试管混匀并同时观察结果。,6. 结果判定：如果在30秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。,紧急用血原则,在紧急情况下，为挽救病人的生命，临床医生在比较等待血交叉试验完成后时间延误的危险性和输入未交叉试验血液的危害性后，可直接申请未进行血交叉试验或完成部分交叉试验的血液，但必须填写未交叉试验的提血单并阐述临床的紧急情况。,发放未进行交叉试验或完成部分交叉试验的血液

10、，随后立即完成血交叉试验，紧急发血必须遵循下列原则： 1. 给予未知血型病人O型红细胞，如未知病人Rh血型，则首选D阴性红细胞，特别是对有过妊娠经历的女性。,2.如有时间完成病人的ABO和Rh血型检测，可给予ABO和Rh血型相合的血制品。以前的血型记录不作为发放何种血制品的依据。,在补充血容量、止血和输血这三项主要抢救措施中，首先是输液恢复血容量，其次是止血(药物或手术)，最后才考虑输血。,三大措施,急,性,出,的,血,动物实验证明急性大量失血后 单纯输血 Hb恢复正常 细胞外液下降28% 死亡率 80% 输全血+血浆 细胞外液下降20% 死亡率70% 先输平衡盐液 细胞外液恢复 适当输血 Hb适当稀释， 存活率70%以上,二 实验原理,血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在A