血清vegf、血清vegf、opn浓度与进展期胃癌术后复发关系的临床研究

血清VEGF、OPN浓度与进展期胃癌术后复发关系的临床研究咸宁市中心医院同济咸宁医院肝胆胰胃肠外科尹小平黎蔚浩朱栋良王代宏王伟王芳元摘要目的研究进展期胃癌患者血清中血管内皮生长因子（VEGF）及骨桥蛋白（OPN）浓度与进展期胃癌术后复发的关系，以探讨其作为进展期胃癌术后复发筛查标记物的价值。方法采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测术前及术后不同时期40名进展期胃癌患者血清中VEGF、OPN浓度，观察其阳性率、表现阳性的时间与术后复发的关系，并与CEA、CA199及影像学检查相比较。结果进展期胃癌根治术后血清VEGF、OPN浓度及阳性率明显下降，与术前比较其差异有统计学意义（P005）；术后转移或复发患者血清VEGF、OPN浓度及阳性率再次升高，与术后一月对比差异有明显统计学意义（P001）；术后复发患者VEGF、OPN浓度及阳性率明显高于未复发者，差异有明显统计学意义（P001）；术前及术后复发时VEGF、OPN单独检测阳性率高于CEA、CA199，其表现阳性的时间亦早于CEA、CA199，其差异均有统计学意义（P005），联合检测时前者亦高于后者，其差异均有统计学意义（P005）；血清VEGF、OPN浓度升高表现阳性的时间明显早于胃镜、CT等影像学检查，其差异有统计学意义（P005）。结论进展期胃癌患者血清VEGF、OPN主要由肿瘤组织分泌产生，术后监测其血清浓度可用于早期预测和发现肿瘤的转移复发。关键词血管内皮生长因子；骨桥蛋白；进展期胃癌；复发CLINICALSTUDYABOUTTHERELATIONSHIPOFSERUMLEVELSOFVEGF,OPNANDTHERECURRENCEOFADVANCEDGASTRICCANCERYINXIAOPINGLIWEIHAOZHUDONGLIANGWANGDAIHONGWANGWEIDEPARTMENTOFGASTROINTESTINALHEPATOBILIARYANDPANCREATICSURGERY，XIANNINGCENTERHOSPITAL，HUBEI437100，CHINACORRESPONDINGAUTHORWANGFANGYUANDEPARTMENTOFGASTROINTESTINALHEPATOBILIARYANDPANCREATICSURGERY，XIANNINGCENTERHOSPITAL，HUBEI437100，CHINAABSTRACTOBJECTIVETORESEARCHTHERELATIONSHIPOFSERUMLEVELSOFVEGF、OPNANDTHERECURRENCEOFADVANCEDGASTRICCANCER,ANDDISCUSSTHEVALUEOFVEGFANDOPNASABIOMARKERTOTHERECURRENCEOFADVANCEDGASTRICCANCERMETHODWEDETECTED40ADVANCEDGASTRICCANCERPATIENTSSERUMVEGF,OPNCONCENTRATIONBEFOREANDAFTEROPERATIONBYTHEWAYOFENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYELISATHENWEANALYZEDTHERELATIONSHIPBETWEENTHEIRPOSITIVERATES,THETIMETHESHOWPOSITIVEPERFORMANCEANDTHERECURRENCEAFTEROPERATIONS,ANDCOMPAREDWITHCEA,CA199ANDIMAGINGEXAMINATIONRESULTCOMPAREDWITHTHEPREOPERATIVELEVELS,THECONCENTRATIONANDPOSITIVERATEOFVEGFANDOPNDECREASEDOBVIOUSLY,ANDTHEDIFFERENCEHASSTATISTICALLYSIGNIFICANTP005COMPAREDWITHTHETIMEONEMONTHAFTEROPERATION,THECONCENTRATIONANDPOSITIVERATEOFVEGFANDOPNRISEAGAIN,TOTHOSEPATIENTSWHOSUFFERMETASTASISORRECURRENCEAFTEROPERATION,ANDTHEDIFFERENCEHASSTATISTICALLYSIGNIFICANTP001COMPAREDWITHTHOSEPATIENTSWHODIDNOTSUFFERMETASTASISORRECURRENCE,PATIENTSCONCENTRATIONANDPOSITIVERATEOFVEGFANDOPNWHOSUFFERMETASTASISORRECURRENCEAFTEROPERATIONWASMOREHIGHER,ANDTHEDIFFERENCEHASSTATISTICALLYSIGNIFICANTP001BEFOREANDAFTEROPERATIONWHENITRECURED,THECONCENTRATIONANDPOSITIVERATEOFVEGFANDOPNWASHIGHERTHANCEAANDCA199,WHENCOMPAREDSEPARATELY,ANDTHEDIFFERENCEHASSTATISTICALLYSIGNIFICANTP005ANDTHESAMEASJOINTDETECTIONTHETIMEWHENVEGFANDOPNSHOWPOSITIVEPERFORMANCEWASEARLIERTHANGASTROSCOPEANDCT,ANDTHEDIFFERENCEHASSTATISTICALLYSIGNIFICANTP005CONCLUSIONTHECONTENTOFVEGFANDOPNINADVANCEDGASTRICCANCERPATIENTSSERUMWASMAINLYSECRETEDBYTHETUMORTISSUE,ANDITSERUMCONCENTRATIONMONITORINGAFTEROPERATIONCANBEUSEDTOPREDICTANDFOUNDTHETRANSFEROFTUMORRECURRENCEINAEARLIERTIMEKEYWORDVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTORVEGFOSTEOPONTINOPNADVANCEDGASTRICCANCERRECURRENCE胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤，临床所见多为进展期，手术后复发率高。尽管术后辅助化疗有了较大进展，但进展期胃癌术后2年内复发率仍超过50【1】，5年生存率仅为3040【2】。因此，进展期胃癌术后复发是临床面临的难题，如何尽早诊断复发一直是临床研究的热点。本研究主要通过动态监测进展期胃癌患者血清VEGF、OPN浓度，来研究其作为进展期胃癌术后复发诊断的价值。1资料与方法11临床资料收集2010年3月2011年3月在我院就诊的进展期胃癌患者40例。其中男22例，女18例，年龄3081岁，平均563岁。患者术前均胃镜活检确诊、术中行根治性手术（D2）、术后经病理分期。所有患者在术后两周开始接受常规化疗。受检者均排除其他恶性肿瘤及严重心血管、骨骼系统疾病，术前均未接受过放化疗。术后复发患者均经胃镜、CT、磁共振或PET/CT确定证实。12标本采集术前3天、术后一月及以后每三月抽取5ML清晨空腹静脉血，所取标本注入无抗凝管，离心（2000RPM，10MIN），吸取血清100L体积分装，80冷冻备用，同期检测CEA、CA199。13检测方法及试剂VEGF采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）方法检测，试剂盒由深圳晶美生物有限公司提供，最低敏感浓度为469PG/ML，变异系数小于50。OPN应用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测,鼠抗人OPN单抗100L,1MG/ML,CHEMICON公司，兔抗人OPN多抗（100L,CHEMICON公司），OPN标准品1MG（CHEMICON公司），生物素化羊抗兔IGG（HL）（15MG/0100L，北京中山生物技术有限公司），亲和素辣根过氧化酶复合物AVIDINHRP（200L，华美公司）。所有操作严格按照说明书检测。CEA、CA199由本医院检验室常规检查。14标准以健康体检组（本课题前期研究成果VEGF（698181）PG/ML，OPN（20362）PG/ML）VEGF、OPN2S作为上下警戒值，血清XVEGF、OPN的上界水平分别为1060PG/ML、327NG/ML。胃癌分期采用1988年国际抗癌联盟的PTNM分期，P为术后病理证实，T指肿瘤本身侵润程度，N指区域淋巴结转移，M指远处转移。15统计学方法使用SPSS130软件分析所有数据。计数资料采用卡方检验，两变量之间的关系采用PEARSON相关分析。以P005有统计学意义，P001表示有显著统计学差异。2结果21手术前后患者血清VEGF、OPN水平比较术前患者血清VEGF、OPN浓度分别为（1723454）PG/ML、（504103）NG/ML，阳性率分别为675、775，术后一月其浓度分别为（758217）PG/ML、（24899）NG/ML，阳性率分别为20、175，术后患者血清VEGF、OPN浓度及阳性率明显下降，差异有统计学意义（P005表1）。同时术前及术后VEGF、OPN阳性率分别与CEA、A199相比明显较高，其差异有统计学意义（P005表1）。表1手术前后VEGF、OPN对比22血清VEGF、OPN水平与术后复发的关系9例术后复发患者与未复发患者术前及术后一月血清VEGF、OPN浓度、阳性率对比其差别有统计学意义（P001表2）；复发患者经其他辅助检查确诊复发时其血清VEGF、OPN浓度及阳性率与术后一月对比，其差异有统计学意义（P005表2）。表2血清OPN、VEGF水平与术后复发关系VEGF（PG/ML）0PN（NG/ML）CEACA199浓度1723454504103术前阳性例数（）27（675）31（775）14（35）12（30）浓度75821724899术后一月阳性例数（）7（175）6（15）3（75）2（5）注A与术后未复发患者相比P001；B与术后一月相比P00123复发患者血清OPN、VEGF与CEA、CA199比较复发患者术前、术后一月及影像学确诊复发时，OPN、VEGF阳性率分别单独与CEA、CA199对比，OPN、VEGF阳性率高于CEA、CA199，其差异有统计学意义（P005）；OPN与VEGF联合检测阳性率亦高于CEA与CA199的联合，且差别有统计学意义（P005）。表3复发患者血清OPN、VEGF与CEA、CA199比较OPNVEGFCEACA199OPNVEGFCEACA199术前7778A8（889）A4（444）4（444）8（889）B5（556）术后一月3333A4（556）A2（222）1（111）5（556）B4（444）确诊复发时8（889）A8（889）A3（333）3（333）8（889B5（556）注A单独检测与CEA、CA199相比P005；B联合检测与CEA联合CA199相比P00524复发患者血清VEGF、OPN升高时间与其他辅助检查确诊时间比较复发患者血清VEGF、OPN升高表现阳性的平均时间分别为1554474天、1639459，血清CEA、CA199升高表现阳性的平均时间分别为1902516、200584，经胃镜或影像学检查发现复发的平均时间为2282613天，三者相比VEGF、OPN表现阳性的平均时间较短，其差异有统计学意义（P005）。3讨论研究表明，肿瘤转移及复发与肿瘤微血管形成密切相关，肿瘤细胞可生成多种促血管生成因子以诱导血管生成，其中作用最为突出的是血管内皮生长因子【3】。MAEHARA等【4】报道VEGF在胃癌中呈高表达，其血清浓度与肿瘤的复发和转移及预后密切相关。骨桥蛋白（OPN）是一种分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，胃粘膜及粘液细胞中的黏蛋白颗粒和酶原颗粒可以分泌少量OPN，在机体中以游离状态和结合状态存在【5】。有研究提示OPN促进细胞增殖、移行的能力，术前术后一月确定复发时VEGF（PG/ML）0PN（NG/ML）VEGF（PG/ML）0PN（NG/ML）VEGF（PG/ML）0PN（NG/ML）浓度2315528A845135A891171A337104A2494582B658124B复发者（N9）阳性例数（）7778A8（889）A4（556）A3333A8（889）B8（889）B浓度155141940511771918922258未复发者（N31）阳性例数（）20（645）23（742）4（129）4（129）重塑细胞外基质，在降低细胞黏附中发挥重要作用，并与许多血管因子相互作用，从而促进肿瘤的侵袭、转移及复发【6】。本研究发现胃癌患者根治性手术后其血清VEGF、OPN浓度及阳性率明显下降，与术前相比差异有统计学意义（P005），而术后9例转移或复发患者血清VEGF、OPN浓度及阳性率再次升高，与术后一月对比差异有明显统计学意义（P001），说明胃癌患者血清VEGF、OPN主要来源于肿瘤本身，这与国外研究相同【7、8】。本组数据40例患者中有9例术后一年内发生转移或复发，经对比研究发现，术后复发患者其术前血清VEGF、OPN浓度及阳性率明显高于术后未复发患者，其差异有明显统计学意义（P001），提示VEGF、OPN在胃癌的转移复发中发挥着重要的作用。且患者血清VEGF、OPN浓度升高表现阳性的时间明显早于胃镜、CT等影响学检查，其差异有统计学意义（P005）。目前消化道肿瘤最常用的标记物检测为CEA、CA199，其单独检测的敏感性为30389，联合检测的阳性率为536【9、10】。本研究发现VEGF、OPN其单独及联合检测术前（本课题前期研究结果）及术后复发阳性率高于CEA、CA199及两者的联合，其表现阳性的时间亦早于CEA、CA199，其差异均有统计学意义（P005）。综上所述，胃癌患者血清VEGF、OPN主要由肿瘤组织分泌产生，其浓度的高低与患者预后直接相关，术后监测其血清浓度可以评估根治性手术的彻底性，也可更早预测和发现肿瘤的转移与复发。参考文献1顾香,李明胃肠道肿瘤再手术,临床外科杂志2004,2473923922赵成功,赵久武,王仕琛胃癌术后局部复发原因分析及对策,中国实用外科志2009,2921541563YASHIHIH，COMEZDE，SHIBUYAM，ETALEZPRESSIONOFVEGF，ITSRECEPTORANDOTHERANGIOGENICFACTORSINHUMANBRESTCANCERJCAILCERRES，1996，56201320164MAEHARAY，KABASHIMAA，KOGAT，ETA1VASCULAR