【硕士论文】5种药剂对苹果枝条剪锯口腐烂病防治效果持效期研究

青岛农业大学毕业论文（设计）题目5种药剂对苹果枝条剪锯口腐烂病防治效果持效期研究姓名张传杰学院农学与植物保护学院专业植物保护班级1104班学号20114271指导教师李保华2015年5月30日毕业论文（设计）诚信声明本人声明所呈交的毕业论文（设计）是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，论文中引用他人的文献、数据、图表、资料均已作明确标注，论文中的结论和成果为本人独立完成，真实可靠，不包含他人成果及已获得青岛农业大学或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。论文（设计）作者签名日期年月日毕业论文（设计）版权使用授权书本毕业论文（设计）作者同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文（设计）的复印件和电子版，允许论文（设计）被查阅和借阅。本人授权青岛农业大学可以将本毕业论文（设计）全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本毕业论文（设计）。本人离校后发表或使用该毕业论文（设计）或与该论文（设计）直接相关的学术论文或成果时，单位署名为青岛农业大学。论文（设计）作者签名日期年月日指导教师签名日期年月日目录摘要1ABSTRACT2引言31苹果树腐烂病的发生、分布和危害2苹果树腐烂病的主要侵染途径3苹果树腐烂病药剂防治研究进展和存在的问题4本研究的目的及意义1材料与方法11试验地概况12实验材料121供试菌株122供试药剂13持效期效果的测定2结果与分析21腐烂病菌丝的正确性验证211组织分离法验证212分子生物学法验证22保护效果与持效期3结论4讨论致谢参考文献5种药剂对苹果枝条剪锯口腐烂病防治效果持效期研究植物保护专业张传杰指导教师李保华摘要为了筛选出防治苹果腐烂病的有效杀菌剂，采用室外先施药后接种的方法，测试了5种杀菌剂对苹果枝条剪锯口的防治效果。结果表明在5种药剂处理中吡唑醚菌酯对苹果腐烂病的防治效果最好，药剂持效期达40天，其中第10D的防治效果最好，在60以上；其次为戊唑醇和代森锰锌，药剂持效期在20D后明显下降；波尔多液和甲基硫菌灵对苹果枝条剪锯口的防效较差，40D后已完全失去防治效果。苹果枝条剪锯口腐烂病的防治应以吡唑醚菌酯主，并与戊唑醇和代森锰锌等有机杀菌剂交替使用。关键词苹果腐烂病；剪锯口；吡唑醚菌酯；防治效果STUDYONTHEEFFECTIVEDURATIONOF5PESTICIDESINAPPLESHOOTROTDISEASEPREVENTIONEFFECTSTUDENTMAJORINGINPLANTPROTECTIONCHUANJIEZHANGTUTORBAOHUALIABSRACTINORDERTOSELECTTHECONTROLOFAPPLEROTDISEASEEFFECTIVEFUNGICIDE,THEOUTDOORFIRSTAFTERSPRAYINGINOCULATIONMETHODTOTESTTHEFIVEKINDSOFFUNGICIDESONAPPLEBRANCHESCUTKERFCONTROLEFFECTTHERESULTSSHOWEDTHATIN5KINDSOFAGENTSPYRACLOSTROBINAPPLEROTDISEASEPREVENTIONANDTREATMENTEFFECTOFTHEBESTAGENTSTOVALIDFORUPTO40DAYS,WHICHEFFECTINTHEPREVENTIONANDTREATMENTOFTHE10THBEST,INMORETHAN60FOLLOWEDBYTEBUCONAZOLEANDMANCOZEBREAGENTTOEFFECTDECREASEDSIGNIFICANTLYAFTER20DBORDEAUXSOLUTIONANDMETHYLSULFURBACTERIASPIRITOFAPPLEBRANCHESCUTKERFCONTROLEFFECTISPOOR,AFTER40DHASCOMPLETELYLOSTTHECONTROLEFFECTAPPLEBRANCHESCUTKERFROTDISEASEPREVENTIONANDCONTROLSHOULDBETOPYRACLOSTROBINMAINANDTEBUCONAZOLEANDMANEBZINCORGANICFUNGICIDESUSEDINTERCHANGEABLYKEYWORDSAPPLEVALSACANKERPURNINGWOUNDSPYRACLOSTROBINCONTROLEFFECT引言1苹果树腐烂病的发生、分布和危害苹果树腐烂病主要分布在中国、日本、朝鲜、美国、加拿大、英国、原苏联等国也有零星分布。国内主要分布在东北、华北、西北地区各省以及华东、华南、华中部分地区。苹果腐烂病最早于1903年在日本发现并报道，1916年在我国辽宁省首次发现，目前，该病主要分布于东亚地区，我国各苹果产区均有发生，其中北部地区受害最为严重2。自解放初期，苹果树腐烂病在我国已出现了四次大规模流行。2008年调查显示，中国10个苹果主产省市的147个果园内，苹果树的总体发病率为527，其中河南省发病率高达8513。该病主要发生在20年生以上老果园的结果树上,但在管理不善、树势衰弱的幼龄果园中,有时也造成严重危害。2苹果树腐烂病的主要侵染途径该病初侵染源为在病部组织中越冬的菌丝、分生袍子器及分生袍子、子囊壳及子囊饱子。再侵染源主要是分生袍子5。从周年情况看,树体上每月都要形成分生抱子器5。分生饱子器的形成,分生抱子的释放及其在田间的传播,每年都有两个高峰7。分生饱子角主要借雨水传播。苹果树腐烂病菌属于弱寄生真菌，主要从剪锯口、冻伤、日灼伤等处侵染，也可通过芽眼、叶痕、果痕等处的微伤口侵染，具有潜伏侵染的特性811。剪锯口是最易受腐烂病菌侵染的部位，也是腐烂病菌的主要侵染孔口12。2011年在烟台地区果园内检查了967块新病疤，其中源自剪锯口侵染的病疤占800413。从剪锯口侵染的腐烂病菌，主要潜伏于木质部的导管内，并不能立即致病，腐烂病菌在木质部内可以潜伏35年，条件适宜时，腐烂病病菌在木质部导管内生长扩展到达皮层，才能导致剪口皮层的发病1417。苹果树腐烂病属于枝干病害，且所有的苹果品种对于腐烂病菌均没有有效的抗性,因此一旦腐烂病菌由剪锯口侵入到寄主组织的韧皮部深至木质部时，由于传统杀菌剂无法完全渗透寄主组织，从而很难起到有效的防治效果，因此保护剪锯口和枝干不受腐烂病菌的侵染是防治腐烂病发生的首要措施。3苹果树腐烂病药剂防治研究进展和存在的问题药剂防治是防治苹果树腐烂病的主要方法,国内外对此进行了深入研究。对苹果树腐烂病的防治,早在50年代早期曾试图采取适期喷布保护性杀菌剂,以预防发病,但未能获得预想效果。据刘昌福18研究,苹果树腐烂病具潜伏侵染的特点,潜伏病菌存在部位是在树皮表面的死组织或细胞团中,鉴于存在潜伏侵染现象,药剂防治研究应从保护剂转到筛选具铲除效能的杀菌剂或内吸杀菌剂研究。国内6070年代主要应用的药剂和方法有5度石硫合剂、80倍硫酸铜液或1000倍的升汞水进行伤口消毒，然后再涂煤焦油保护2,40,49,50。日本主要应用的药剂有甲基托布津、多菌灵、苯来特、苯菌灵可湿性粉剂、石硫合剂、甲基托布津膏剂和碱4性碳酸铜与五氯酚钠组成的50可湿性粉剂与矿油乳剂构成的混剂49,51,52。进入80年代以后，使用的药剂种类和剂型越来越多，方法也在不断改进。福美胂是一个代表性的药剂，应用剂型和浓度主要是40可湿性粉剂50100倍液，方法为涂抹法和喷布法49,5360。90年代以后相继研制出一些高效无残毒的新农药，包括有化学药剂，生物类及复合制剂，同时在剂型上也有了较大改进6174。化学药剂主要有程廉（1994）用菌毒清，采用“割条”涂药的方法，得到很好的防效。赵兴敏（2003）报道843康复剂是一种毒性低、无残毒的复方杀菌剂。在苹果生长季节涂药，防治效果比福美胂50倍液和石硫合剂原液好。刮治涂药后一周内，伤口即可愈合。涂药面没有坏死组织，愈合部位皮色正常、光滑。也有人研究表明，20苯扬酚乳油、125烯唑醇WP、45施纳宁水剂能够达到40福美胂可湿性粉剂的效果。西北农林科技大学的马晓东在2007年首次利用新一代高效广谱内吸性杀菌剂戊唑醇，制成戊唑醇膏剂，其对苹果腐烂病伤口的愈合率达到595。2009年又有了新的突破，王磊、郜佐鹏等证明了苯醚甲环唑、戊唑醇抑菌防病效果较好，可作为在果园防治苹果树腐烂病的替代药剂；陈亮、刘君丽等田间结果表明丁香菌酯对苹果树腐烂病具有较好的防治效果，高于嘧菌酯和福美胂。当前化学防治中存在的问题是药剂太杂太乱，2008年，据苹果现代产业技术体系病虫害防控研究室在全国十个省市进行的腐烂病防治调查中发现，在防治腐烂病中涉及到化学药剂多达26种，虽然由于福美胂毒性较大，2002年起已被禁止在无公害果园使用，但是，福美胂依然是使用最多的专用型药剂，由此反映出我国在防治腐烂病方面还存在严重的问题11。五、本研究的目的及意义剪锯口是腐烂病菌的重要侵染孔口20。苹果树腐烂病属于枝干病害，且所有的苹果品种对于腐烂病菌均没有有效的抗性,因此一旦腐烂病菌由剪锯口侵入到寄主组织的韧皮部深至木质部时，由于传统杀菌剂无法完全渗透寄主组织，从而很难起到有效的防治效果，因此保护剪锯口和枝干不受腐烂病菌的侵染是防治腐烂病发生的首要措施。因此筛选当前已有的化学杀菌剂来防治苹果树腐烂病，提出防治方案，是解决当前所面临问题的有效方法。作为一名植保人员，有义务为农民推荐实用的药剂。本研究针对目前生产上用药混乱的问题，从众多常用杀菌剂中筛选高效低毒防治苹果腐烂病病的药剂，提出有效地解决方案，为苹果产业的理论奠定基础。1材料与方法11试验地概况试验于2014年6月2015年5月在山东省植物病虫害综合防控重点实验室（青岛农业大学）进行。青岛农业大学位于青岛市城阳区长城路700号，城阳区是青岛市六个市辖区之一，东依崂山区，南接李沧区，西临胶州湾与胶州市相邻，北与即墨市毗连。位于东经12012，北纬3620，属暖温带季风大陆性气候，年平均气温126C，1月份最低，月平均气温2C，8月份最高，月平均气温257C，年平均降水量700MM左右，四季分明，雨热同季，光照充足。该地区气候有利于生产优质苹果。12试验材料121供试菌株供试菌株2009年8月自陕西省白水县雷牙乡采集苹果树腐烂病病枝，切取病健交界处的病组织转入马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）中，分离获得腐烂病菌VALSAMALI。用直径08MM的毛细管，自菌落边缘打取菌丝的端部转入PDA中，获得单菌丝分离菌株，编号为LXS080901，活化前在4冰箱中保存。用农杆菌介导转化法ATMT将携带潮霉素B磷酸转移酶基因HPH和绿色荧光蛋白表达基因GFP转入腐烂病菌，获得转化子LXS0809013。经离体和活体测定，转化子LXS0809013和野生菌株LXS080901的生物学性状、致病性、以及在苹果枝干上形成的症状都没有差异，与田间自然发病情况一致13。2个菌株都保存于4C的冰箱中。接种前，将保存的转化菌株从冰箱中取出，接种于PDA培养基中，25C下黑暗培养35天，取菌落边缘直径5MM新鲜菌饼，接种于大麦粒培养基（浸泡大麦粒70G,蛋白胨1G,蜂蜜水6，灭菌2H），25C恒温箱中培养15D，大麦粒上可产生大量分生孢子器。取产生分生孢子器的大麦粒，转入含有1水琼脂直径为9CM培养皿中，25C下保湿培养3D，分生孢子器中溢出大量橘黄色分生孢子角22。用灭菌牙签挑取新鲜孢子角置于纯净水中配置成106个/ML的孢子悬浮液，备用。孢子悬浮液现用现配，放置时间不超过1H。122供试药剂根据已有经验和报道，选取对苹果腐烂病可能有效，且生产上常用的5种杀菌剂，杀菌剂的种类和生产厂家见表1,试验用量为厂家推荐用量。表1苹果腐烂病药效试验所测试杀菌剂种类、剂型、有效成分、使用剂量及生产厂家TABLE1TESTEDFUNGICIDES,FORMULATIN,EFFECTIVECOMPONENTS,DOSAGEANDMANUFACTUREONCONTROLLINGOFAPPLEROTDISEASE药剂FUNGICIDE测试浓度/MGL1TESTEDDOSAGE生产厂家MANUFACTURER70甲基硫菌灵WP70THIOPHANATEMETHYLWP875兴业（中国）有限公司430G/L戊唑醇SC430G/LTEBUCONAZOLESC86拜耳作物科学（中国）有限公司80代森锰锌WP80MANCOZEBWP800印度印地菲尔化学公司250G/L吡唑醚菌酯EC250G/LPYRACLOSTROBINEC250巴斯夫欧洲公司12100波尔多液12100BORDEAUXMIXTURE现用现配13持效期效果的测定采用先施药后接种的方法，以清水为对照，测试了甲基硫菌灵等5种杀菌剂对苹果腐烂病的持效期防治效果。药剂的名称、有效成分、生产厂家及用量见表1。本实验于2015年3月下旬，苹果萌芽之前，在青岛农业大学试验园内选择3年生盆栽富士苹果树的一年生健康无伤枝条，粗细均匀，直径大约在08CM左右。将枝条剪成长度为15CM左右的枝段，用浓度为70酒精进行表面消毒，然后施药。试验共设置5个药剂处理，以清水为对照，4个时间处理，分别为施药5D，,10D,20D和40D后接种病菌，共24个组合。每个组合处理5根枝条，共120枝。施药采用浸蘸方法，即将苹果枝条上部剪锯口在配好的药液中浸蘸1MIN。施药后，立即将枝条垂直插入塑料盒中，盒内加水，使枝条下端2CM浸入水中，放于室外培养，盒内定期加水。施药后枝段在室外分别处理5D，10D，20D和40D后取回枝条，进行接种。接种时，用手持喷雾器将孢子悬浮液均匀地喷布到枝条施药的剪锯口上，直到孢子悬浮液流下为止，将接种枝条转入相对湿度为100塑料盒中密封，再将塑料盒转入温度为25C的恒温箱中培养48H。48H后再将接种枝段转入相对湿度为70，温度为25C的恒温箱中继续培养。2周后，取出接种枝条，自枝条接种端用消毒果枝剪截取05CM的茎段，用HM525冷冻切片机在离接种端05CM处茎段处横切切取厚度30M的组织切片25片，放置在5个载玻片上，每个载玻片5片。经脱色液脱色，透明液透明，染色液染色后，在DM2500荧光显微镜上观察枝条横切面上菌丝量的多少，在25个组织切片中，选择一个菌丝量最大的横切面，记录横切面上木质部含有菌丝数量，菌丝数量按如下分级标准记录0级横截面木质部内无菌丝；1级12横切面木质部内有12个菌丝束根菌丝为1级；2级横切面木质部内有35个菌丝束25根菌丝为2级；3级横切面木质部内有610个菌丝束；4级横切面木质部内有1120个菌丝束；5级横切面木质部内菌丝束的数量超过20个；14数据处理以每个横切面上的菌丝束为基本数据，全部的数据分析用SPSSSTATISTICS统计软件完成。在方差分析之后，用横切面上平均菌丝束或防治级数计算药剂的防治效果药剂防效（）对照组横切面平均菌丝束（防治级数）处理组横切面平均菌丝束（防治级数）/对照组横切面平均菌丝束（防治级数）1002结果分析21腐烂病菌丝的正确性验证测试的5种杀菌剂，分别在施药后的第5D、第10D、第20D、第40D后接种腐烂病菌分生孢子悬浮液，接种后2周后进行荧光显微镜观察。在DM2500荧光显微镜下，苹果腐烂病的菌丝呈黄绿色圆点状，主要分布在木质部靠近导管处（图1）。苹果枝条距剪锯口在浸蘸吡唑醚菌酯5D后，接种苹果腐烂病菌分生孢子悬浮液培养2周，在荧光显微镜上观察有2个菌丝束（图1A）；苹果枝条距剪锯口在浸蘸吡唑醚菌酯10D后，接种苹果腐烂病菌分生孢子悬浮液培养2周，在荧光显微镜上观察有1个菌丝束（图1B）；随着接种时间的延长，菌丝束不断增加，40D后接种，菌丝束达到12个（图1D）。对照在5D后接种苹果腐烂病菌分生孢子悬浮液，在一个视野中菌丝束以扩展至整个横切面（图1E）。这表明苹果枝条剪锯口在受药剂保护时，对苹果腐烂病具有明显防治效果。ABCDE图1苹果枝条剪锯口浸蘸吡唑醚菌酯不同时间处理后接种苹果腐烂病菌孢子悬浮液横切面的菌丝量FIG1THEAMOUNTOFMYCELIUMOFTHECROSSSECTIONOFTHESPORESUSPENSIONOFTHEAPPLEDECOMPOSEDBACTERIAAFTERDIFFERENTTIMEOFTHECUTTINGOFTHEAPPLEBRANCHWASTREATEDBYTHECUTTINGOFTHECUTTINGOFTHECUTTINGSAWA、B、C、D浸蘸吡唑醚菌酯5D、10D、20D、40D后接种苹果腐烂病菌分生孢子悬浮液横切面的菌丝量；E5D对照211组织分离法验证为了验证在DM2500荧光显微镜下所观察到的黄绿色圆点为苹果腐烂病的菌丝，随机选取4份组织样品，将每一份样品用消毒果枝剪分为两份，其中一份采用传统的组织块分离法分离病原菌，另一份采用荧光显微镜观察法。最后，将组织块分离法的检测结果和荧光显微镜检测的结果进行比较，以验证腐烂病菌丝的正确性。结果表明（图2）苹果枝条剪锯口组织样品在PDA上纯培养3天后能够长出腐烂病的菌丝。证明在DM2500荧光显微下观察到的黄绿色圆点即为腐烂病的菌丝。图2苹果枝条剪锯口组织样品在PDA上的纯培养FIG2THEPURECULTUREOFTHETISSUESAMPLESOFTHECUTTINGOFTHEAPPLEBRANCHESONTHEPDA212分子生物学法验证采用生工生物工程（上海）有限公司最新研制成功的一种真菌基因组DNA提取试剂盒的方法从苹果组织样品中提取DNA,经提取到的DNA用于PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测，表明22保护效果与持效期所测试的5种杀菌剂，在施药5D后接种苹果腐烂病的分生孢子悬浮液，戊唑醇和代森锰锌对苹果枝条剪锯口的保护效果达到60以上（表2）；在施药10D后接种苹果腐烂病的分生孢子悬浮液，除甲基硫菌灵和波尔多液外，其它3种药剂的保护效果都保持在60以上；施药20D后，吡唑醚菌酯的保护效果还保持在60以上；施药40D后，只有戊唑醇、代森锰锌和吡唑醚菌酯处理苹果枝条剪锯口上横切面平均菌丝束与对照横切面上存在明显差异,浸蘸其它药剂苹果枝条剪锯口横切面平均菌丝束与对照横切面上无明显差异，说明在施药后的第40D，只有戊唑醇、代森锰锌和吡唑醚菌酯有一定的保护效果，其它药剂都已完全失去保护效果。表25种杀菌剂在施药后不同时间对腐烂病持效期保护效果TABLE25KINDSOFFUNGICIDESINDIFFERENTTIMEAFTERAPPLICATIONOFROTTOPROTECTIONEFFECT药剂FUNGICIDE施药不同时间后接种苹果腐烂病菌分生孢子悬浮液剪锯口横切面上的平均菌丝束及保护效果SPRAYINGATDIFFERENTTIMEAFTERINOCULATIONONAPPLECANKERPATHOGENCONIDIASUSPENSIONSHEARSAWONTHECROSSSECTIONSOFTHEEXPORTAVERAGERHIZOMORPHSANDPROTECTI5D10D20D40D横切面平均菌丝束AVERAGENUMBEROFCROSSSECTIONSHYPHAE保护效果/100PRO横切面平均菌丝束AVERAGENUMBEROFCROSSSECTIONSHYPHAE保护效果/100横切面平均菌丝束AVERAGENUMBEROFCROSSSECTIONSHYPHAE保护效果/100横切面平均菌丝束AVERAGENUMBEROFCROSSSECTIONSHYPHAE保护效果/100PROTECTIVEEFFECTPROTECTIVEEFFFECTPROTECTIVEEFFFECTTECTIVEEFFFECT70甲基硫菌灵WP70THIOPHANATEMETHYLWP430G/L戊唑醇SC430G/LTEBUCONAZOLESC80代森锰锌WP80MANCOZEBWP250G/L吡唑醚菌酯EC250G/LPYRACLOSTROBINEC12100波尔多液12100BORDEAUXMIXTURE对照（967144）BC（478129）A（5075）A（789146）AB（1367193）C（2444158）D40606040200（667112）AB（478237）A（356067）A（222036）A（108923）B（1978281）C406060602020（1389089）C（844091）B（667115）AB（411068）A（1733211）C（2278173）D20404060200（1467172）B（9561）A（833113）A（911114）A（19188）B1544223B2040404020201表中同列不同字母代表在005水平上差异显著。DIFFERENTLETTERSINSAMECOLUMNINDICATESIGNIFICANTDIFFERENCATTHE005LEVEL3结论所测试的5种杀菌剂中，供试的几种不同作用机理杀菌剂对苹果腐烂病均有一定的防治效果。戊唑醇和代森锰锌在施药5D和10D后能有效的保护苹果枝条剪锯口不受腐烂病菌的侵染，施药20D后，药剂的保护效果明显下降，只有吡唑醚菌酯的保护效果还在60以上，施药40D后甲基硫菌灵和波尔多液已经完全失去保护效果。本次试验，在施药后有多次有效降雨，降雨对杀菌剂有一定的冲刷作用。甲基硫菌灵和波尔多液的药效持效期缩短，防治效果差可能和降雨有关。在施药第10D后，5种杀菌剂对苹果腐烂病的防治效果均达到了最佳。一方面可能与剪锯口的愈合程度有关，春季枝条愈伤速度较快，随着时间的延长，枝条的剪锯口不断愈合，对病原菌的侵入有一定的阻挡作用。另一方面，在施药10D后的防治效果比第5D的效果要好，可能是由于随着施药时间的延长，药剂的渗透性增强，在第10D时药剂已渗透到枝段木质部内。同时由于不同类型杀菌剂表现的药效差异可能与药剂本身性质和各自杀菌作用机理不同有关。而且，不同药剂对苹果树腐烂病伤口愈合效果也不同，从而造成了在不同处理时间段药剂的防治效果的差异。苹果腐烂病是一种潜伏侵染性病害，病菌的潜育期很长，病菌侵染后，既没有用药的时间，有没有理想的防治药剂。因此，苹果腐烂病不适合在病原菌侵染后内吸治疗的防治措施。加强果园的栽培管理，改善卫生条件以增强树势，提高寄主的抗病力，是综合防治的基础。生产中要避免长期重复施用单一类型杀菌剂，现防治用药多为广谱型，如近年常用的三唑类杀菌剂戊唑醇就已在种作物上获得登记，使用频率高、防治面积广、更易产生抗药性。建议定期与其他不同作用机制的药剂交替使用，并结合农业防治及生物防治等手段达到综合控制的目的。防治苹果腐烂病应注意防治适期，在发病初期及时刮治，刮治部位一定要彻底（刮去病部组织及病斑周围左右的健皮）、要光滑，并注意清理病原24。致谢本论文是在李保华老师的亲切关怀和悉心指导下完成的。在毕业实习期间，李老师给予了我热情的关怀和精心的指导，使我有更大的发挥空间并能够顺利完成毕业论文。另外，李老师始终保持着严谨而又认真的治学态度，以及勇于探索和一丝不苟的敬业精神，给我的学习和工作提供了模范作用。在生活中，李老师积极乐观、平易近人的态度对我的人生观、价值观也产生了很大的影响。在完成毕业论文之际，谨此向李老师致以最崇高的敬意和最衷心的感谢本论文是在山东省植物病虫害综合防控重点实验室（青岛农业大学）完成，在整个论文实验过程中，实验室的各位师兄师姐给予了我非常大的帮助，特别是陈冲师姐，在此向他们表示衷心的感谢此外，在大学四年的本科学习过程中，感谢母校提供了优越的学习条件，使同学们有了更大的发展空间；同时，感谢各位任课老师的精心指导和谆谆教诲，使我能圆满完成学业，并取得了不错的学习成绩。最后，感谢参加论文答辩和评审的各位专家教授，论文中如有不妥之处，期待您们的批评指正参考文献1方中达植病研究方法第二版,北京中国农业出版社19982高克祥,刘晓光苹果树腐烂病研究概况J河北林学院学报,1995187913曹克强,国立耘,李保华,等中国苹果树腐烂病发生和防治情况调查J植物保护,200921141174宗兆锋,康振生植物病理学原理北京中国农业出版社2002中国