交叉配血实验笔记

实验8交叉配血试验交叉配血是将受者的红细胞和血清分别与供者的血清和红细胞混合，观察是否有凝集现象(见图4-3-1-1)。输血时，一般认为献血者的红细胞不应被受血者的血清凝集。其次，认为受体的红细胞不会被供体的血清凝集。前者称为交叉匹配测试的主要方面(也称为直接匹配)，后者称为交叉匹配测试的次要方面(也称为间接匹配)。只有在第一和第二面没有凝集的情况下，才能进行输血，这种情况称为“配血”。如果主要的一方凝集，它被称为“血型不合”或“血型禁忌”，输血是绝对禁止的。如果第一面不凝集，但第二面凝集，可以认为是“基本一致”，但输血时应特别谨慎，不要太快太多，并密切观察输血反应。【目的】了解三种常用的交叉配血方法。主题人体(学生志愿者)。实验设备和药物1.仪器显微镜和离心机。2.仪器采血针头、无菌注射器、双凹面载玻片、小试管、竹签、棉球、蜡笔。3.药物标准甲血清、标准乙血清、生理盐水、75%酒精、碘。实验程序和观察指标图4-3-1-1交叉配血示意图(1)红细胞悬浮液的制备根据需要的类型，取1毫升全血，加入2-3毫升等渗盐水，充分摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后加入2-3毫升生理盐水，按上述方法洗涤三次，取5滴血细胞比容，加入4毫升新鲜等渗盐水，得到5%红细胞悬液。(2)交叉匹配的基本原理如图4-3-1-1所示。含盐介质的交叉匹配试验实验原理天然胰岛素样生长因子血型抗体和相应的红细胞抗原在室温下在盐水介质中凝集。可以检查是否存在破坏供体和受体红细胞的抗体(抗体是ABO血型中主要的抗甲和抗乙抗体)。实验步骤取两根试管，分别标上“主要”和“次要”字样。捐献者的一滴红细胞悬液和接受者的一滴血清滴到主面。然后，从受者身上滴下一滴红细胞悬液，从供者身上滴下一滴血清。混合后，以1000rpm离心1分钟，取出观察结果。如果两边都没有凝集，就可以输入大量的血液。如果第一面没有凝集，第二面没有凝集，只能考虑少量输血。如果主要的一面凝集，不允许输血。低离子多胺介质的交叉匹配试验实验原理红细胞表面有大量负电荷，以避免自发聚集。当红细胞悬浮在电解质中时，阳离子会被红细胞的负电荷吸引，形成Zeta电位，这决定了红细胞之间的排斥力。缩合胺技术首先利用低离子溶液(LIM)降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，从而促进红细胞和血清(血浆)中抗体的结合。然后加入聚胺溶液，它是一种高价阳离子聚合物和肝素中和剂。溶解后会产生大量正电荷，中和红细胞表面的负电荷，降低红细胞的Zeta电位，缩短红细胞之间的距离，引起红细胞的非特异性聚集。最后加入悬液，该悬液具有中和多胺阳离子的作用，使正常红细胞非特异性凝聚分散，检测结果为阴性；然而，如果红细胞被相应的抗体致敏，它们将被多胺凝结，凝集不会分散，检测结果为阳性。实验步骤1取两根试管，并标记一次侧和二次侧。初级侧管含有2滴患者血清(血浆)，供体含有3%5%的红细胞最后，加入2滴重悬剂，轻轻摇动试管以混合并观察结果。如果凝集在60秒内扩散，它代表由多胺引起的非特异性聚集，并且血液匹配结果一致。如果凝集不分散，那是红细胞抗原-抗体结合的特异性反应，并且血液匹配的结果是不一致的。如果反应可疑，可以进一步倒在载玻片上，用显微镜观察。微柱凝胶介质的交叉匹配试验实验原理凝集红细胞在凝胶中被抗原和抗体的特异性反应阻断通过离心通过凝胶的微孔过滤，而未凝集的单个红细胞通过微孔移动到柱的底部以区分凝集是否存在。实验步骤参见PPT。结果确定直接观察眼睛。(三)实验注意事项1设备、试剂、反应温度、离心、标本等注意事项同ABO血型鉴定。2.血清比血浆好；不需要溶血标本；血液匹配后，标本在冰箱中保存至少7天。3.红细胞应该用生理盐水清洗。4.溶血本质上是阳性结果，与血液匹配不相容。5.ABO血型系统属于同一类型，不应被允许。首先应排除ABO血型鉴定是否有误。6.盐水培养基法只能检测抗体，不能检测抗体。缩合胺法可检测IgG型血型抗体7.临床输血交叉配血试验时，应先进行盐水介质试验。然后进行多胺培养基法试验。8.应尽快观察多胺培养基试验的结果(3分钟)9.聚胺溶液必须储存在深色塑料瓶中。10.在多胺培养基试验中，应在含肝素的血样中加入聚丙烯酰胺。思考问题1.在没有标准血清的情况下，如果一个人是A