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文档简介

.1，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳分析，【目的要求】1。掌握琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白的原理，掌握正常人血浆脂蛋白的分类。熟悉琼脂糖凝胶电泳的特性和工作点。3.了解电泳带的脂蛋白显色特性，2，【实验原理】，琼脂由化学上的琼脂糖和琼脂粘合剂组成，是带硫酸根或负电荷的多糖。琼脂是D-半乳糖和3，6脱水L-半乳糖的残基交替排列的直线链多糖。琼脂糖主要通过氢键形成凝胶。电泳时凝胶的含水量大(98 99%)，类似于自由电泳，固体支撑体的影响小，电泳快，区域整齐。而且，琼脂糖不包含带电荷的组分，所以电渗析的影响很小，是优秀的电泳材料，分离效果很好。血清脂质均与载脂蛋白结合，以水溶性脂蛋白的形式存在。各种脂蛋白的种类和数量不同，因此根据脂蛋白颗粒的大小，差异很大。因此，使用琼脂糖凝胶作为支撑物，可以从电场中分离出各种脂蛋白粒子。琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白很简单。血清脂蛋白预染色为脂质染料苏丹黑(或尤红等)。将预先染色的血清放在琼脂糖凝胶板上分离。通电后，我们可以看到脂蛋白被分成三个区域，从阴极到阳极，脂蛋白(最深的)，前脂蛋白(最浅的)，脂蛋白(比以前脂蛋白稍深的)在原点应该没有乳粒。3、1。电泳槽2。幻灯片3 .台式离心机，4，【实验操作】，1。预染色血清0.2毫升苏丹黑液0.02毫升，混合37水浴30分钟，离心(2，000转/分钟)5分钟。2.琼脂糖凝胶板的制备已经准备好的0.50%琼脂糖凝胶在水浴中加热融化，用吸管抓住约3毫升凝胶溶液，倒入幻灯片上，直接“腿”凝固，然后小心地移除“腿”。电泳将凝胶板平行放入电泳槽中，将样品孔末端放入阴极。将4层滤纸浸泡在巴比妥缓冲液中，然后在凝胶板的两端轻轻盖上，滤纸的另一端浸入电泳槽内的巴比妥缓冲液中。通电后，添加低压和采样后，电压调整为120 130 v。电泳35 50分钟后可以看到分离的波段。4.如果需要保存电泳图案，可以在电泳后将凝胶板放入干胶中制作干膜。如果有未干的粘合剂，用玻璃纸包裹凝胶板(包括幻灯片)，排列多层吸水用滤纸，在滤纸上按书等重物吸干凝胶中的水分。凝胶板可以在水中浸泡2小时，淡化，放入烤箱(80 左右)干燥，但要随时注意温度变化和凝胶的脱水程度，以免在脱诊过程中凝胶裂开。5，【注意事项】，1。预染色血清与温度相关，低温着色慢，高温着色快，37 更适合。2.倒入琼脂糖凝胶板，应尽量厚度均匀。否则会影响脂蛋白的分离效果。3.将凝胶板插入电泳槽。应与电力线平行，并记住在样品末端放置阴极，旁路滤纸不符合样品。4.制造干燥粘合的时候，要严格控制脱水的温度和速度。脱水时温度太高，速度太快，防止出现凝胶收缩裂缝。6，【试题】，1。琼脂糖凝胶电泳的工作点是什么？2.在其他实验方法(超速离心、琼脂糖凝胶电泳、页面)中，正常人血清脂蛋白是如何分类的，与电泳后的相对位置和超速离心法相对应吗？3.各种脂蛋白的功能？为什么正常人的血清脂蛋白电泳中看不到体
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