淋巴细胞亚群

身体的免疫状态是衡量身体是否疾病的重要指标，目前更多的流式细胞术用于监测身体的免疫状态，最重要的指标是检测t，b，NK淋巴细胞的水平。t细胞主要包括t辅助细胞(Th)和t抑制细胞(Ts)细胞子集。CD3细胞表示外周血中全部成熟的t细胞，理论上应该等于CD4细胞和CD8细胞的总和，但CD4和CD8细胞的总和往往大于CD3。CD4细胞包括CD3 /CD4细胞(实际的Th细胞)和CD3-CD4细胞(不是Ts细胞)，而CD3-CD8 CD16 56细胞(NK细胞的一部分)和CD3-CD8 CD16 56-(未知细胞)实际TH细胞是CD3 CD4细胞，实际Ts细胞是CD3 CD8细胞。特别是患者的NK细胞大幅增加，CD4细胞和CD8细胞的总和比CD3细胞大得多，因此要使用三色荧光标记，才能分析真正的辅助t细胞和抑制t细胞。首先识别淋巴细胞中的CD3细胞，然后从CD3细胞中区分CD4和CD8细胞。NK细胞表面没有t细胞和b细胞表面标记，但有CD16和CD56等标记，可以用CD16 56抗体确认NK细胞(必须是CD3阴性)，CD3-CD16 56细胞是真正的NK细胞。根据CD8是否表达，NK细胞可以分为CD3-CD8 CD16 56细胞(不影响CD8比例的小比例)和CD3-CD8-CD16 56细胞(主要成分)。b细胞的表面标记为CD19，理论上CD3-CD19细胞是真正的b淋巴细胞。CD3 CD19细胞很少，不能放任不管，因此CD19细胞是b淋巴细胞。在抗肿瘤作用中，CD4和CD8分别是t淋巴细胞的辅助/诱导细胞子集和抑制/细胞毒性细胞子集，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴细胞因子加强和扩大免疫反应过程，诱导其他免疫细胞(如杀伤t细胞、b细胞等)一起起抗肿瘤作用，减少CD4细胞导致免疫功能下降CD4/CD8比率是重要的免疫状态监测指标，其下降与免疫系统损伤程度有关。CD4见于应用恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、免疫抑制剂的人身上。CD8见于自身免疫性疾病或过敏性疾病。CD4/CD8比例增加时，在恶性肿瘤、自身免疫疾病、过敏、病毒感染等方面发现。在艾滋病中发现CD4/CD8比例(经常小于0.5)。监测器官移植拒绝反应时，CD4/CD8比率增加，就预示着可能发生拒绝反应。淋巴细胞负责免疫的主要功能。淋巴细胞亚群的测量有助于了解身体的免疫状态和某些疾病的监测。将多种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，并与多色荧光染料结合，通过流式细胞术检测，将多种功能的淋巴细胞子集分开，得到各子集的相对比例。检测最多的子集包括t细胞(CD3)、b细胞(CD19)、NK细胞(CD16 56)、辅助t细胞(CD3 CD4)和抑制t细胞(CD3 CD8)。(1)用CD3/CD19区分t淋巴细胞和b淋巴细胞CD3是t细胞的特定抗原，CD19用于识别b细胞。因此，使用CD3/CD19双重标准试剂，可以区分和确认t淋巴细胞和b淋巴细胞子集。CD3，CD19阳性以独立的阳性细胞群表达。如果出现双重阳性细胞，都是幻想。因此，无需设置语音或阳性界线作为同类对照组。此外，此检测还显示双阴性群体，这些是以双阴性群体为对照的NK细胞。(2)利用CD3/CD4鉴定CD4 T细胞首先用CD3区分所有t细胞。CD3/CD4双阳性细胞是HIV病毒感染的主要目标，真正的辅助/诱导t细胞。CD3-/CD4细胞组由单核细胞组成，与CD4和t细胞相比，CD4弱表达，广泛分布在光散射参数的位置。因此，CD3/CD4抗体组合可以完全分离CD4阳性辅助/诱导t细胞。您也可以使用适当的双色组合(例如CD4和CD29、CD4和CD45RA)测量t辅助细胞子集。CD4 2H4(CD 45RA)细胞是Ts的诱导细胞。CD4 4B4 (CD29)细胞Th的诱导细胞。同样，t抑制细胞的子集可以使用CD8 CD45RA和CD8 CD29 S6F1进行测量。t辅助细胞还可以分为Th1、Th2两个子集，显示细胞内的细胞因子IFN-和IL-4，从而区分Th1细胞(CD4 /IFN-)和Th2细胞(CD4 /IL-4)。(3)用CD3/CD8鉴定CD8 T淋巴细胞CD8的表达不限于细胞毒性t细胞，此抗原也见于某些NK细胞。因此，可以使用CD3抗体分离细胞亚群。如果能用三色测定法提供更精确的子集，则：实际的t辅助细胞应为CD3 CD4 CD8-，实际的t抑制细胞应为CD3 CD4- CD8，单个标准的CD8细胞不仅包含t抑制细胞，还包含约30%的NK细胞。cd3 CD4-CD8-细胞群是与感染相关的T细胞，CD3 CD4-细胞CD3 CD4-CD8细胞CD4-CD8细胞CD4-CD8-细胞CD3 CD4 CD8细胞=CD3细胞。(4)自然杀伤细胞(NK)检测 cd16 (FCR )在大多数NK细胞中表达，但在中性粒细胞中也表达，这种抗原NK细胞的表达很弱，NK细胞激活时消失。CD56在大部分NK细胞和部分t淋巴细胞中也有表达，将CD3/cd56t淋巴细胞和CD3-/CD56 NK细胞分开使用。为了最完整地识别所有NK细胞，联合使用3种抗体。NK细胞或表达CD16或表达CD56，但不表达CD3。根据荧光强度，CD16和CD56可以从双阴性细胞中分辨NK细胞。这样组合试剂，NK细胞就能形成不同于其他细胞的单独组。图1细胞亚群的流动分析外周血是临床试验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数量和分裂。常用单元格子集的正常范围为：同一CD上有多种复制McAb，同一CD上不同McAb测量的值不同，因此必须在每个实验室中测量自己实验室的正常值。表1人外周血各细胞亚群表面抗原和流动检测正常参考值细胞表面抗原细胞名称一般参考值(%)t细胞抗原CD2总t细胞62.5-89.0CD3成熟的t细胞61.1-77.0CD4t辅助/诱导细胞亚群15.8-41.6CD5t细胞(b细胞子集)69.5-88.0CD8t细胞/细胞毒性细胞亚群18.1-29.6CD28t细胞受体共刺激分子39.5-6408CD8 /CD28细胞毒性t细胞8.6-15.5CD8 /CD28-t抑制细胞9.9-24.8CD3 /HLA-DR-静止t细胞55.3-77.1b细胞抗原CD19所有b细胞7.3-18.2CD20所有b细胞7.3-18.2NK细胞抗原CD3-/CD(16 56)NK细胞8.1-25.6造血干细胞，祖细胞CD33粒细胞前体21.3-30.4CD34多能干细胞0.1-0.5激活细胞表面抗原CD3 /HLA-DR激活t细胞1.2-5.8CD3-/HLA-DR激活b细胞3.0-11.7