植物组培外植体消毒详解

植物组培外植体消毒详解 外植体的消毒 植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。 （1）常用的消毒剂 常用的消毒剂如下表所示。理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。 常用消毒剂的使用方法及效果 酒精 酒精是最常用的表面消毒剂，以70%75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。 酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。 升汞 又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。 次氯酸钠 次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。 漂白粉 漂白粉的有效成分是次氯酸钙Ca(ClO)2，消毒效果很好，对环境无害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。 过氧化氢 也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。 新洁尔灭 这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。 （2）消毒方法 茎尖、茎段及叶片等的消毒 消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。对于一些表面不光滑或长有绒毛的材料，可用洗涤剂清洗，必要时用毛刷充分刷洗，硬质材料可用刀刮。 消毒时在超净台上操作，先用70%酒精浸泡1030s，以无菌水冲洗23次，然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用2%次氯酸钠浸泡1015min或用0.1%升汞浸510min。消毒时要不断搅动，使植物材料与消毒剂充分地接触。若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴Tween-20，最后用无菌水冲洗35次。 果实及种子的消毒 先用自来水冲洗1020min，再用酒精迅速漂洗一下。果实用2%次氯酸钠浸10min，后用无菌水冲洗23次。种子则先用10%次氯酸钠浸泡2030min，难以消毒的可用0.1%升汞消毒510min。对于种皮太硬的种子，也可预先去掉种皮，再用4%次氯酸钠浸泡810min。 花药的消毒 用于组织培养的花药多未成熟，其外面有花萼、花瓣或颖片保护，处于无菌状态。消毒时将整个花蕾或幼穗用70%酒精浸泡数秒钟，然后用无菌水冲洗23次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用无菌水冲洗23次。 根及底下部器官的消毒 由于这类材料生长于土壤中，表面带菌量大，消毒较为困难。可先用自来水冲洗，软毛刷刷洗，用刀切去损伤及污染严重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸510min或2%次氯酸钠中浸1015min，最后用无菌水冲洗3次。 在操作时要根据材料的大小、幼嫩、