气相色谱法操作规程

湖北红八号药业有限公司操作规程HuBei HongBaHao Pharmaceutical Co.,Ltd 文件标题气相色谱法操作规程文件编码TS-SPY001.00共9页起 草 人审 核 人批 准 人起草日期审核日期批准日期颁发部门GMP办公室执行日期 分发部门总经理办公室、质量管理部、生产管理部、市场部变更历史：TS-SPY001.00新订目的：制订气相色谱法操作规程，明确其检查法的操作。 依据：中华人民共和国药典2015年版； 中国药品检验标准操作规范2015年版。 范围：气相色谱法的操作。 责任：质检室主任、化验员。内容： 气相色谱法系采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 1对仪器的一般要求 所用的仪器为气相色谱仪，由载气源、进样器、色谱柱、检测器和色谱处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“气相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。 1.1载气源 气相色谱法的流动相为气体，称为载气，常用氮气，由高压钢瓶提供，经过减压装置，以一定流速经过进样口和色谱柱。氮气的纯度要求很高，至少99.99%以上，ECD检测器要求99.999%以上，否则，会损坏它。检测器要求氮气净化，经过由硅胶、分子筛（5A或4A型）、活性炭顺序分段填充的干燥管，前二者除去水分，后者吸附烃类化合物。氮气的流速和流量由相应的阀门和检测器控制。1.2进样部分 进样方式采用自动进样器。进样口温度应高于柱温3050C,进样量不超过数微升，柱径越细，进样量越少，采用毛细管时，一般应分流，以免过载（分流就涉及到分流比：如5：1，就是实际进入色谱柱的量是进样量的1/5，分流比可根据药典品种项下规定在仪器上设置）。1.3色谱柱 色谱柱分为填充柱或毛细管柱（为gc的分离系统）。材质为不锈钢或玻璃。常用的固定液有甲基聚硅氧烷（较弱极性）、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷（中等极性）、聚乙二醇（较强极性）等。新柱必须老化后才能使用，其目的有二：一是彻底除去残留溶剂及易流失的物质；二是促进固定液均匀地、牢固地分布在担体表面。老化的时间从几小时到几十小时不等，使用FID时，毛细管柱至少24小时；使用ECD时，则需要至少48小时。老化时，柱的另一端一定要离开检测器！温度低于色谱柱最高使用温度2030C。老化时，应捎带上进样口（250C、16h）， 检测器（低于其最高使用温度2030C），以除去污染物。长时间使用或未用的柱，也应老化，使基线稳定。较易分离的样品使用填充柱，较难分离的样品使用毛细管柱。1.4柱温箱 柱温箱控制精度应在+-1C,且温度波动小于每小时0.1C,是因为温度的波动会影响色谱分析结果的重现性。温度控制系统分为恒温和程序升温两种。較窄沸程的样品用恒温，宽费程用程序升温。1.5 检测器 是将流出色谱柱的载气中被分离组分的浓度（或量）变化，转换为电讯号（电压或电流）变化的装置(是gc的分析系统)。 所用的检测器为氢火焰离子化检测器（FID），电子捕获检测器（ECD）。 FID对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数药物；ECD对亲电子的电负性物质产生信号，适合含卤素的化合物（中药的农药残留）。 检测器的温度应高于色谱柱3050C，通常为250350C,不得低于150C,以免水汽凝结，影响检测结果。 1.6数据处理系统 可分为记录仪、积分仪、计算机工作站。它们将从色谱柱流出的组分经检测器检测且经放大器放大后的信号随时间记录下来，且对峰面积进行积分，数据的处理。2系统适用性试验 色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个参数。其中，分离度和重复性尤为重要。 按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，应符合要求。 2.1色谱柱的理论板数（n） 用于评价色谱柱的效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。 在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR(以分钟或长度计，下同，但应取相同单位)和峰宽（W）或半高峰宽（Wh/2）,按 n=16（TR/W）2或n=5.54（tR/Wh/2）2计算色谱柱的理论板数。 2.2分离度（R） 用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分（内标物质或其他难分离物质）的分离度，或将供试品或对照品适当的方法降解，通过测定待测组分与某一降解产物的分离度，对色谱系统进行评价与控制。 无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其它峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5。分离度的计算公式为 R=2（tR2-tR1）/(W1+W2) 或R=2（tR2-tR1）/1.70(W1,h/2+W2,h/2) 式中，tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W1、W2及W1,h/2、W2,h/2分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。 2.3重复性 用于评价连续进样后，色谱系统响应值的重复性能。采用外标法时，取各种项下的对照品溶液，连续进样5次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。2.4拖尾因子（T） 用于评价色谱峰的对称性。为保证分离效果和测量精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。拖尾因子计算公式为 T=W0.05h/2d1式中，W0.05h为5%峰高处的峰宽；d1为5%峰高出峰顶点至峰前沿之间的距离。 除另有规定外，峰高法定量时T应在0.951.05之间。 峰面积法测定时，若拖尾严重，将影响峰面积的正确测量。必要时，应在各品种项下对拖尾因子作出规定。 3测定法 3.1内标法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高。按下式计算校正因子 校正因子（f）=（As/cs）/(AR/cR) 式中，As为内标物质的峰面积或峰高；AR为对照品的峰面积或峰高；cs为内标物质的浓度；cR为对照品的浓度。 再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量 含量（cX）=fAX/(AS /cS) 式中，AX为供试品峰面积或峰高；cX为供试品的浓度；AS内标物质的峰面积或峰高；cS为内标物质的浓度；f为校正因子。 采用内标法，可避免因样品前处理或进样体积误差对测定结果的影响。 3.2外标法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量 含量（cX）=cR（AX/AR） 式中各符号意义同上。 3.3标准溶液加入法 精密称（量）取待测成分对照品适量配制成适当浓度的对照品溶液取一定量，精密加入到供试品溶液中，根据外标法测定主成分含量，再扣除加入的对照品溶液含量，即得供试品溶液中主成分含量。按下述公式计算，加入对照品溶液前后校正因子相同，即：Cx+cxAiscxAx =则待测组分的浓度Cx可通过如