抗生素类药物分析

在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称,内酰胺类氨基糖苷类四环素类大环内酯类多烯大环类多肽类,1.抗生素（antibiotics）,2.分类,一、概述,化学纯度较低活性组分易发生变异稳定性差,3.来源,4.抗生素的特点,生产工艺复杂发酵过程不易控制，易受污染,原因,一、概述,鉴别：物理化学方法、微生物法检查：水分、异常毒性、热原、细菌内毒素、降压物质等含量/效价测定：微生物法：与临床疗效吻合，灵敏度高，但操作复杂费时；理化方法：准确度与专属性较高，且操作简便，但与临床疗效有偏差,5.抗生素质量分析,一、概述,1.化学结构,包括青霉素类和头孢菌素类,青霉素类：6-APA为母核头孢菌素类：7-ACA为母核,中国药科大学药学院药分教研室,二、内酰胺类,酸性较强（pKa2.5-2.8）临床常用其碱金属盐（水溶性好）,酸性(羧基),有多个手性碳,旋光性,青霉素类：苯环取代基头孢菌素类：母核有共轭结构,UV（共轭）,干燥条件较稳定，溶液不稳定,稳定性(内酰胺),2、主要理化性质,降解失效,氧化剂、酸、碱酶、金属离子、,青霉素,二、内酰胺类,1）羟肟酸铁反应：内酰胺类羟肟酸显色2）茚三酮反应-氨基蓝紫色3）双缩脲反应内酰胺类紫红色4）光谱法（UV、NMR）5）色谱法（HPLC、TLC）,NH2OHHClNaOH,茚三酮,碱性酒石酸铜,呈色反应,3、鉴别,二、内酰胺类,二、内酰胺类,4、检查,聚合物有关物质和异构体吸光度残留溶剂结晶性,5、含量测定-碘量法（ChP2000）,二、内酰胺类,原理：青霉素与头孢菌素本身不与碘反应，但其碱性降解产物可消耗碘,青霉素族头孢菌素族,NaOH水解,4I2H+,8I-,I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6,定量过量,剩余,5、含量测定,-碘量法（ChP2000）,反应分两步进行：,水解反应(按化学计算量进行),氧化-还原反应(无定量关系，受温度、pH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定),5、含量测定,-碘量法（ChP2000）,因样品中杂质会消耗碘，故应作空白试验。,加入样品，不加碱；其余试剂（醋酸盐缓冲液，碘液，硫代硫酸钠）都要加碱。,空白试验:,空白试验与经典空白试验不同：,5、含量测定,-碘量法（ChP2000）,含量对照品,V样空-V样W对V对空-V对W样,灵敏度高：样品:碘=1:8反应条件、实验操作要求高,1份含量,V对、V对空V样、V样空,加试剂次序、反应时间、滴定速度相同,特点：,5、含量测定,-电位配位滴定法（汞量法）,原理：青霉素不与汞盐反应，其碱性降解产物可与Hg2+络和。,Hg+2R-SH(RS)2Hg+2H+,方法说明：a、空白试验与碘量法类似，加样品，不加NaOHb、与碘量法相比，汞量法不需对照试验,5、含量测定,-其他常用方法,酸碱滴定法：应用广泛,硫醇汞盐法,HPLC法：应用广泛,1.化学结构,三、氨基糖苷类,都是以氨基环醇与氨基糖缩合而成的苷；分子结构中都含有多羟基；均为碱性抗生素；,链霉素,临床应用其硫酸盐,碱性(氨基),（糖）：有多个手性碳,旋光性(糖),水溶性,溶解度(氨基、羟基),强酸、碱条件均可水解,稳定性(苷),2、主要理化性质,三、氨基糖苷类,3、鉴别,三、氨基糖苷类,茚三酮反应：具羟基胺类，-氨基酸性质,链霉素+水和茚三酮蓝紫色,链霉素N-甲基葡萄糖胺,N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反应：,红色,水解,对二甲氨基苯甲醛,乙酰丙酮OH-,8-羟基喹啉NaOBr,坂口（Sakaguchi）反应：(链霉胍特有）,麦芽酚（Maltol)反应：(链霉糖特有）,三、氨基糖苷类-鉴别,链霉素麦芽酚紫红色,链霉素链霉胍橙红,硫酸盐反应,或-萘酚,4、检查-,来源：,发酵中产生,BP:,薄层色谱法（杂质对照品法）,要求：NC22000，C2a峰和C2峰的分离度应符合要求，重复进样RSD2.0%,三、氨基糖苷类,链霉素中链霉素B的检查,庆大霉素C组分测定（系统适用性试验）,色谱柱：ODS,流动相：H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸钠溶液(0.2M)，必要时调节甲醇的含量。,检测波长：330nm（邻苯二甲醛柱前衍生）,4、含量检测,三、氨基糖苷类,氨基糖苷类含量检测,微生物法、HPLC法等,四、四环素类,1.化学结构,四、四环素类,-OH：酸性N(CH3)2：碱性与酸、碱均可成盐临床多用盐酸盐,两性,旋光性,易发生异构化，降解等反应，性质不稳定,稳定性,酚羟基、烯醇基与Ca2+、Mg2+络合显色,与金属离子络合,2、主要理化性质,UV和荧光,四、四环素类,2.主要理化性质,碱性C环开环，形成内酯异四环素,弱酸性（pH2-6）A环C-4异构化差向四环素,酸性（pH2）C环脱水脱水四环素,四、四环素类,差向异构体,异四环素,OH-,四、四环素类,四、四环素类,3.鉴别,1）浓硫酸反应2）FeCl3反应：（酚羟基）显红色褐色3）TLC、HPLC4）荧光：（含共轭双键）紫外灯照射下产生不同颜色荧光,HPLC法,4.检查,TLC、HPLC法杂质吸收度（降解产物颜色较深）残留溶剂,5.含量,