实验设计方案.doc

实验设计方案题目：水飞蓟油脂质体制备及包封率测定选题依据：水飞蓟（Silybum marianum Gaertn）又名为水飞雉、奶蓟、老鼠筋、乳蓟子等，为一年或两年生菊科草本植物1，可分为紫花水飞蓟及其变种百花水飞蓟，是一种优良的药用植物和油料植物，被载入2010版中国药典。其果实用于治疗肝损伤超过2000年2，含有大量脂肪，含油率在20%30%左右，油味香、色泽好，和大豆油有同等营养价值，可以食用3，被称为“袋鼠油”。果实种子榨油后油渣提取的黄酮类化合物水飞蓟素及水飞蓟宾，是其果实中主要化学成分。不仅具有抗肝损伤，还具有提高免疫调节、降血脂、预防高血压等作用，不同剂型的保肝药在临床上已经使用4。研究现实意义和前景：水飞蓟素及其中成分水飞蓟宾具有明显的保肝护肝作用，国内外学者对水飞蓟的研究活跃，目前国内外对水飞蓟资源的利用仍然以提取水飞蓟素、水飞蓟宾为主，对果仁中油提取利用为辅5。但是水飞蓟油除了含有水飞蓟素和水飞蓟宾，还含有大量亚油酸、氨基酸、蛋白质、维生素E等，但不仅仅作为营养价值很高的食用油和调和油使用。近几年在医药研究发现可以用于治疗多种疾病，包括病毒性肝炎和肝硬化6、降低血脂、防止高血压、冠心病等。所以有必要对水飞蓟油进行开发利用，在食品和药品中开拓广泛市场。由于水飞蓟油难溶于水，口服生物利用度低。因此将水飞蓟油以脂质体为载体增加水溶性同时，借助脂质体的靶向性和缓释性，提高生物利用度。制备脂质体的方法有被动载药法中薄膜分散法7,8、逆相蒸发法、二次乳化法、冷冻干燥法9等，主动载药法中醋酸钙梯度法10、PH梯度法11、硫酸铵梯度法等12。鉴于薄膜分散（thin-film dispersion method）方法简便，操作简单，条件温和，同时适用于油类成分，目前有多种油性药物采用薄膜分散法制备脂质体13,14,15 。本实验制备水飞蓟油脂质体，在包封率和粒径达到要求条件下，期望能改善水飞蓟油溶解度，提高生物利用度。使得水飞蓟油在医药领域应用上前景宽阔。实验设计和实验内容：目的：以薄膜分散法制备水飞蓟油脂质体，以包封率作为主要评价指标，优化水飞蓟油脂质体的最佳处方和最优工艺。实验步骤简述：1、制备水飞蓟油溶液以紫外分光光度计进行紫外吸收波长扫描，确定最大吸收波长，配制不同溶度水飞蓟油溶度，绘制标准曲线。2、以薄膜分散法制备脂质体，高速离心，去除的游离水飞蓟油留下待用。3、脂质体经破乳再除去卵磷脂后，在最大吸收波长处测吸光度值，代入标准曲线方程，计算m包，并计算包封率%。4、用配制不同溶度水飞蓟油溶液的溶剂将游离水飞蓟油提取，测定吸光度计算m游，并计算回收率%。5、对薄膜分散制备工艺中对包封率影响因素进行单因素考察（设定制备中影响因素和水平），并正交实验对实验优化，得到最佳制备工艺。实验年限、经费、可行性考察：1）年限：约三个月2）经费：在所需仪器允许条件下，经费在计划范围内。3）可行性：实验条件允许，方法普遍使用，预实验可行。实验中关键步骤和实验评价标准、期望指标：1）实验中关键步骤：1、 薄膜分散法制备脂质体过程中，将有机溶剂完全蒸干。2、 考虑到水飞蓟油稳定性，真空干燥时间和温度调节适宜。3、 脂质体破乳通过加破乳剂超声，使破乳充分得到包封率准确。4、薄膜分散法制备的脂质体是多室脂质体（multilamellar vesicles），在薄膜挤出和超声中需掌握时间等因素得到粒径均匀单层脂质体。2）评价标准：以包封率作为评价指标，根据2010版药典规定脂质体包封率不低于80%。3）期望指标：包封率在80%，粒径能控制在nm级别且粒径均匀。参考文献：1 Hadolin M, Skerget M, Knez Z, Bauman D (2001) High pressure extraction of vitamin E-rich oil from Silybum marianum. Food Chem 74:355364.2 Flora, K., Hahn, M., Rosen, H., Benner, K., 1998. Milk thistle (Silybum marianum) for the therapy of liver disease. Am. J. Gastroenterol. 93, 139143.3 钱学射,张卫明,顾龚平,等.值得开发与利用的水飞蓟油J.中国野生植物资源4 孙东,胡经琦,王字明.水飞蓟药理作用及其在肝病中的临床应用J.中国全科医学,2007,10(2):1891-1893.5 刘婷,王艳龙.水飞蓟油提取及应用研究进展J.安徽农学通,2012，18(17):57-596 Silybum marianumL. seed oil: A novel feedstock for biodiesel productionJ.Arabian Journal of Chemistry,2012.7 Spyridon Mourtas,Styliani Fotopoulou,Stela Duraj,etal.Liposomal drugs dispersed in hydrogels: Effect of liposome, drug and gel properties on drug release kineticsJ.Colloids and Surfaces B: Biointerfaces,2007,55(2):212-221.8 Nina Dragicevic-Curic,Sven Winter,Mirjana Stupar,etal.Temoporfin-loaded liposomal gels: Viscoelastic properties and in vitro skin penetrationJ.International Journal of Pharmaceutics,2009,373,77-84.9 Natassa Pippa,Stergios Pispas,Costas Demetzos,The fractal hologram and elucidation of the structure of liposomal carriers in aqueous and biological mediaJ.International Journal of Pharmaceutics, 2012, 430:657310 Kohei Hironaka,Yuta Inokuchi,Takuya Fujisawa,etal.Edaravone-loaded liposomes for retinal protection against oxidative stress-induced retinal damageJ. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2011,79:11912511 Amey Bandekar,Shrirang Karve,Min-Yuan Chang,etal.Antitumor efficacy following the intracellular and interstitial release of liposomal doxorubicinJ.Biomaterials,2012,33(17):4345-435212 崔福德. 药剂学M.北京:中国医药科学出版社,2011.13 杨莉斌, 刚宏林,胡荣.鸦胆子油脂质体的理化性质及稳定性考察J.哈尔滨医科大学学报,2010,44(1) :66-73.14 Salima Varona,Angel Martin, andMaria Jose Cocero.LiposomalIncorporation of Lavandin EssentialOilby a Thin-Film Hydration Method and by Particles from Gas-Saturated SolutionsJ.Industrial & Engineering Chemistry Research,2011, 50, 20882097.15