胃癌Her的检测--南京军区总医院周晓军主任

胃癌HER2的标准化检测,周晓军南京军区南京总医院,HER2，又名HER2/neu，c-erbB-2，表皮生长因子受体（EGFR）家族成员；原癌基因，位于17q21，编码相对分子量185KD的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受体，表皮生长因子样分子），在细胞表面表达；通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与分化。,HER2基因,HER2 受体跨膜二聚体的信号传导途径,1 = 基因拷贝数2 = mRNA 转录3 = 细胞表面受体蛋白表达4 = 细胞外受体功能域释放,A = HER2 DNAB = HER2 mRNAC = HER2 receptor protein,正常,扩增/过度表达,细胞核,细胞质,细胞膜,1,2,3,4,C,B,A,HER2过度表达：正常状态的10-100倍,HER2癌基因的致瘤机制： 抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭 力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。研究表明： 30以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/ 过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等); 胃癌中HER-2/neu基因的过表达率为7%- 27%(-45%)，通过FISH检测基因扩增率为 10%-20%,胃癌组织学类型(WHO2000)：,1管状腺癌（adenocarcinoma）最多见。分高、中、低分化，此型癌多为高分化，恶性度较低，转移较晚。2乳头状腺癌（ papillary form）：腺腔内 出现许多乳头。 3印戒细胞癌（signet-ring cell）：癌细胞胞浆内出现大量偏酸性粘液，常将胞核挤压于癌细胞浆之一侧，形似戒指，故称之为印戒细胞癌。4.,Lauren分型(1965): 根据胃癌细胞形态和胃癌组织中粘液性质将胃癌分为肠型和弥漫型两大类。肠型胃癌中唾液酸粘液及硫酸粘液多见，发生于肠化生上皮；肠型胃癌多见于老年患者，恶性度较低，分化程度差别大，与肿瘤大小反比，组织学上多为乳头状腺癌或腺管状腺癌。弥漫型胃癌中中性粘液多见。弥漫型胃癌多见于青年人，恶性度较高，肉眼类型多为皮革胃，组织学上多为粘液细胞癌（印戒细胞癌）及未分化癌。Ming（1977）：膨胀型 VS 浸润型,胃癌HER2检测,HER2 gene,HER2 gene,HER2 gene,双链靶基因,变性的单链DNA,与荧光标记探针复性产生荧光信号,荧光原位杂交法原理 Fluorescence in situ Hybridisation (FISH),HER2 probe,CEP 17 probe,比值 2.2提示Her-2有扩增,比值介于1.82.2临界值,Aneusomy, Not amplified,Denature target DNAand hybridise probe,Primary antibodybinds to the probe,Secondary antibody (with unactivatedvisualisation agent)binds to primary antibody,色素原位杂交法原理chromogenic in situ hybridization (CISH),CISH：无HER2基因扩增,CISH： HER2基因低扩增,CISH： HER2基因高拷贝扩增,IHC检测:,抗原修复有 / 无,组织固定方法,抗体选择,评分标准,变异性,IHC vs FISH,Fig. 1 HER-2 protein expression evaluated by immunohistochemistry (A-C) (original magnification 200) and HER-2 gene amplification assessed by FISH (D-F) (original magnification 1000) in gastric carcinoma tissue. A and D, 3+ by immunohistochemical staining with HER-2 amplification. B and E, 2+ by immunohistochemical staining with HER-2 amplification. C and F, 1+ by immunohistochemicalstaining with HER-2 amplification.,胃癌HER2检测,胃癌HER2检测,HER2检测流程,组织采集,组织形态,检测耗时,评分标准,足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本,胃癌HER2检测的流程,多处活检的必要性,Image courtesy of Prof. G Viale,HER2检测流程,组织采集,检测耗时,评分标准,足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本,胃癌HER2检测的特性,肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片,组织形态,HER2检测流程,和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC） 检测HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+明视野方法优先,足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本,肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片,检测耗时,评分标准,组织采集,组织形态,胃癌HER2检测的特性,明视野技术有利于发现HER2阳性肿瘤区域,相比乳腺癌，着色异质性在胃癌和胃食管结合部癌更常见1胃癌中， 530%病例会出现肿瘤异质性1-3,Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805.Rschoff J, et al. der pathologe 2010; 31:20817. Rschoff J, et al. Virchovs Archive 2010; accepted for publication.,Image courtesy of Prof. G Viale,HER2检测流程,和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC） 检测HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+明视野方法优先,足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本,肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片,检测耗时,组织采集,组织形态,胃癌HER2检测的特性,10%的肿瘤细胞的基侧膜、侧膜强染或完全膜强染定义为IHC阳性不界定活检标本染色的肿瘤细胞占总体肿瘤细胞的百分比：需要5个 (成簇) 细胞染色,评分标准,Herceptin EU SmPC: http:/www.ema.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/Herceptin/emea-combined-h278en.pdf.,胃癌HER2检测的评分标准,完全、基侧膜或侧膜染色反应,HER2阳性胃癌和胃食管结合部癌可能表现为基侧膜、侧膜或完全膜染底侧膜、侧膜染色的发生通常与低分化胃腺癌细胞结构有关,Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805.Image reproduced courtesy of TARGOS Molecular Pathology GmbH.,2.5x 5x,20x 40x,40x,10x 20x,放大: x-倍,评分,3+,2+,1+,0,强染色 (无放大),弱到中度染色,隐约可见 (更高放大倍数),阴性,染色强度,IHC染色强度对应的放大倍率,为了分辨明显的细胞间（完全、底侧膜或侧膜）的膜染色，所需的显微镜放大倍率（ 工作距离）,10x,20x,需更高的放大倍数,IHC 2+,20x,需高倍放大,IHC 1+,40x,40x,5x,无需放大视野可见膜染色,IHC 3+,甚至无需显微镜也可见,5x,放大倍率和HER2评分,肿瘤组织内,边缘挤压所至的假象,IHC: 样本排除标准,HER2检测ICH法染色的活检/手术标本,排除保存情况差的肿瘤组织,排除非特异性染色,非肿瘤组织内,肠型化生、再生（邻近溃疡）,胞浆、核、仅底边、腔缘部分着色,评分为0,无染色 (40x 放大倍率),IHC: 评分标准,完全膜染色或基侧膜、侧膜染色,染色强度 (可见的不可疑的膜染色),强染色 (2.5x5x 放大倍率),弱到中度染色(10x20x 放大倍率),必须至少有:活检标本中5个 (成簇) 细胞染色手术标本中10%的肿瘤细胞染色,评分为2+,隐约可见染色(40x 放大倍率),评分为1+,评分为3+,特异性膜染色 (明显的 & 细胞间的),HER2检测流程,和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC） 检测HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+明视野方法优先,足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本,肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片,组织采集,组织形态,胃癌HER2检测的特性,10%的肿瘤细胞的基侧膜、侧膜强染或完全膜强染定义为IHC阳性不界定活检标本染色的肿瘤细胞占总体肿瘤细胞的百分比：需要5个 (成簇) 细胞染色,评分标准,检测耗时,检测所需时间不应该超过5个工作日 (晚期胃癌进展十分快)需应用多学科方法,0,FISH,+,可接受赫赛汀治疗,可接受赫赛汀胃癌治疗的欧盟标准,+1,+2,+3,IHC,肿瘤标本,Herce