p15和Fas基因在子宫内膜癌中的表达.doc

p15和Fas基因在子宫内膜癌中的表达作者：王崇丹,扈清云单位：黑龙江齐齐哈尔医学院第三附属医院妇产科黑龙江省教育厅科学技术研究项目(项目编号11521321) 【摘要】 目的：探讨p15和Fas在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌组织及10例正常子宫内膜组织中p15和Fas的表达，并分析两基因与子宫内膜癌临床病理学参数的关系。结果：p15和Fas在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的阳性表达率差异均有统计学意义(分别P0.01，P0.05)；p15的阳性表达率在子宫内膜癌不同组织学分级中差异有统计学意义(P0.05)；Fas的阳性表达率在子宫内膜癌不同组织学分级和肌层浸润程度中差异有统计学意义(P0.05)；p15和Fas在子宫内膜癌中的表达呈正相关(r=0.401，P0.01)。结论：p15和Fas的表达与子宫内膜癌的发生和发展关系密切，p15和Fas的表达对判断子宫内膜癌患者的预后具有重要意义。 【关键词】 子宫内膜肿瘤 基因 肿瘤抑制 免疫组织化学 p15 Fas资料与方法 收治60例子宫内膜癌组织标本取源于齐齐哈尔市三级甲等医院。临床分型：子宫内膜癌采用1988年FIGO分期标准：期40例、期10例、期7例、期3例；肿瘤浸润肌层深度：1/2者35例，≥1/2者25例；有淋巴结转移7例，无淋巴结转移53例；病理分级：高分化36例，中分化18例，低分化6例；组织学类型：腺癌53例，腺鳞癌5例，透明细胞癌1例，浆液性乳头状腺癌1例。 主要试剂：p15鼠抗人单克隆抗体、Fas鼠抗人单克隆抗体和即用型免疫组织化学超敏S-P试剂盒(广谱)。 实验方法：所有标本均经10%福尔马林溶液固定、石蜡包埋。使用HE染色初步观察子宫内膜癌组织的病变特点，确定组织类型和病理分级，筛选入组。按试剂公司提供的染色程序进行S-P免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中p15、Fas的表达，免疫组化前切片进行微波抗原修复，免疫组化S-P法参照试剂说明书进行。 结果判定：免疫组化单染判定标准：以细胞膜、细胞浆或细胞核出现清晰的黄-棕褐色颗粒判定为阳性。每例先在低倍镜下选取阳性细胞多且分布均匀的区域，然后随机计数10个不重复、不重叠的高倍视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数，取平均数作为结果。根据细胞有无着色分为：0分：切片中5%细胞呈阳性表达；1分：切片中5%50%细胞呈阳性表达；2分：切片中50%的细胞呈阳性表达。≥1分判断为阳性。 统计学处理：采用SPSS17.0统计分析软件分析处理。应用X2检验，Spearman秩相关检验，以P0.05为差异具有显著性。 结 果 p15在子宫内膜癌组织中的表达：p15表达定位于细胞核和细胞浆，细胞核着色深。经X2检验，p15在正常子宫内膜组织中的阳性表达率为100.0%，1分为20.0%(2/10)、2分为80.0%(8/10),在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为66.7%，1分为30.0%(18/60)、2分为36.7%(22/60)，两者比较差异有统计学意义(X2=9.618，P0.01)。在子宫内膜癌临床病理学参数中，不同组织学分级间p15阳性表达率差异有统计学意义(X2=10.274，P0.01)，不同临床分期、不同肌层浸润深度、有无淋巴结转移及不同组织学类型p15阳性表达率差异无统计学意义(X2=2.535、0.857、0.991、0.020，P0.05)，见表1。 Fas在子宫内膜癌组织中的表达：Fas的表达主要位于细胞膜及细胞浆上，细胞膜着色深。经检验，Fas在正常子宫内膜组织中的阳性表达率为80.0%，1分为50.0%(5/10)、2分为30.0%(3/10)，在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为46.7%，1分为41.7%(25/60)、2分为5.0%(3/60)，两者比较差异有统计学意义(X2=6.852，P0.05)。在子宫内膜癌临床病理学参数中，不同肌层浸润程度和不同组织学分级Fas阳性表达率差异有统计学意义(X2=10.162、8.943，P0.05)，不同临床分期、有无淋巴结转移及不同组织学类型中差异无统计学意义(X2=2.616、2.297、0.505，P0.05)，见表1。表1 p15与Fas在子宫内膜癌中的表达（略） p15与Fas在子宫内膜癌组织中表达的相关性：p15和Fas在子宫内膜癌中表达的相关性经Spearman秩相关检验呈正相关 (r=0.401，P0.01)，见表2。表1 p15、Fas表达与临床病理学参数的关系例(略) 讨 论 子宫内膜癌是妇科常见的三大恶性肿瘤之一，其发病机制至今仍不明确。目前认为肿瘤可能是染色体的特定区域缺失、癌基因的激活和抑癌基因的失活，以及细胞增殖与凋亡之间的平衡失调所引起的病变。p15基因是已被公认的肿瘤抑制基因1，Fas是促凋亡基因2，p15和Fas与子宫内膜癌的关系目前研究较少。本研究应用免疫组织化学方法，对子宫内膜癌组织中p15和Fas的表达进行观察，探讨它们在子宫内膜癌发生发展过程中的作用及相互关系。p15在子宫内膜癌组织中表达的意义：近年来，许多研究表明细胞周期的失控是导致肿瘤发生的重要原因。p15是迄今发现的最直接抑制细胞周期的多肿瘤抑癌基因之一，p15通过作用于细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)与细胞周期蛋白D(CyclinD)复合物，特异性抑制CDK4、CDK6激酶活性，阻止Rb蛋白磷酸化，限制细胞从G1期进入S期，从而抑制细胞增殖3。本研究结果显示：p15的低表达与子宫内膜癌的发生发展有关，与夏瑾瑜等4研究结果相似，与张丽志等3研究结果不一致，可能是实验结果判定方法不同所致，提示随着肿瘤分化程度的降低，p15抑制细胞增殖的作用相应减弱，因而肿瘤细胞增殖活跃，利于肿瘤的进展。p15基因的检测对预测子宫内膜癌的愈后具有重要参考价值。 Fas在子宫内膜癌组织中表达的意义：近年来研究显示，Fas系统在肿瘤免疫逃避机制中起重要作用，肿瘤的发生还与细胞增殖与死亡的动态平衡失调有关。本研究结果显示：Fas基因的低表达与子宫内膜癌的发生发展密切相关，与王红英等5研究结果相似，表明子宫内膜癌发展进程中可能存在Fas基因突变，并由此造成Fas系统启动的凋亡减弱。一方面可能Fas抑制自身的凋亡，另一方面可能对肿瘤的生长有着促进作用。Fas基因的检测可作为反映子宫内膜癌预后的重要参考指标。 p15、Fas在子宫内膜癌中表达的相关性：现在不少学者认为细胞癌变是多基因协同作用的结果，有≥2个功能不同的癌基因的激活和(或)抑癌基因的失活，才有可能引起细胞的癌变，而且除了原癌基因的激活与肿瘤抑制基因的失活外，细胞增殖与凋亡之间的平衡失调也是肿瘤发生发展的重要原因。本研究显示p15与Fas的低表达共同参与子宫内膜癌的发生、发展，进而提示子宫内膜癌的发生可能是某些因素导致了细胞周期调控途径的异常及细胞凋亡途径的异常，致使异常增殖细胞凋亡障碍，从而促进了子宫内膜癌的发生、发展6。【参考文献】 1 刘冬满,张志勇,郑寰宇,等.老年原发性卵巢癌p16和p15蛋白的表达及其临床意义.中国优生与遗传杂志,2008,28(12):2347-2348.2 刘光伟,龚守良,等.细胞凋亡信号传导途径的研究进展.吉林大学学报,医学版,2004,30(3):485-488.3 张丽志,崔满华,白凤玲,等.p15和p16基因在子宫内膜癌中的表达.吉林大学学报,2005,31(1):118-120.4 夏瑾瑜,戴淑真,罗兵,等.原发性子宫内膜癌组织p15基因及其蛋白的表达.齐鲁医学杂志,2002,17(4):283-285.5 王红英,于月成,卜宁,等.Fas/FasL系统在人子宫内膜增生过长和子宫内膜