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【专题】肿瘤模型专区（5-8页）肝癌裸鼠模型、人源smmc-7721细胞株、抗体选择doctor_wjj：我是做肝癌裸鼠模型的,细胞株用的是人源的smmc-7721,现在实验做完,准备杀老鼠测一些血清和瘤体的生长因子,不知道用人源还是鼠源的抗体?swordzjsh：这个你要具体情况具体分析了，我这方面注意的不多，但是你可以查一查文献，国外的文献很多都是用人肿瘤裸小鼠移植瘤模型作一些血液生化，以及肿瘤因子的实验，你对照别人的实验看一看吧，这个瘤株国外很少有用的，因为是国内自己构建的，国际公认度不好，但是单单是回答你这两个问题的话，你找任何一个人肿瘤裸小鼠移植瘤模型进行与你类似实验的文献参考，我的理解血清方面的东西应该还是小鼠的，肿瘤体相关的东西是人源的。仅供参考！如与文献冲突，以文献为准！开发抗肿瘤新药、裸鼠做模型、抑瘤率、肝功和肾功Dongqingsummer：开发抗肿瘤新药时，用裸鼠做模型，除了抑瘤率之外，是不是还应该测肝功和肾功呢？那取出的血怎么存放？有谁在做新药的开发？在剥取瘤块的同时，是不是还应该把心肝肾也剥出一同包埋了？以待后用。zym145286：我是做新药研发,并且也在做裸鼠实验,但是我所看的材料还有知道原则里面没有说要测量肝肾的什么什么啊,呵呵,只是做瘤块大小以及重量的比较了,我们做的是初级筛选,不知道跟你门一样不。新药研发、初筛、抑瘤率、瘤株个数Dongqingsummer：我们做的也是初筛。现在主要就是做抑瘤率。请问你要做几种瘤株？zym145286：今天给你查了一下我的技术指导原则，上面要求体外筛选是一般至少在12种人癌细胞系，体内是至少6种接种胰腺癌（FWK-1）、小鼠体重下降Dongqingsummer：7月26号接种胰腺癌（FWK-1），用的是裸鼠，接种时的体重是13-17克。7月28号开始给药，每隔两天测一次体重。不知为什么，各组小鼠的平均体重都下降了。有的小鼠身上还发青，也不光滑。每隔两天给鸡蛋瓜子什么的，从今天起又把饮用水换成了葡萄糖。现在小鼠都不怎么吃东西。请问体重下降原因是什么？有人遇见过这种情况么？我用的是中药颗粒剂，做过急毒。给药的剂量并不大。而且不但是给药组，就连模型对照组体重也有所下降。真担心接下来会死亡。有可能是实验室内有潜在的病菌么？怎么样防止体重继续下降？zym145286：癌细胞接种后一般来讲体重都会下降的，正常吧，我的也是。BEL7402、接种法、成瘤率Dongqingsummer：A549我前段做了预试，用的瘤块接种法，长出的瘤块大小不一，个体差异特别大。后来老板就没让做正式实验。你做的BEL肝癌细胞是怎么接种的？是用细胞悬液接种的还是瘤块法？多少天出瘤，出瘤率怎么样？你都做预试么？还是直接做正式实验？我的裸鼠体重下降的太快了，有一组7月26号平均体重17.44g，8月3号已经掉到14.71克了。zym145286：我也是刚做体内筛选，目前接种BEL7402，最开始接种的是细胞系内的细胞悬液，1106大概长一周就可以看见瘤子了，半个月左右可以长到300MM3了，然后我又在体内传代了3次，现在正好是刚到预试验了，呵呵，悬液接种后长的还比较快，传代过程比较苦恼，有点慢。成瘤率我感觉比较高，我手法不怎么好的情况下，用悬液接种是100成瘤，之后用的是瘤块接种法，上周接种31只鼠，现在确定成瘤的是25只：）呵呵，还有其他问题可以在继续探讨：）鼠肝炎Dongqingsummer：另外，我发现：在上批实验中，最后处死裸鼠时，发现裸鼠的肝脏有网状的东西。好像是蜂窝状的小坑坑。这是怎么回事尼？是不是有鼠源性的肝炎？为什么会有肝损伤？Swordzjsh：你描述的肝脏的症状很像鼠肝炎，如果能贴一张照片出来就能帮你判断了，这个病是裸鼠的杀手，一般小鼠大鼠得了不会有太大的问题，裸鼠感染了基本必死无疑，而且是一批一批地死亡。看你所说的，动物能坚持到实验后期，说明动物的供方没有问题，是你们的动物房污染，你们是不是把小鼠和裸鼠养在一起了？如果确定是鼠肝炎，需要处死所有的动物（包括瘤种动物），整个动物房彻底消毒。胃癌、皮下移植瘤的模型、罗格列酮Haiyingsun：哪位做过胃癌皮下移植瘤的模型用罗格列酮处理，请问你的罗格列酮的浓度如何选择？你们做移植瘤模型时细胞悬液的浓度是多少？是接种在腋下成瘤虑高吗？我师兄当年是接种在背部皮肤成瘤虑还可以，这样造模时间需要很长吗？Swordzjsh：不好意思，没有做过罗格列酮，至于接种部位，一般接种于腋下便于成瘤，如果肿瘤生长速度较快，成瘤率较高，也可以接种于背部肩胛骨处，看来你师兄的实验是属于后者。至于胃癌的生长速度，各个瘤株不一样，你们用的什么瘤株？另外不赞同用7901这个瘤株，国际公认度比较差。肝转移癌、动物模型、兔子Atonmy：肝转移癌的动物模型建立（采用兔）顺利要多长时间？要用何种兔子好？还有转移瘤采用什么好？建立后生存期是多长？Swordzjsh：没有做过兔子的肿瘤实验，但是你想做肝转移也可以用高转移瘤株作，有些经过筛选的瘤株皮下接种会有很高的肝转移率，整个试验周期比较长，具体多少时间我忘了，你可以去查一查相关文献。实验分组、平行性zym145286：我试验接种部分已经完成了，现在马上应该分组了，有个问题想请教一下：分组的时候如果瘤子大小不一致，我是应该把均一的放在一组是每组的SD值尽量小呢，还是把瘤子大小一致的分到不同组中去以便缩小组间差距？Swordzjsh：分组要求平行性，尽量缩小组间差异，组内差异是实际情况的反映。你可以按照肿瘤体积分层随机分组，这样平行性比较好。小鼠乳腺癌建模、BALB/c小鼠、小鼠乳腺癌细胞、购买zhizhuspider：打算做BALB/c小鼠乳腺癌模型，看文献说小鼠乳腺癌细胞如4t1等注入小鼠胸壁56肋间or腹壁第4对乳腺皮下建模，真不知建该模型有那些要注意的，请多指教？另也不知国内哪里能提供小鼠乳腺癌细胞，谢谢Swordzjsh：你说的地方叫做mammary fat pad，具体位置找只雌鼠研究一下吧，关键在于接种体积要小，大了就漏出mammary fat pad了，一般都在几十（50以下好像）ul左右。买细胞到细胞库，上海有一个，另外武汉大学有一个典培中心：上海细胞库：/xibao/index.htm武大典培中心：/cctcc/网上的细胞目录不要研究了，n年没有更新了，就看个联系方式好了，要什么细胞打电话过去自己问吧。SFDA与FDA的区别Zhangweilcb：对于一个新药临床前的实验，SFDA有什么规定？是不是SFDA有一套统一的实验标准，大家都按照他的规定去做，我想这样不同公司开发的药（治疗同一种疾病）之间就具有可比性了，还是大家按照自己的实验方法去做？我想问一下临床前的实验都要做哪些实验？是不是要做毒理，药理，还有其它的吗？毒理是不是要做急毒，长期毒性？药理都做哪些方面？中国和美国的FDA对药物研发的规定是否相同？Swordzjsh：你这个关于SFDA临床前研究规范的问题太大了，在这里没法回答你，关于指导原则，看看我前面的回答吧，去想办法弄一本来看看。人家写了好几本书呢，指望在这里全面的给你进行介绍是不太可能的，呵呵。至于SFDA与FDA的区别，简单的说：FDA没有任何的指导原则，所有的试验你自己定，只要你能够说服FDA的评审官就可以，换句话说，只要你能够说出科学的道理来证明你的药物安全有效就可以了，SFDA的指导原则基本上就是把FDA常见的一些经典的东西教条下来了，就是一个框框自己去填吧，填完了，没有问题，基本就能通过了。有的时候你觉得有些试验没必要作，或者没法做，那也不行，死劲想办法别别扭扭的做吧。我觉得这个太有特色了。RNA干扰质粒、肿瘤体积、传代心情1979：不知有哪位仁兄做过用RNA干扰质粒治疗肿瘤模型的，想请教以下，一般都用些什么脂质体，质粒和脂质体的比例和用量如何。如果用瘤块传代，要等第一代肿瘤长到大概多大才可以传第二代。Swordzjsh：你做的RNA干扰质粒治疗的研究看起来很有意思，但是我没有做过，我可以告诉你的是：肿瘤模型体内传代的标准是，肿瘤体积大于500mm3以上就可以了，最好小于1000mm3。裸鼠状态差、体重下降、死亡、感染Dongqingsummer：前段时间，在我养裸鼠的实验里同时有人养普通的昆明鼠。估计是这种鼠给传上的，我听说鼠源性的肝炎是生存期是2个月，如果有两个月，那足够了。我们已经把肝脏送去包埋了。回头切片找人看一下。如果有典型的片子，我把它贴上来。现在的情况是，我养的裸鼠开始出现问题，别家的还行，如果是肝炎，在同一个实验室里应该都传染上了啊。可是他们的并没有出现很严重的体重下降。我养的裸鼠身上有的看上去脏脏的，像糠一样的东西。状态差，体重下降，死亡，解剖发现肺脏也有问题。有的老师说像是绿脓杆菌的感染，今天我给它们每只腹腔注射了头孢派酮舒巴坦纳不知道有没有效果，你有遇上过类似的情况么？因为小鼠的体重一直在下降，不爱吃东西，瘤块根本就不长。本来肿瘤也是一种消耗性疾病。Swordzjsh：养裸鼠最忌讳与普通大鼠小鼠养在一起！很容易出问题！另外，如果是鼠肝炎，你把解剖后肝脏暴露出来拍得照片传上来就可以判断了，非常典型。不过看你说的，你的裸鼠感染的好像不止一种疾病，这个其他的疾病我就不是很清楚了，因为裸鼠最怕的也是最容易感染的就是鼠肝炎，其他的毛病我也没有遇到过，确切的说，我这么多年来也很少碰到感染方面的问题，只有一个租用别人的动物房的时候发现大面积的鼠肝炎感染，那个时候我们所有的裸鼠进去之后一个半月之内必定出现大批死亡，非常头痛。你说的同一实验室其他人没有感染，是同一间动物房么？如果不是同一间动物房可能可以幸免。一般来说，裸鼠的状态与肿瘤模型的状态密切相关，你的裸鼠长得不好，肿瘤出问题也是正常的，所以我一直说你要先把感染的事情解决好。细胞记数Xihongshi：我也发现在记数盘中打10微升是记数细胞,周边的细胞多于中间的细胞,我想是不是我的细胞个头太大的原因啊,我的是小鼠黑色素瘤细胞,是贴壁的细胞,一瓶也就是10的6次方的细胞.roger150：细胞记数时一定要将记数板洗的很干净，我前几次出现记数很少；后来才知道是记数板没洗干净细胞都在外围进不去；所以洗干净后细胞进去了就好了；不知你是不是同样的情况套管针组织块接种法roger150：套管针组织块接种法谁能告诉我这种方法的具体步骤；以及这种方法同细胞悬液接种法有什么区别？还有没有其他组织块接种的方法？谢谢！另外正式实验接种时是不是一定要用经体内传三代以后的肿瘤组织来进行组织块接种才好？Swordzjsh：组织块接种要求体内传三代以后用于实验。接种方法有两种：插块法和匀浆法。这两个方法都要先将裸鼠处死后体表消毒，剪开皮肤，取出肿瘤，在PBS中洗涤干净，然后剪开，去处中心坏死部分。插块法接下来就要将完好的肿瘤组织剪成适当的大小，塞到套管针里面，接种至裸鼠皮下；匀浆法将肿瘤组织剪成尽量小的小块，然后用玻璃匀浆器匀浆，再用PBS适当稀释成组织悬液，用注射器接种。doctor101：套管针组织块接种法和匀浆法都要先将裸鼠处死后体表消毒，剪开皮肤，取出肿瘤，在PBS或0.9%无菌氯化钠注射液中洗涤干净，然后剪开，去处中心颜色变暗坏死部分，选外围发亮部分。套管针组织块接种法要将完好的肿瘤组织剪成适当的大小，塞到套管针里面，要选合适套管针，太大或太小都不行，可选上海埃斯埃医械塑料制品有限公司产品，腹水穿刺针30号，先裸鼠皮下剪一小口，再用腹水穿刺针接种；匀浆法将肿瘤组织剪成尽量小的小块，然后用玻璃匀浆器匀浆，再用稀释成组织悬液，用注射器接种。套管针组织块接种法对瘤组织损伤小，可能100成瘤。匀浆法对瘤组织损伤大，成瘤可能小于100。细胞对数生长期roger150：怎么判断细胞处于对数生长期？细胞悬液接种时都说要选活力好的细胞，就是对数期，可怎么判断啊Swordzjsh：细胞生长至瓶底7080%满的时候认为是对数生长期。CTX的用法、HL-60（s）细胞株、购买咪咪的梦：我也在做血液肿瘤动物模型，包括MM和AL，也试过很多次，没有成功。想问你CTX的具体用法？还有，你的HL-60（s）细胞株从哪里拿到的？cindyr0625：在接种前三天接种环磷酰氨一次，腹腔注射2.5mg/只。HL-60(S）是在协和的细胞中心购买的裸鼠体重下降、药物污染Dongqingsummer：今天又死了五只，均是体重不足14克的。解剖发现肺成红色的，肝脏仍有很细小的如砂粒状的损伤，布满整个肝脏。今天忘了带相机进去，明天肯定还会有死亡，照了传上来。我想把整个内脏先拿去包埋了，看看有什么问题没有？这样做有没有意义？同一间房子里有别人的，但是他们的没事，至少看上去状态还不错。还有一个奇怪的现象，我的模型对照组（只造模不给药）和空白对照组（没有造模）状态还不错，体重没有怎么升但也没降。有问题的是给药组和环磷酰胺组。现在这几组的平均体重已经掉到13克多到15克多，以您的经验，还有望恢复么？ 是不是这批裸鼠都要不成了？Swordzjsh：CTX组剂量设置适当的话，体重下降不会超过10%到15%，你没有给药的组都是好的，有没有考虑是你的药物污染？你的药物配好后有没有无菌过滤？据我看，体重掉到这么低，很难恢复。小鼠骨髓瘤模型、小鼠品系、小鼠骨髓瘤细胞、购买东方朔：实验设计需要建立小鼠骨髓瘤模型，各种骨髓瘤细胞系的差别主要在哪里，怎样才能知道呢？国内哪些机构出售小鼠骨髓瘤细胞系呢？选用什么品系的小鼠来建模比较理想呢？是骨髓腔内注射还是静注？doctor101：小鼠骨髓瘤细胞系：NS-1，SP2/0 可在体外连续生长，倍增期较短，在小鼠体内有致瘤性，小鼠用Balb/c。 北京 中国医学科学院 细胞中心 电话腔注射CTX咪咪的梦：就腹腔注射CTX，请问，就只注射一次吗？注射还有什么注意事项？doctor101：裸鼠腹腔注射CTX，如果做对照组，要每日给药，或隔日给药，要有具体剂量。cindyr0625：在接种细胞前3天给予一次就可以了.HepG2移植、裸鼠肝脏造肝癌zhangyanliang20：我刚接触动物实验，没什么经验，我想把HepG2移植到裸鼠肝脏造肝癌，请问有什么方法？有相关的资料吗？roger150：这篇文献可能对你有帮助Activating anti-CD40 antibodies induce tumor invasion by cytotoxic T-lymphocytes and inhibition of tumor growth in experimental liver cancer在PUBMED 上很容易得到。你要的是原位接种，这篇文章的方法你可以模仿看看。不过前面有好多好的帖子你不妨看看，会有很多收获的。实验分组roger150：一般一个实验分组要多少只老鼠啊？我要用的是SCID好贵啊 用多了老板不知给批不/ 我要构建SKOV3和HO8910两种动物的普通模型和人源化模型 在加几个实验分组所用老鼠好多Swordzjsh：1.分组数量：小鼠预试验68只，正式试验1012只，免疫缺陷小鼠预试验56只，正式试验810只。老板不批你就告诉他试验没法做.2.普通模型和人源化模型？没有明白。抗体治疗肿瘤、给药途径、设计剂量组roger150：用抗体治疗肿瘤时一般采用什么途径啊？以及要设计几个计量组？Swordzjsh：一般抗体治疗多用i.v，也有用瘤内注射的。剂量组的设计和一般药物一样，但是要注意用活性单位设计剂量。另外根据你的活性检测方法，有些试验可能要用数量级来设计剂量组，而不是一般的二倍三倍什么的。肿瘤体内显象roger150：肿瘤体内显象的实验，进行甲状腺封闭时要注意什么以及封闭的碘的计量是多少？Swordzjsh：肿瘤体内显像我没有做过，看过一些资料，不知道你要问什么？但是无论如何，仪器都非常贵，不知道你们老板批不批？呵呵。甲状腺封闭没有做过，帮不上忙，抱歉。肿瘤细胞悬液的稀释Bluebabyinsky：肿瘤细胞悬液裸鼠接种用无菌生理盐水稀释细胞行吗？Swordzjsh：可以，但是从效果来说顺序是这样的：相应的无血清培养基PBSsaline实验动物数、抑瘤率zym145286：我BEL实验结果出来了，数据上面看吧还可以，没什么特殊的，就是最后算出来的抑瘤率为42%，处在知道原则所要求数据边缘啊，不过我实验条件的限制，每组只有3只鼠，不知道这样的结果还有必要研究下去没。Swordzjsh：每组三只鼠实在太少了，没办法判断，另外现在的抑瘤率标准提高到60%了.抗肿瘤药物筛选zym145286：老板要我多建立几个模型，我想问一下肿瘤合成药物的筛选有没有要求用特定的那些细胞的动物模型做筛选呢？还是只是要求数量，具体的细胞自己定呢？要是有要求，能不能告诉我是那些细胞动物模型呢？ Swordzjsh：现在的指导原则要求6个人肿瘤模型，只要是国内外建株的细胞株都可以，你应该参考一下文献，根据你的样品的大概的适应症范围，选择大约十几个公认度比较好的细胞株体外筛选一下，然后根据体外试验结果确定大约810个细胞株进行体内研究。阳性对照药的选择zym145286：我现在用唤磷酰胺做阳性药物呢，那不知道哪位大侠做过这种药物呢，能不能指导一下具体怎么样给药比较好？这个药物的抑止率是多少？还有阳性药物跟待测药物给药方式（途径啊，次数，时间）不一样可不可以呢？或者说还有那种药物最常用来做抗肿瘤药物体内筛选的阳性药物呢？Swordzjsh：现在常用的阳性对照药物是CTX和cisplatin，另外乳腺癌可以用Taxol，具体的剂量和疗程就在这个帖子里面，前面几页你找一找，我有贴出来，阳性要的剂量途径和疗程不要求和你的样品一致，不过给药途径尽量一样。还有，最好选用机制类似或者结构类似的阳性对照。一般来说阳性对照的一致率都会在60%以上或者更大，少数情况下只有50%左右。裸鼠移植瘤模型、耐药性绒癌、接种细胞数lizhuo721：实验拟用自行诱建的人绒毛膜耐药细胞株JAR/VP16制成悬液皮下注射，构建耐药性绒癌裸鼠移植瘤模型。关于接种细胞数的问题，查阅了不少相关文献，但从105/只107/只均有报道。一时没了主意。请问各位前辈有没有人做过绒癌裸鼠成瘤模型的，恳请给予指导。Swordzjsh：这个细胞株没有做过，但是查考文献的时候可以注意一下地点和出处，选权威性强的文献模仿，其他的看看就行了。VP16、腹腔注射lizhuo721：造模成功后即分组给药。其中一组拟腹腔注射VP16，但具体给药量和周期时程不知如何确定为宜。所以想请教大家有关VP16裸鼠腹腔注射的相关 信息。Swordzjsh：VP16我没有用过，但是这也是一个有人用的阳性对照药，可以查一查文献，看看别人是怎么用的。每笼裸鼠只数Bluebabyinsky：裸鼠一般一个笼子能放几只？我准备放6只，7只是不是太多了？ttplay：笼子中一般放只裸鼠体重对成瘤影响Bluebabyinsky：周龄一样的裸鼠，体重对最后成瘤的影响如何呢？是体重大的瘤子长的快呢？还是体重小的瘤子长的快？虽然是随机分组，但是发现购入的鼠体重差距比较大，最小的甚至不到10g。现在是4-5周龄的鼠。ttplay：体重小的你可要小心照料了，比较容易挂如果都健康的话，据我的经验，体重对成瘤的影响好象不明显doctor101：周龄一样的裸鼠，体重对最后成瘤有影响，购入的鼠体重差距不能太大，一般15-17g体重较好，要随机分组，最小的甚至不到10g的鼠不要用了。可用5-7周龄的鼠。抑瘤率、细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则jzj100508：另外现在的抑瘤率标准提高到60%了?,此话有何依据？你弄清楚了没有？是裸鼠的要求T/C40 %为无效；T/C（%） 40%，并经统计学处理P 0.05为有效。在体内有效性试验采用的全部人癌移植模型中，一般至少应有1/3达到有效标准，才提示药物有必要进入临床试验。 3。在评价时还应关注受试物与阳性对照药试验结果的比较。在毒性相当（在有效性研究中主要表现为动物体重下降相当）的情况下，对受试物治疗组和阳性对照药组肿瘤增殖率的比较也是评价受试物是否有必要进入临床试验的指标之一。 请大家参考吧。再补充一点，对于T/C40%，业内很多专家表示质疑，按照这个标准，很多现有的一线化疗药物都会被淘汰，但是官方给出的解释是：提高进入临床的门槛也是降低大家的新药开发风险，因为临床的费用太高.实际上我个人对此也不赞同，但是有意见也还是得执行啊。CBRH7919（大鼠肝癌）、经脾注射种植、肝内多发肿瘤模型medsky1982：谁做过CBRH7919（大鼠肝癌）的经脾注射种植后建立肝癌模型，还有没有更好的瘤株可用来经脾种植建立肝癌模型的，他们接种的量是多少，成瘤时间大概多少天。我的实验要求经脾脏注射,建立肝内多发肿瘤模型,且不易形成腹水较好. 或者更换其他实验动物也可(如小鼠,兔子)只要能建立多发的肝内癌灶且不易出现腹水及在肿瘤长出之前就出现死亡就行.Swordzjsh：经脾脏注射肝肿瘤模型我没有做过，说不上什么，另外我想问问你说的多发肿瘤模型是什么意思？要肝脏内有多个肿瘤灶么？如果是这个要求，我说不好。如果只是要求肝内肿瘤，我做过裸小鼠的肝原位肿瘤模型，不知道你能不能用？但是这种模型是移植瘤，一般来说，在肝内只会有一个肿瘤灶。裸鼠、原位肿瘤模型、术后护理、Baicaoquan：我造的原位肿瘤模型，我想请教一下造模手术后怎样护理裸鼠，毕竟它们免疫力低下，而且身价昂贵！Swordzjsh：原位肿瘤模型主要要注意的是手术过程中不能出现污染，另外最后缝合的时候要缝紧，留出来的线头一定要小，否则老鼠会自己把缝合线咬掉，造成伤口爆裂的情况，缝合的时候，还有一个技巧，你要自己去留意一下：如果你用的是常规的正反缝合法，你应该可以发现最后的两个线头，有一个是越拉越紧的，把这个线头有意识的留长一点，另外一根线头剪短，这样老鼠就会去咬那根长线头，让接头越来越紧。细胞接种、腹水、细胞计数、雄雌大鼠、区别Shenxj：将刚复苏的细胞接种到腹腔产生腹水不需要细胞计数吧,接种到雄雌大鼠有什么不同吗?Swordzjsh：还是需要计数，一般的肿瘤株雌雄鼠都没有太大的区别的。目的基因、转染、RNAi干扰质粒、成瘤率、抑瘤率赤足新生：我开始实验设计是要用转染了目的基因并稳定表达目的基因的细胞接种并用正常未处理的细胞做对照，比较二者成瘤率。现在转染细胞没有，只好先用正常细胞成瘤，再用基因注射入瘤块看其抑瘤率。这样就有一些问题：如果用的是RNAi干扰质粒，是用质粒直接注入瘤块，还是要象转染一样，先用脂质体包裹，再一同注入? 如果用shRNA注入瘤内干扰,应该用什么载体呢?Swordzjsh：楼上的，不是没有看到你的问题，而是无法回答，这方面没有作过阿，你应该查一查文献，特别是国外的文献，看看别人是怎么做的。大鼠肝癌细胞、经脾脏注射、肝内多发肿瘤模型medsky1982：我的实验要求经脾脏注射大鼠肝癌细胞,建立肝内多发肿瘤模型,查看国内的大鼠肝癌细胞株有：CBRH-7919,RH-35,Walker256,但是他们在经脾脏注射建模中的特性不清楚，最好是能有高的转移成瘤能力，又不易产生腹水。不知道swordzjsh大哥有没有这方面的资料，或者更换其他实验动物也可(如小鼠,兔子)只要能建立多发的肝内癌灶（要求是相应动物的肝细胞癌）且不易出现腹水及在肿瘤长出之前不会大量死亡就行Swordzjsh：不知道你们的试验目的是什么，但是我们一般不会考虑去建立直接多发的肿瘤模型，除非是转移模型，因为多发的肿瘤不好进行评价，单个的肿瘤灶可以量大小，可以剥出来称重，而且在造模的时候也比较好控制，所以很少去留意多发肿瘤模型的资料，很抱歉，帮不上忙。大鼠开腹手术medsky1982：想请教一下你们在做大鼠开腹手术（时间2小时左右）时，一般要不要经颈外静脉生理盐水补液？ Swordzjsh：不知道，我从来没有构建原位模型开腹这么久的。开腹后几分钟就关腹了。开腹手术、术后的护理medsky1982：你们开腹肝内原位种植肿瘤手术后的护理应该注意什么，比方饮食，抗感染之类？Swordzjsh：没有什么特别需要注意的，就是小心缝线打结要结实，否则第二天你会发现几只线破肠流的尸体。HepG2.2.15细胞、肿瘤动物模型、裸鼠周龄Futingtingftt：我得实验是准备造乙型肝炎动物模型，用HepG2.2.15细胞皮下或者腹腔接种裸鼠成瘤，由于细胞培养多次污染，还未进行接种，早已买下的裸鼠全部死亡，伤心的要命，这次细胞又快培养起来了，我想再次买一些裸鼠。大家都说裸鼠最好是56周龄的，可是我想问问各位高手，有没有4周龄接种成功的呢？4周造模成功率怎么样？我想买4周龄的裸鼠，如果细胞很好的话就可以直接接种，不好的话就是裸鼠再长2周也可以用，这样我得裸鼠不会没有接种就白费了Swordzjsh：一般建议用57周龄的，4周龄太小，至少4周半吧。其实有时候8周龄也凑活能用。骨肉瘤动物模型zengqq727：我现在在做骨肉瘤动物模型,可是细胞株应该怎么注入胫骨骨髓腔呢?可不可以用骨钻呢还是用腰穿针呢?sky2345：我试过，用20ml注射器的针头穿孔，再用折弯的注射器针头伸入髓腔内注射但我用的是1ml的注射器，很难将细胞悬液注入而不满出来，文献上说是用微量注射器，注射3微升。但不明白的是3微升的悬液细胞浓度怎么调。乳腺癌的小鼠模型、细胞株的选择瞄瞄：我想做乳腺癌的小鼠模型，主要目的是做一种新型抗癌药，需要荷瘤小鼠至少生存1月，请教用哪种细胞株好doctor101：乳腺癌的小鼠模型可选TA2小鼠接种MA891，或选用BALB/C裸鼠接种人乳腺癌BCaP-37都可以。人乳腺癌细胞移植、雌激素nude_mice：我最近要做MCF-7细胞ER(+)移植瘤，我想请问swordzjsh，你在做的人乳腺癌细胞移植的时候，是否需要雌激素的支持？我看了一些文献，很多写到需要皮下包埋雌二醇。目前应用较多的是雌激素制剂为17-雌二醇（17-Estradiol）缓释片剂，为Innovative Research公司生产，有0.18、0.36、0.72和1.7mg等多种型号，60天和90天两种释放周期，以0.72mg/60天缓释片剂应用较多，于实验前进行裸鼠皮下包埋即可。另一种雌激素制剂是环丙戊酸雌二醇（Estradiol Cypionate）注射液，维持时间1周，使用的剂量为1.5mg/kg。Swordzjsh：关于雌激素，可能你会失望，我们以前也想找这个缓释丸，但是国内没有卖的，就算有，价格也很贵，一粒就是十几美金，每只老鼠来一粒.自己算算吧，国内现在都是用雌二醇的油剂注射，很痛苦，但是也没有办法。关于Matrigelnude_mice：想买Matrigel，但BD公司的人跟我说Matrigel打开只能做一次就失效了。但我就做一个预试验，即使买他们最小包装的话，都有点浪费了，因为需要2000多元人民币。Swordzjsh：关于matrigel，我看过一些文献，但是具体你说的这个开包就不能用的细节我不是很清楚，但是，我想应该是开包后最为基底膜的基质效果就不好了，而作动物试验应该问题不大吧，你再和技术支持交流一下，他们有时候为了提高销量，估计夸大，你告诉他，要是开包就不能用作动物试验了，你们就不买了，多半他会说实话。人绒毛膜癌裸鼠模型、皮丘颜色lizhuo721：我做的是人绒毛膜癌裸鼠模型。1周前接种JAR细胞悬液，选取左侧腋窝皮下注射，细胞数为5*106/只/0.2ml，过程很顺利。其后隔日观察，见皮丘渐小。今天是接种后第8天，发现皮丘变成了青紫色，较前也有不同程度的增大。不知各位前辈在造模过程中是否也遇到过类似的情况？瘤体变成青紫色是不是破溃前兆啊？Swordzjsh：这个瘤株我没有做过，但是，一般来说，要溃破有两种情况，一种是污染溃破，应该是发黄，还有一种是长得太大溃破，应该是红到发黑，不过你才接种了没有几天，应该不会出现后一种情况。青紫色，而且还会增大，可能是这个瘤株长成后就是这个颜色，多注意观察吧。SD大鼠、原位肝癌模型一草：我想请教一下有用SD大鼠做原位肝癌模型的吗？在传代老鼠腹腔抽取的癌性腹水需要计数或其它处理吗？如再传代是直接抽ml注入到幼鼠腹腔吗？术后老鼠需要肌注青霉素吗？如果术前打两天免疫抑制剂是否更容易成瘤呢？但同时是否也容易感染至死呢？Swordzjsh：一般很少用大鼠作肿瘤模型，不过根据经验回答你的几个问题：1. 计数问题，对这个瘤株不熟悉的话，还是应该计数，而且要用台盘兰计活细胞数。2. 一般最好稀释后传代，这样不容易血性，但是具体的稀释比例，你通过文献和自己摸索来定吧，一般1：310用的比较多。3.不要打青霉素，完全没有必要。4.如果是同源瘤株，完全不需要免疫抑制剂，同源瘤株的意思是这个瘤株就是相应的大鼠瘤株，而不是小鼠或者人的肿瘤，也不是其他品系大鼠的瘤株。如果你用的不是同源瘤株，建议你更换瘤株或者动物。肿瘤倍增时间Gold：肿瘤倍增时间怎么计算？在做肿瘤动物实验模型，想知道肿瘤的倍增时间（doubling time），应该是在瘤体积100800之间计算，但是一组动物有10只，每周测量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我测量体积的时候正好到200或400，那么，在计算的时候，具体应该怎么做呐？Swordzjsh：这段话应该对你有帮助：Geddes 等29将结节倍增时间的计算公式表示为：DT =（ln 2 t）/ln（V2/V1），V1、V2分别是前后两次测量的体积， t是两次测量的时间间隔你的问题有歧义，我觉得可以有几下几种理解：1.测量的时候，对于某个老鼠来说，第一次可能测出来的体积是189.26（不是正好200），第二次是415.31（不是正好400），对于其他的动物都有这样的问题，这段话应该对你有帮助：Geddes 等29将结节倍增时间的计算公式表示为：DT =（ln 2 t）/ln（V2/V1），V1、V2分别是前后两次测量的体积， t是两次测量的时间间隔2.对于十只老鼠来说，测量的时候，可能1号老鼠是189.26，2号是312.57，3号是110.89.，这也是一种理解，我的意见是：测量一段比较长的时间，每只老鼠可以独立计算倍增时间，然后计算平均值，SD等，用统计学处理的手段。腹水瘤细胞株、大鼠腹腔、实体瘤Shenxj：我用刚复苏的腹水瘤细胞株接种大鼠腹腔,结果腹水没长,倒是长了一实体瘤,想取出瘤子,请问是剪碎做细胞培养后传代接种好还是直接用接种针接种到腹腔好啊?那样能长出腹水吗?因为我的实验需要腹水来建立模型.Swordzjsh：你的实体瘤长在什么地方？皮下还是腹腔里面？要是皮下，说明你腹腔注射的时候打漏了，可以再构建一次，注意注射部位即可。如果是腹腔内成为实体瘤，可能说明这个这个瘤株的特性就是如此，即使你将肿瘤处理后接种到腹腔，还是成实体瘤，你有没有查一查文献，特别的国外的文献，你用的瘤株是否能够产生腹水？如果没有相关报道，建议你换瘤株。另外很好奇，为什么一定要用腹水构建模型，要研究生存时间么？肝癌、构建动物模型、动物选择drhy001333：我想做关于某种药物对肝癌抑制作用，要构建动物模型，请问：1.我是用裸小鼠还是用大鼠好啊？其实裸鼠我们这还没有那种饲养环境。2.要用大鼠是用哪种比较合适？3.操作过程如何啊？Swordzjsh：你的试验目的没有说清楚，肿瘤模型的宿主动物的选择是跟着瘤株来的，你的药物有没有可以参考的文献资料什么的，看看类似的相关药物多用于什么瘤株进行药效的评价，然后根据需要选用的瘤株在决定用什么动物，肝癌的瘤株小鼠的有、裸小鼠的有、大鼠的也有，看你的需要了。单纯从动物角度评价的话，小鼠价格最低，饲养条件要求不高，用药量也少，但是相关的瘤株的地位现在是越来越差，国外基本已经不用小鼠肿瘤了（基本所有的肿瘤都是这样的），裸小鼠的价格贵一些，饲养条件要求高，用药量少，相关的肝癌瘤株不好找，因为虽然很多，但是几乎没有适合做体内构建模型作试验的，大鼠价格适中，饲养条件不高，用药量大，相关瘤株特性方面我不是很清楚，很抱歉。至于具体的操作过程，等你确定了瘤株再说吧，有些不同的瘤株，操作过程也有一些不同。肿瘤建模、接种手段roger150：请教一个肿瘤建模过程中的一个问题，一般细胞株要在体内传代后才能做实验。最后是将实体瘤取出后匀浆后接种老鼠，这里就涉及到我匀浆的细胞量，比如将直径2CM的实体瘤匀浆成多少毫升的PBS，最后每只老鼠又接种多体积的细胞匀浆液 那么我要做30只老鼠模型 要准备多少个直径2CM的肿瘤了 ？还是将一个肿瘤匀浆后平均分到30只老鼠，这样细胞数量会不会很少？swordzjsh：首先提醒一下，适于接种的瘤源的直径最好为1cm或者稍大一点，直径2cm可能对于有些瘤株来说会太大了一点。体内瘤源用于接种，有两种手段（均为无菌操作）：1.插块法，将肿瘤组织剥离下来后，置于PBS等体系中（以下均以PBS为例），用剪刀剪开，剔出中心的坏死部分，以及外表的包膜（如果比较明显的话），清洗干净，然后换到干净的PBS中，用剪刀剪成小块，最后用1820号的接种针接种于动物腋下或者其他部位。这里面具体的注意事项和技巧在本贴早些时候都有讨论，请参考。2.匀浆法，也是将肿瘤组织剥离下来后，置于PBS等体系中（以下均以PBS为例），用剪刀剪开，剔出中心的坏死部分，以及外表的包膜（如果比较明显的话），清洗干净，然后换到干净的PBS中，用剪刀剪成小块，然后用玻璃匀浆器匀浆，注意上下次数不可超过5次，匀浆时可以适当的旋转，然后取样用台盼兰活细胞计数，根据计数结果进行稀释，最终的稀释量，需要根据你瘤株情况确定的接种量而定，这个接种量经过一段时间的稳定后，可以根据经验（匀浆液的浓度、粘度、肿瘤组织大小等情况）直接进行稀释，不需要计数，但是在早期，还是建议你进行计数后再稀释。另外各种瘤株的情况不一样，不光是接种量不同，同样大小的瘤源匀浆后的活细胞数也会不同比如NCI-H460匀浆后的活细胞数就比较多，而A431几乎没有活细胞。所以你想要的参数我没有办法给你。另外，如果一个瘤源不够，可以取多个瘤源进行接种，一般来说，插块法，一个瘤源接种30只动物是没有问题的，匀浆法一般2只也可以接种30只了，为保险起见可以多预备一只瘤源。注意考虑可能需要剔出不合格瘤源的情况。HepG2.2.15肝癌细胞、裸鼠、皮下肿瘤模型、腹腔肿瘤模型Futingtingftt：我准备做HepG2.2.15肝癌细胞的裸小鼠皮下和腹腔肿瘤模型，皮下注射已经两天了，腹腔是今天注射的。有以下几个问题需要请教1.我在皮下注射的时候，其中一只裸小鼠的细胞悬液几乎没有打进去 ，从针孔都冒出来了，其它几只裸鼠感觉接种的也不是很满意，本来想打到腋下，最后好像太靠近头部位置了，裸鼠有时乱动，针头好像有滑动，我是在右侧腋下接种的，我担心肿瘤长不出来，为了保险，我想在这些裸鼠的左腋下部位再打一次，两侧长出来一个就行，不知道这样可不可以呢？我最终只是采取血清查血清中的乙型肝炎表面抗原和核心抗原的。2.我得裸鼠是5周龄的，每只裸鼠接种的细胞个数是6106，我想问一下，一般的皮下肿瘤模型几天能长出来，我盼着我得裸鼠快点长个肿瘤呢。3.腹腔注射的裸鼠可以在腋下再接种细胞吗，我真的很担心腋下肿瘤长不出来，总共裸鼠数量很少。我想充分利用，最起码可以见到一只裸鼠腋下长肿瘤，这样也就知足了。Swordzjsh：我不是太清楚，但是我的印象中没有见到过HepG2可以接种在腹腔的做法，你这种做法不知道有没有支持？文献或者其他人的经验？你想建原位模型么？如果是原位模型是另外一种做法，不是直接腹腔注射就可以的，呵呵。如果不是用于正式的实验双侧接种是可行的，事实上，为了保险起见，我们在肿瘤构建传代的时候都是双侧接种，如果你只是定性的看一看抗原什么的双侧接种我认为问题不大，HepG2不是太好长，你可能需要点耐心，如果操作不当，长不出来也很正常，我们以前的结果我记不清了，至少接种后2周是没有动静的。另外你接种的时候老鼠动是你的技术有问题，一般来说，大家是用拇指和食指捏住老鼠的颈部皮肤，无名指和手掌下部把老鼠的后肢捏住，这个时候你试一试捏颈部的时候手指尽量多捏一点皮肤，然后右手（你是左手抓动物的话）拉住后肢，尽量往下拉，让老鼠的身体伸展开来，在用无名指固定，中指可以放在老鼠的身体下面，适当的往上顶，使老鼠的腋下一代完全平展，绷紧，便于操作。联系一下，会有心得的。你要是只是要看到肿瘤长出来，只要老鼠不是太老可以在没有接种的位点再次接种。如果进行实验是不可以这样做的。MCF-7细胞ER(+)移植瘤nude_mice：做MCF-7细胞ER(+)移植瘤。人乳腺癌模型存在的技术要点，可能就在于雌激素支持和基质胶这两个方面了。国内倒是有很多成功的报道，包括本版块中也有，但都没有谈到这些东西。说实话，据我了解，上海这边很多资深的研究机构都没有做出来。Swordzjsh：不知道你们有没有选择其他瘤株的余地？实际上，我以前构建MCF-7的时候，干脆就是用雌性裸鼠，没有用雌激素，也没有用matrigel，也能长出来，但是特别的慢，我和其他单位的老师也交流过，他们的经验是MCF-7和用雌激素的效果不明显。大鼠动物模型、大鼠静脉注射、颈静脉插管瞄瞄：如果做大鼠动物模型，我需要每天给大鼠静脉注药，连续14天，请问用颈静脉插管可行吗，难度大吗Swordzjsh：可以的，听别的老师介绍过，但是要做手术，十分麻烦。实际上，只要功夫到家，直接大鼠尾静脉i.v 14天是可以做到的。肿瘤模型的构建、肿瘤细胞、动物体内传代nude_mice：按照我们平时的经验，总是说肿瘤细胞要先在动物体内传几代，才能正式实验。新的抗肿瘤药物指导原则上也强调要3代以上才能用。可是，不知道大家注意没有，国外的文献中，动物模型大多是用肿瘤细胞直接接种动物，第一代就正式实验了。不知道大家对这个有什么想法？Swordzjsh：关于这一点，有两种理解：一种说法是：国外的文献一般不是以药效为主要目标，而且说明机制功能之类的东西，他们对于这一类的试验，只要求试验有一个平行性就可以了，不强求严格的要求。还有一种理解是：国外，特别是美国的肿瘤模型的构建方法和国内不一样，他们是用体内的肿瘤组织分散成细胞后体外培养冻存，在五代之内接种至动物体内做试验。这样的接种方式，在描述上看起来就像细胞直接接种一样。裸鼠肿瘤模型、肿瘤细胞接种手法、荷瘤鼠生存期Futingtingftt：我第一次做动物实验，最起码敢抓老鼠了，可是手法真的不行，我仅抓住裸鼠的颈部和尾巴的，其余的都是腾空的，没有和我得手接触，第一只裸鼠皮下打的时候有鼓包，第二只是师姐帮我抓住裸鼠的后肢的，我们把裸鼠皮肤绷的紧紧的，然后就注射，没想到一边注射一边从针孔往出流，几乎没有打进去，我还想是不是绷的太紧了呢，之后我就专门把腋下的皮肤放到最松最松，可是针头好像在动，再问师兄注射的时候是快速注入呢还是慢点往进推呢，一般怎么样长出来的肿瘤会好点呢，是不是皮下注射正确的话都应该有鼓包的啊，还是怎么能确定在皮下注射的呢，是不是接种量大一般肿瘤长出来的快点呢，其它肿瘤细胞是不是有这个特性呢，如果这样的话，我可以加大接种数量至1107个，接种量大的话裸鼠长出肿瘤的话是不是很容易就耐受不了死掉了呢，荷瘤鼠最短活几天呢，最长呢、师兄可以说说你做肿瘤模型的经验，一般多少天荷瘤鼠就死掉呢。有没有肿瘤细胞接种一周就会长肿瘤的呢Swordzjsh：皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。注射前针头稍微动一动，能动就说