高效液相色谱方法及应用

高效液相色谱方法及应用 主讲人 王英特 第一章绪论 色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支 是一个具有强大生命力的分离分析技术 第一节高效液相色谱法的特点 一 与经典液相色谱法比较二 与气相色谱法比较三 高效液相色谱法的特点1 分离效能高2 选择性高3 检测灵敏度高4 分析速度快 第二节高效液相色谱法的分类 按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类1 吸附色谱 AdsorptionChromatography 2 分配色谱 PartitionChromatography 3 离子色谱 IonChromatography 4 体积排阻色谱 SizeExclusionChromatography 5 亲和色谱 AffinityChromatography 按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较 第三节基本原理 一 色谱过程二 分配系数与保留行为的关系1 分配系数及容量因子2 保留时间3 tR与K的关系4 分配系数不等是分离前提 第二章高效液相色谱仪简介 1 贮液瓶2 高压输液泵3 进样器4 色谱柱5 检测器6 记录装置 第一节流动相及贮液罐一 贮液罐二 流动相脱气 1 吹氦脱气法 2 加热回流法 3 抽真空脱气法 4 超声波脱气法 5 在线真空脱气法 第二节高压输液泵及梯度洗脱装置 一 高压输液泵高压输液泵可以分为以下两类 1 恒流泵 可输出恒定体积流量的流动相 1 注射式泵 又称注射式螺杆泵 2 往复型泵2 恒压泵 恒压泵又称气动放大泵 是输出恒定压力的泵 二 输液系统的辅助设备1 管道过滤器2 脉动阻尼器三 梯度洗脱装置1 低压梯度 外梯度 2 高压梯度 内梯度 3 影响梯度洗脱的因素 第三节进样装置 一 停流进样装置二 六通阀进样装置三 自动进样器 第四节色谱柱 一 柱材料及规格1 柱材料2 柱规格二 柱连接方式三 柱温控制四 柱填充技术 第五节检测器 常用的检测器为紫外吸收检测器 UVD 折光指数检测器 RID 电导检测器 ECD 和荧光检测器 FD 近几年出现的蒸发激光散射检测器 ELSD 有望成为高效液相色谱全新的通用灵敏的质量检测器 一 检测器的性能指标 1 噪声 2 基线漂移 3 灵敏度 4 线性范围 5 检测器的池体积 二 紫外吸收检测器1 固定波长紫外吸收检测器2 可变波长紫外吸收检测器3 光二极管阵列检测器三 折光指数检测器四 电导检测器五 荧光检测器 第三章键合相色谱法 根据键合固定相与流动相相对极性的强弱 可将键合相色谱法分为正相键合相色谱法和反相键合相色谱法 在正相键合相色谱法中 键合固定相的极性大于流动相的极性 在反相键合相色谱法中 键合固定相的极性小于流动相的极性 其应用范围比正相键合相色谱法更广泛 第一节分离原理 一 正相键合相色谱法的分离原理二 反相键合相色谱法的分离原理以下简述三种影响溶质保留值的因素 1 溶质分子结构对保留值的影响2 烷基键合固定相特性对保留值的影响3 流动相性质对保留值的影响 第二节固定相 使用键合固定相应注意的问题 1 硅胶键合相的稳定性2 键合相色谱分离的重现性3 键合相色谱分离的选择性4 键合相色谱柱的再生 第三节流动相 一 在键合相色谱中选择流动相的一般原则二 改善色谱分离选择性的方法1 调节流动相的极性2 向流动相中加入改性剂 1 离子抑制法 2 离子强度调节法三 溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律 第四节离子对色谱法 一 分离原理二 固定相 流动相和对离子三 影响离子对色谱分离选择性的因素1 溶剂极性的影响2 离子强度的影响3 pH值的影响4 温度的影响5 离子试剂的性质和浓度的影响 第四章建立高效液相色谱分析方法的一般步骤 通常在确定被分析的样品以后 要建立一种高效液相色谱分析方法必须解决以下问题 根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法 选择一根适用的色谱柱 确定柱的规格 柱内径及柱长 和选用固定相 粒径及孔径 选择适当的或优化的分离操作条件 确定流动相的组成 流速及洗脱方式 由获得的色谱图进行定性分析和定量分析 第一节样品的性质及柱分离模式的选择 一 样品的溶解度二 样品的分子结构和分析特性1 同系物的分离2 同分异构体的分离3 对映异构体的分离 第二节分离操作条件的选择 一 容量因子和死时间的测量二 样品组分保留值和容量因子的选择 下列优良常规操作