分解纤维素的微生物的分离知识点

课题3 分解纤维素的微生物的分离 纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶 一般认为它至少包括三种组分 即CX酶 C1酶和葡萄糖苷酶 前两种酶使纤维素分解成纤维二糖 第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 甲乙 在2支20mL的试管中 分别放入1 6cm的滤纸条 再分别加入pH为4 8 物质的量浓度为0 1mol L的醋酸 醋酸钠缓冲液10mL 11mL 在加入10mL缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶 70 80U mL 将二支试管固定在50mL的锥形瓶中 在摇床上以140r min的转速振荡反应1h 观察结果 4 纤维素酶活性的测定实验 纤维素分解细菌的筛选 1 方法 刚果红染色法这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选 刚果红可以与纤维素形成红色复合物 当纤维素被纤维素酶分解后 红色复合物无法形成 出现以纤维素分解菌为中心的透明圈 我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 2 原理 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 二 实验设计 此步可以省略 2 选择培养的操作方法 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中 将锥形瓶固定在摇床上 在一定温度下振荡培养1 2d 直至培养液变混浊 吸取一定量的培养液 转移至另一瓶新鲜的选择培养基中 以同样的方法培养到培养液变混浊 选择培养 富集培养 增加纤维素分解菌的浓度 以确保能够从样品中分离所需要的微生物 1 目的 刚果红染色法 方法一 先培养微生物 再加入刚果红进行颜色反应 方法二 在倒平板时就加入刚果红 为了确定分离得到的是纤维素分解菌 还需要进行 实验 纤维素酶的发酵方法有 发酵和 发酵 纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的 含量进行定量测定 课题延伸 发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 碳源氮源生长因子无机盐水 微生物需要的五大类营养要素物质 一 微生物需要的营养物质及功能 概念来源常见的生长因子 微生物生长不可缺少的微量有机物酵母膏 蛋白胨 动植物组织的提取液维生素 氨基酸 碱基等 生长因子 思考 是否培养所有微生物的培养基中都需要加生长因子 1 碳源 2 自养型微生物利用无机碳源 异养型微生物利用有机碳源 有机碳源 如糖类 无机碳源 如CO2 5自养型微生物的能源是光能或无机物氧化释放的化学能 异养型微生物的能源是和碳源一样 有机碳源 3 自养型微生物利用无机氮源 异养型微生物可能利用无机氮源也可能利用有机氮源 4 有机碳源也是异养型微生物的主要能源 8 有些微生物能合成纤维素酶 通过对这些微生物的研究和应用 使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精 用纤维素酶处理服装面料等 纤维素酶可以通过微生物发酵来生产 为了提高酶的产量 请你设计一个实验 利用诱变育种的方法 获得产生纤维素酶较多的菌株 1 写出实验步骤 制备含有 的固体培养基 2 预期实验结果结论 8 答案 1 将培养好的菌株分为两组 一组用一定剂量的诱变剂处理 另一组不处理作对照 把诱变组的大量菌株接种到多个含有纤维素的固体培养基上 同时对照组接种未处理的菌株 把它们置于相同的条件下培养 一段时间后 取培养基用刚果红染色 观察记录菌落周围透明圈的大小情况 2 诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相比较大 说明诱变育种获得了高纤维素酶产量的菌株 诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相同 说明诱变育种没有使菌株发生相关变化 诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相比较小 说明诱变育种获得了低纤维素酶产量的菌株 感谢亲观看此