鞭毛染色实验报告

1 / 12鞭毛染色实验报告山东大学实验报告 2016 年 10 月 26 日姓名： 年级同组 科目 微生物题目 观察鞭毛染色和运动201601140018一实验目的? 学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术 学习压滴法观察细菌运动性二实验原理? 细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。鞭毛直径一般为1030nm，只有用电镜才可以直接观察到。若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红、碱性复品红、硝酸银或结晶紫进行染色。2 / 12? 压滴法观察活菌运动的基本原理鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量 ATP 来驱动，鞭毛马达还可以转向从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。三实验器材? 菌种3 / 12枯草芽孢杆菌 12d 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌 12d 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物等? 溶液和试剂稀释美兰溶液，质量分数为 95%的乙醇水溶液，蒸馏水，硝酸银染液 A 液和 B 液等 ? 仪器和其它用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶，擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸等四实验内容? 压滴法观察活菌运动：详细步骤：? 洗片用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗? 涂片在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许，涂片完成? 滴加稀释美兰将稀释美兰滴加到涂片上，滴加均匀，注意不要滴加过多，否则影响活菌运动的观察 ? 加盖玻片加盖玻片时首先使盖玻片的一端接触载玻片上的液滴的一端，然后再将另一端缓缓放下，目的是防止气泡的4 / 12产生，以免影响观察? 迅速镜检由于菌体是放在蒸馏水中的，而且滴加的稀释美兰对其也有一定的影响，所以装片做好后要迅速镜检，以取得最佳的观察效果详细步骤：? 洗片用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗? 95%乙醇溶液浸泡将洗好的载玻片放入盛有 95%乙醇水溶液的培养皿中，浸泡 35min 后取出晾干，目的是将载玻片上的油污等洗掉? 涂片在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许，将载玻片倾斜使液滴从载玻片的一端流到另一端，然后用吸水纸吸取多余的液滴，涂片完成? 自然干燥? 滴加硝酸银 A 液向涂片上滴加适量的硝酸银 A 液，保持 35 分钟? 水洗5 / 12将上一步中所滴加的硝酸银 A 液洗掉，注意防止将涂片中的菌种冲掉? 硝酸银 B 液冲洗用硝酸银 B 液冲洗涂片，覆盖 45左右，宜稍稍加热? 水洗? 自然干燥? 镜检将做好的涂片放到显微镜下，由多到少观察两种菌，以方便找到鞭毛五实验结果与分析1、实验照片鞭毛染色形态：着色均匀，单个细胞 *2 微米，无荚膜，周围鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌形态特征：呈球杆状，成对成锻炼状排列，菌体的一段有单鞭毛，用电子显微 镜能观察得到它的运动方式2实验结果分析通过本次鞭毛染色实验，我认识到，以下几个方面决定了鞭毛染色是否成功。6 / 121染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。? 菌种的菌龄。老龄的菌种的鞭毛极易脱落，因此染色后很难看见有鞭毛。可以选择菌落边缘的幼龄菌落。? 在盖玻片上接种的时候，只需要在水中轻轻地沾几下即可，不要用里过猛，更不能用接种环大幅涂开。若动作太重太大，菌种的鞭毛就会被刮落。? 银染剂的使用方式和时间很重要。若时间过短或方式不当，就很难在媒染剂上着色，那么，我们也就没有办法在显微镜下观察到鞭毛了。鞭毛染色的玻片最好是自然晾干。加热后菌种易变形，鞭毛易脱落，影响观察。六、思考题1）出鞭毛染色之外，有什么办法能观察到鞭毛？答案：用电子显微镜直接观察就行。2)你对你所做的染色法发结果满意吗？如果不满意，有哪些方面需要改进？如果满意，说说你的成功经验。答案：满意 。染色时间要充足，制备载玻片时要保证载玻片已洗净，涂片时要注意不要过于用力涂抹，以免鞭毛脱落，作过程中注意动作要轻防止鞭毛因受到震荡脱落，选菌时，不要选取老龄菌，否则会导致效果不好，7 / 12另外，镜检时要耐心自习寻找。3）如果你发现鞭毛已脱离，请解释原因。答案：所选菌菌龄过老，鞭毛自然脱落，操作时玻片受到震荡，或者接种环在载玻片上反复涂抹，使鞭毛脱落。细菌鞭毛染色一、 实验目的学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。二、 实验原理细菌的鞭毛极纤细，直径一般为，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。三、 实验器材及试剂1. 菌种：枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌。 2. 溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂 A 液和 B 液、95%乙醇、蒸馏水。 3. 仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊子、电热炉、大烧杯、洗衣粉四、 实验步骤8 / 12鞭毛染色硝酸银染色法1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于 95%的乙醇溶液中浸泡 20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌可能是菌龄过大，自然脱落； 操作时玻片受到较强烈的震荡；接种时接种环在玻片上反复涂抹时使之脱落； 染色过久使之脱落。姓名：朴薇学号：201600140091 年级班级：09 生科三班组别：周三 2 组同组者：李雪彤、刘雯雯、潘红芳、娄峰时间：2016 年 10 月 20 日实验题目细菌鞭毛染色及运动性观察实验目的用鞭毛染色法对苏云金芽孢杆菌和铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，观察鞭毛的着生位置、数量、形态特征，并用压滴法观察活菌的运动情况。同时巩固显微镜操作技术和无菌操作技术。实验原理9 / 12一些引起人类严重疾病的细菌具有鞭毛。鞭毛的数量和着生方式，形态特征是细菌分类鉴定地重要依据。因此，细菌鞭毛的染色观察在临床医学上是鉴定致病菌的重要手段之一。因此学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征是微生物学者必须经受的训练。鞭毛是细菌的纤细丝状运动器官，鞭毛直径一般为 1030nm，只有用电镜才能直接观察到，若要用普通光学显微镜，必须使用鞭毛染色法。细菌中的螺旋菌、部分杆菌及少数球菌具有鞭毛，有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动能力。衰老细胞的鞭毛容易脱落，故观察运动性或做鞭毛染色时宜选用幼龄菌。首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红、碱性复品红、硝酸银或结晶紫进行染色。实验材料菌种枯草芽孢杆菌 12d 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌牛肉膏蛋白胨培养物。溶液和试剂%美兰水溶液，蒸馏水，硝酸银鞭毛染液，95%乙醇仪器和其它用品酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶，擦镜纸，接种环，镊子，滴管，无菌水等。方法及步骤10 / 12细菌运动的观察a载玻片准备将载玻片用去污粉洗净，然后用清水充分洗净，再置于 95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。b涂片取一载玻片，平放于实验台上，在中央区域滴一滴无菌水；无菌操作用接种环由铜绿假单胞杆菌及枯草芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基上挑取菌体，在无菌水中轻轻涂 12 下，至水滴混浊。c染色滴加一滴美兰染液覆盖菌液 35mind盖片用镊子夹持盖玻片，使其一端先接触液体，慢慢放下另一端，避免产生气泡。 e镜检制片完成后，迅速将标本放到显微镜载物台上，用油镜观察细菌运动情况。鞭毛染色硝酸银染色法a载玻片准备将载玻片用清水充分洗净，使用时在火焰上烤一下。b制片11 / 12去一滴无菌水滴到洁净载玻片一端，无菌操作用接种环由菌落平板上挑取数环菌落边缘菌体，悬浮于无菌水中制成菌悬液，倾斜玻片，使菌悬液缓慢流向另一端，用吸水纸吸去多余菌悬液，自然干燥。c染色滴加硝酸银染液 A 液覆盖菌面 35min 后用蒸馏水充分洗去 A 液。用硝酸银染液 B 液洗去残留水分后，再滴加 B 液覆盖菌面数秒至 1min，期间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。d镜检用油镜镜检观察。实验结果结果图一枯草芽孢杆菌