自体骨髓移植治疗骨坏死

自体骨髓移植治疗骨坏死Bone Marrow for Osteonecrosis,李子荣 王佰亮 史振才 孙伟中日友好医院骨科骨坏死与关节保留重建中心,骨坏死：准确的发病机制仍未明确,骨坏死的病理生理改变血管内血流直接的细胞毒间充质细胞分化损害假设：骨坏死为骨髓间充质细胞病,骨坏死为骨髓间充质细胞病,Suh等对比酒精性ON与股骨颈骨折的股骨近端骨髓酒精性骨坏死的骨髓细胞向成脂方向转化（Suh, et al. CORR 2005,431:220）Lee等：酒精性ON、特发性ON与OA比较股骨近端骨髓基质细胞成骨分化减少（Lee, et al. J Orthop Res 2006, 24: 604）,骨坏死为骨髓间充质细胞病,Cui等：体外试验：克隆骨髓细胞群暴露在酒精中可使成骨基因表达减少增加成脂形态特点（Cui, et al. JBJS 2006,88(suppl3): 148）Yin 等：骨髓基质细胞暴露在地塞米松成脂基因422 (ap2)表达增加甘油三脂合成增加骨标志的基因表达及细胞增加减少（Yin L, Chin Med J. 2006, 119: 581）,骨髓间充质细胞改变,成骨分化能力减少成脂细胞体积增加，血流减少本中心资料：对照股骨头颈的骨髓基质细胞（坏死与股骨颈骨折）,骨坏死：精确的发病机制仍未明确,有许多学说：均能解释一部分现象假设：骨坏死可能为骨髓间充质干细胞病股骨头坏死：成骨干细胞明显 (Hernigou, et al. JBJS 1999, 81B: 349)本中心资料：股骨头内骨髓基质干细胞减少股骨颈骨折非创伤性ONFH,资料和方法,密度梯度离心法,抽取5 ml 骨髓血,单个核细胞接种,PART 2,图1a,图1b,图1c,图1d,图1e,图1f,人骨髓基质干细胞的分离、培养,图1a：原代培养于24后,细胞贴壁；图1b、c：原代培养于5d后病例组的细胞集落；图1d、e：原代培养于3d后,对照组的细胞集落；图1f：细胞集落不断扩大而融合成单层长满瓶底。,结 果,PART 2,CD44FITC,CD29PE,荧光双标 X 200,人骨髓基质干细胞的鉴定,结 果,PART 2,骨髓基质干细胞的生长曲线（MTT法）Group1：股骨颈骨折对照组；Group2：股骨头坏死股骨近端组；Group3：股骨头坏死髂骨组,结 果,股骨颈骨折组,骨坏死组,PART 2,临床上应用植骨促进修复的机理,自然修复能力低，此与成骨性细胞减少有关，植骨目的是提供新的生骨细胞,修复过程,塌陷之前的自体骨髓移植,早期，塌陷前，骨坏死表现为死骨的存在和力学强度的降低血管性标志线,因此在骨坏死区注射成骨性细胞能有助于修复过程,红骨髓,2 部分,造血干细胞来源known since 1950and used by haematologists,基质干细胞来源suspected in 1869 by Goujonconfirmed twenty years agoby Owen and Fridenstein,BM-MNCs,Stromal Stem Cells,Hematopoietic Stem Cells,骨髓的细胞成分,骨髓中有两种具有多向分化潜能的干细胞:,ONE STROMAL CELL IN EVERY 250,000 CELLS IN THE MARROW AT AGE 35, BUT THIS RATIO DECREASES WITH AGE.,ONE HEMATOPOIETIC STEM CELL FOR EVERY 10-15,000 CELLS IN THE MARROW AND DOES NOT DECREASE WITH AGE,MultipotentStem Cells,基质干细胞,成骨性干细胞和骨髓基质系统,集群形成单位成纤维细胞修复标记,CFU-F,OSTEO,CHONDRO,FIBRO,STROMA SYSTEM,前体干细胞,ANGIOG?,正常股骨头,体积= 65 cmCFU-F= 50 / cm,总数 : 3000 CFU-F,3,3,股骨头的细胞成分,正常骨髓：脂肪与生血组织比率为1:1,股骨头坏死,坏死区：CFU-F = 0外区CFU-F = 4 / cm,总数 300 CFU-F,3,injected CFU-F :25 000,自体骨髓移植治疗股骨头坏死 Hernigou, 2002报告（CORR，2002, 405, 14）,189髋/116例髓心减压及骨髓移植F/U：7年（510）：转为THR9/145（stage、）至2006年，已积累1500例（坏死、骨折不愈合）,Gangji: 2004报告（JBJS，2004, 86A: 1153）,对比研究：18髋/、期，ONFH,随访24月结果：对照组：单纯减压，5/8进展到塌陷（期）骨髓移植组：减压加BMG，1/10进展到塌陷,赵永济：2005在中日友好医院报告,36髋/31例，随访12年放射线进展：22.2% (8/36)临床失败（转为THR）：13.8% (5/36),手术方法,骨髓血收集：150200ml/例,成人红骨髓,iliac crest spine sternum,2ml x 104ml x 106ml x 104ml x 154ml x 305ml x 30,抽吸次数,骨髓血浓缩：cobe 2991,细胞分离，离心,用3mm直径的空心钻经大转子减压与注射（双平面透视机）,本中心资料：2005.42008.2,单纯髓心减压 13髋/10例髓心减压加BMG 144髋/110例随访630月，平均17.646.12月 59髋/45例分期：（ARCO）c：2髋：（ A 7；B 13；C28 ）48髋：9髋平均年龄：37.5岁（1656）激素性：29髋/20例，酒精性：22髋/18例，特发性：8髋/7例,随访结果,Harris评分：术前71.20 术后83.74（p0.05）总优良率：79.66%（优22，良25），差5髋（8.5）激素性：75.86%酒精性：81.82%特发性：87.50%单纯减压：优3，良5，（61.5%）,随访结果（各期比较）,影像学进展：14(23.73%)，未进展76.27%,随访结果（各期比较）,转为关节置换病例,刘X，男，55岁，ARCO分期，右2C,术前,刘X，男，55岁，ARCO分期，右2C,术后1.5年,郭X，男，36岁，双3A，ARCO分期,术前,郭X，男，36岁，双3A，ARCO分期,术后9月,庄X，男，43岁，ARCO分期，双2C,术前,庄X，男，43岁，ARCO分期，双2C,术后12月；塌陷,刘X，女，33岁，右2B，ARCO分期（左侧3B 打压植骨）,术前,术后12月,孙X，男，50岁，ARCO分期（左侧3C THA，右2C）,孙X，男，50岁，ARCO分期（左侧3C THA，右2C）,术后1年；塌陷,尚未解决的几个问题,修复的骨组织是由植入的骨髓细胞分化而来吗？人体无法证实动物实验：干细胞标记示踪骨髓有核细胞的数量多大合适？与年龄的关系骨髓血抽取量,骨髓浓集对照,尚未解决的几个问题,加入哪些物质可增加干细胞向成骨方向转化？使用载体好？还