章 体液葡萄糖测定

第九章体液葡萄糖检验,糖的生理功能：提供能量，人体60%以上的能量来自于糖的氧化分解；构成人体的组织结构，如糖蛋白构成结缔组织和细胞间质，也参与细胞间的信息传递，与细胞免疫和识别有关；糖脂是神经组织和细胞膜的重要组分糖的存在形式：多糖-淀粉，双糖-蔗糖、乳糖和麦芽糖等，单糖-葡萄糖、果糖等。,糖的消化和吸收,食物中的糖类必须经过消化道水解酶分解为单糖才能被吸收。唾液和胰液中含有a-淀粉酶，催化淀粉水解生成麦芽糖，在小肠内淀粉可完全水解成葡萄糖；食物中的蔗糖、乳糖被相应的酶作用生成葡萄糖、果糖和半乳糖。食物中的糖类水解为单糖，在小肠上段吸收，吸收方式有主动转运、单纯扩散和异化扩散。,葡萄糖吸收后的代谢状况,葡萄糖经过门静脉入肝，部分经肝静脉入体循环，运输到各组织进行代谢。进入肝细胞的葡萄糖大部分合成肝糖原而储存，一部分分解氧化供肝细胞所需能量，还可转化为脂肪和非必需氨基酸。肝糖原可分解为葡萄糖再进入血液。血糖随血流进入组织，一部分氧化利用，一部分转变成糖原而储存。,血糖的来源,食物中糖的消化和吸收：主要来源；肝糖原的分解：空腹时血糖的直接来源；糖异生：禁食时，肝脏可将甘油、有机酸和生糖氨基酸的非糖物质转化为葡萄糖。单糖转化：肝脏可以将其他的己糖如果糖、半乳糖等转化为葡萄糖。,血糖的去路,在组织细胞内氧化供能，为主要去路。在肝脏、肌肉等组织合成糖原。转变为非糖物质，如甘油、脂肪酸和非必需氨基酸等以合成脂肪和蛋白质等。转变为其他单糖及其衍生物，如核糖、脱氧核糖等。,血糖浓度的调节途径,肝脏的调节:神经-激素-酶（双相调节）糖降低时通过肝糖原分解和糖原异生而升高，反之，肝糖原合成和转变非糖物质而降低。神经系统的调节：通过下丘脑和自主神经系统控制激素的分泌。激素的调节：降糖激素（胰岛素）和升糖激素,胰岛素（insulin）,生物学活性 由B细胞分泌的蛋白类激素，51个氨基酸残基组成的两条多肽链，以单肽链前胰岛素形式合成并储存，在酶作用下产生活性胰岛素和无活性的C-肽释放入血。首先与靶细胞膜表面特异性受体结合，改变结构，触发第二信使内化学改变，促使葡萄糖进入靶细胞，并增强其活性，促进糖原合成，转变成其他物质而降低血糖。,胰岛素的作用,加快葡萄糖进入细胞的转化速率促进糖原的合成加速糖的氧化分解促进糖转变为脂肪抑制糖异生,胰岛素生物学活性的影响因素,靶细胞膜上胰岛素受体数目(相对/绝对)到达靶细胞膜的胰岛素浓度胰岛素与靶细胞受体的亲和力胰岛素与受体结合后细胞内的改变情况,升高血糖的激素及作用,胰高血糖素：a细胞分泌多肽类激素。肾上腺素：胺类激素。都能促进肝糖原分解和糖异生加强，使血糖升高。糖皮质激素：类固醇激素，促进糖异生和单糖的吸收。甲状腺素：氨基酸类激素。促进单糖吸收、加速糖原分解和糖异生作用；促进糖酵解和有氧氧化。总趋势使血糖升高。,高血糖症和糖尿病,概念:FPD7.0mmol/L分类：生理性和病理性（糖尿病）糖尿病的诊断标准：1.症状+随机血糖=11.1mmol/L2.空腹血糖=7.0mmol/L3.OGTT2h血糖=11.1mmol/L症状不典型，需再次证实。,糖尿病的分类,胰岛素依赖型糖尿病（insulin dependent diabetes millitus，IDDM）1型，青春期。胰岛素非依赖型糖尿病（noninsulin de-pendent diabetes millitus，IDDM）2型，中年肥胖，受体数减少或缺陷，不敏感。继发性糖尿病：嗜铬细胞瘤、库欣病等。,糖尿病的代谢变化,三大代谢均发生改变，表现为高血糖：肝糖原分解加强，蛋白质动员加强，糖异生加强，血糖来源增加(组织对糖的摄取减少)，去路减少。糖尿(超过肾糖阈)、多尿(高渗性利尿)。高脂血症和高胆固醇血症。酮血症。乳酸血症,低血糖症,概念：血糖2.2mmol/L.出现相应征候群。原因：来源1mg/ml）、氟化钠 （5mg/ml）等均可影响测定结果。,酶法（GOD、HK和GLU-LD）,HK HK催化标本中的GLU与ATP反应，生成ADP 和G-6-P，后者在G-6-PD存在时，与NADP+作用，产生6-磷酸葡萄糖酸内酯及NADPH。GLU+ATP-G-6-P+ADPG-6-P+ NADP+-6-磷酸葡萄糖酸内酯及NADPH。NADPH在340nm处有最大吸收峰特异性高，敏感度高，干扰因素少，试剂昂贵。,GOD法,GLU+O2+H2O-GOD-葡萄糖酸内酯+H2O2H2O2+4-AAP+酚-POD-红色醌类化合物操作简单，特异性较高，是血糖测定的首选方法，但溶血和还原性物质可致负偏差。线性范围可达19mmol/L，回收率94%105%，CV7.0mmol/L，OGTT：100g，3h。,乳糖耐量试验（galactose tolerance test）,目的：评价乳糖的不耐受性方法：同OGTT判断标准：比空腹血糖高出1.7mmol/L为正常；低于1.1mmol/L可能为乳糖酶缺乏症。,血清糖化血红蛋白测定,血红蛋白的种类：HbA，HbA1、HbA2和HbF，其中HbA1 又包括HbA1a、HbA1b和HbA1c。 HbA1a又分为 HbA1a1和 HbA1a2。红细胞内的Hb缓慢与糖类结合形成糖化血红蛋白（glycosylated-hemoglobin，GHb），该过程是不可逆的。,糖化血红蛋白的形成：,HbA1c的B链N-末端缬氨酸氨基与葡萄糖醛基通过非酶促反应而连接； HbA1a1和的N-末端可连接1，6-二磷酸果糖；HbA1a2可与葡萄糖6-磷酸连接；Hb与糖结合的形成过程称为糖基化作用， GHb是HbA1c的合成后化学修饰的结果。,GHb的形成,GHb的形成取决于血糖浓度及血糖与Hb的接触时间，其生成量与血糖浓度成正比。其浓度可反映测定前12个月受试者的血糖平均水平，而与血糖的短期波动无关。,GHb的测定方法,层析法、电泳法、比色法和RIA法等。目前推荐的常规方法是亲和层析法和控制温度的离子交换层析微柱法，HPLC列为参考方法。,GHb的测定方法,离子交换层析微柱法：Bio-Rex70阳离子交换树脂带有负电荷，与标本中带有正电荷的HbA和HbA1有亲和力，由于HbA1的两个B链N末端正电荷被糖基清除，正电荷比HbA少，二者对树脂的亲和力不同，用适当的离子强度和pH的缓冲液先将带正电荷较少、吸附力较弱的HbA1的洗脱下来，用分光光度计测定。,离子交换层析微柱法：,特点：简单快速，15min可完成。 微柱可重复使用。 不精密度在2%16%之间。 应控制标本量和分离时的温度。 HbF可引起正干扰。 有准确的pH和离子强度的缓冲液和优质树脂,GHb的测定方法,琼脂糖凝胶电泳：快速准确分离和定量GHb，防止微柱分离法出现的问题，但HbF的迁移率与HbA1相同，产生正干扰。RIA法：灵敏、特异，准确度高，但抗体制备较难，试剂昂贵，需专门仪器。,GHb的测定方法,化学法：可用于自动化分析，结果用果糖或5-羟甲基糠甲醛（5-HMF）校准，不受非糖化血红蛋白和不稳定血红蛋白中间产物的影响。但费用高，标本用量大，CV为4%18%。,GHb测定的临床意义,糖尿病患者GHb含量与空腹血糖和病程成正相关。作为糖尿病长期控制的良好指标，反映测定前12个月内血糖的平均水平。鉴别糖尿病高血糖和应激性高血糖，前者GHb水平升高，而后者正常。,血清糖化白蛋白测定,血清中的各种蛋白质与葡萄糖发生糖基化反应（生成酮胺化合物），其产物称为糖化血清蛋白（Glucosylated serum protein-GSP），主要与白蛋白结合，所以GSP又可称为糖化白蛋白，其结构类似于果糖胺，GSP测定又称为果糖胺测定。,血清糖化白蛋白测定方法,比色法：糖化蛋白质中的酮胺与弱酸共热，转变为5-羟甲基糖酐，再与硫代巴比妥酸显色，在445nm处比色测定，灵敏度和特异度较差。亲和层析法：选择性结合糖化衍生物，洗脱分离糖化蛋白质，用溴甲酚绿法测定微量白蛋白，误差较大。,血清糖化白蛋白测定方法,免疫化学法：免疫电泳（能准确定量，但难以大批量测定）和免疫比浊法（放射免疫比浊和激光免疫比浊，对设备要求较高。果糖胺法：利用果糖胺中的酮胺基能还原四氮唑蓝（NBT），生成紫红色化合物，在530nm处有作大吸收峰。易进行自动化，不受溶血、脂血和黄疸的干扰。但应注意标准化。,血清糖化白蛋白测定的临床意义,用于糖尿病的筛选：与空腹血糖呈明显的正相关，且不受饮食的影响。用于糖尿病近期疗效的监测指标，测定结果可有效反映糖尿病患者过去12周的平均血糖水平。用于妊娠糖尿病与孕期高血糖的鉴别。糖尿病并发症的预测和防治。,胰岛素测定和胰岛素释放试验,胰岛素测定用于了解胰岛B细胞的合成和分泌功能，在肝、肾组织中灭活，受血糖浓度调控，检查胰岛素分泌功能用于诊断1型糖尿病。胰岛素释放试验：反映胰岛B细胞的储备能力，与OGTT方法相同。,胰岛素测定方法和临床意义,胰岛素测定方法RIA、时间分辨荧光法和化学发光免疫比浊法临床意义1型糖尿病，无论空腹或餐后，胰岛素水平均明显降低。进餐后呈低平曲线。长期使用胰岛素可产生胰岛素抗体，应进一步测定C肽和胰岛素抗体。2型糖尿病，空腹胰岛素正常或略高于正常，但餐后胰岛素释放迟缓，其峰值多延至1.5h以后，比正常人晚1h以上。肥胖、肝肾疾病或排泄受阻时胰岛素增高。,C-肽测定,C-肽是胰岛素产生过程中分离出来的产物，与胰岛素以等摩尔从B细胞释放，其半衰期-11min）比胰岛素长（4.8min），且不被肝脏破坏，只经肾脏代谢，尤其对胰岛素治疗的病人，更能准确反映胰岛功能。甲苯磺丁脲可决定是否用胰岛素。5min以后超过20.4微克/L不用；低于1.9微克/L则用胰岛素治疗。,C-肽测定临床意义,用于糖尿病的分型：1型糖尿病C-肽减少或测不出；2型糖尿病正常或偏高，但高峰迟缓。判断胰岛功能。长期接受胰岛素治疗，产生抗体，C-肽不受影响