性传播疾病的实验诊断.ppt

性传播疾病的实验诊断 第一节概述 一 概述二 重点介绍艾滋病 梅毒 淋病 非淋菌性尿道炎 生殖器疱疹 尖锐湿疣 软下疳 性病性淋巴肉芽肿的临床检测方法及临床意义 2个概念 性病 VD 是指通过性交传染的 具有明显生殖器损害症状的全身性疾病 4种性传播疾病 STD 是指通过性接触可以传染的一组传染病 在我国 人们简称为性病 包容20余种 概述 历史上 传统 把通过性活动传染的疾病称为性病 Venerealdiseases VD 主要指 梅毒 syphilis 淋病 gonorrhea 性病肉芽肿软性下疳四种又称 经典性病 概念更新 上世纪 年代以来发现 许多病原体也可以通过性生活传播迄今为止大约已发现 余种性病同时 四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法 明显地得到了抑制1970年 世界卫生组织把旧名称 性病 改为 性传播疾病 Sexuallytransmitteddiseases STD 我国重点防治的性病 艾滋病 AIDS 获得性免疫缺陷综合症 HIV梅毒 syphilis 由梅毒螺旋体梅毒亚种所致慢性性传播疾病尖锐湿疣 condylomaacuminatum 由人乳头瘤状病毒 hpv 引起淋病 Gonorrhea 淋病奈瑟菌生殖器疱疹 genitalherpes 由单纯疱疹病毒感染非淋菌性尿道炎 NGU 沙眼衣原体和解脲脲原体软下疳 chancroid 杜克嗜血杆菌所致生殖器部位性病性淋巴肉芽肿 lymphogranulomaVenereum 由沙眼衣原体引起 第四性病 STD的诊断 病史 接触史临床表现实验室检查STD监测和疗效判断的重要依据 实验室检查 一 艾滋病的实验室诊断 理论依据 大量血清学流行病学资料 V 几周 IgM抗体出现很快 IgG抗体出现并一直存在 无免疫源性 实验目的 检测抗 HIV抗体 IgG主 用于诊断实验 HIV血清学初筛试验HIV血清学确证试验 HIV血清学初筛试验 一 酶联免疫吸附试验ELISA法的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物 酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物 然后加入酶底物 经酶的催化或水解作用 无色底物产生颜色 用肉眼 分光光度计观察结果 初筛实验方法 明胶颗粒凝集试验 PA 双抗原夹心法 p24抗原免疫荧光试验 IFA 标本要求 新鲜全血2ml 无抗凝 确证实验方法 二 免疫印迹试验基本原理 HIV全病毒抗原经过PAGE电泳 将分子量大小不等的蛋白带分离开来 然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上 将此膜切割成条状 每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原 将待检血清样品用稀释液稀释成1 100 再把它直接加到硝酸纤维素膜上 恒温震荡 使其充分接触反应 血清中若含有抗HIV抗体 就会与膜条上的抗原带相结合 加入抗人IgG酶结合物和底物后 抗体结合带呈现紫褐色 临床意义 初筛试验 阴性结果 基本可排除HIV感染 必要时2 3月复查阳性结果 其它初筛方法重复试验 阳性报告HIV抗体待查 进一步做确证试验确诊试验 结果阳性的标本可报告HIV抗体阳性 其它相关试验 用于预后及抗病毒治疗疗效观察实验室指标的检测 1CD4 细胞和CD8 细胞计数CD4 淋巴细胞正常值为500 1600个 ul CD4 CD8 的正常比值为 1 5 1 7 12病毒载量测定 viralload VL 实际上 体内复制的病毒的数量是不能直接测量的 一般用血浆中HIVRNA的拷贝数代表HIV的病毒载量 HIV病毒载量与疾病进展速率和预后有强相关关系 其它相关试验 P3实验室 病毒分离培养相关抗原检测 二 梅毒的临床分期 后天梅毒 一期梅毒二期梅毒三期梅毒 晚期梅毒 先天梅毒 梅毒一期皮损 硬下疳 梅毒二期皮损 梅毒晚期损害 二 梅毒的实验室诊断 梅毒 由梅毒螺旋体梅毒亚种所致慢性性传播疾病 检查病原体的试验测抗体 血清学检查 检查病原体的试验 暗视野显微镜检查法 WHO推荐 临床意义 直接检查到梅毒螺旋体 可确证梅毒 是早期梅毒检测最好的方法 梅毒螺旋体抗体检测 两组试验 1 非密螺旋体抗原试验 初筛 2 密螺旋体抗原试验 确证 两组试验的目的都是检测抗体非密螺旋体抗原试验 抗 脂质抗体 非特异性 密螺旋体抗原试验 抗 梅毒螺旋体抗体 特异性 非密螺旋体抗原血清学试验 方法 1 性病研究实验室试验 VDRL2 不加热血清反应素试验 USR3 快速血浆反应素环状卡片试验 RPR4 甲苯胺红试验 TRUST 四种初筛方法 原理 当人体感染梅毒螺旋体4周 10周左右后 血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体 主要是IgM和IgG 目的 抗 脂质抗体 四种初试验筛方法的比较 密螺旋体抗原血清学试验 原理 人体感染梅毒螺旋体后会产生特异性梅毒螺旋体抗体 可通过检测该抗体对梅毒进行诊断 密螺旋体抗原血清学试验 1 梅毒螺旋体血球凝集试验 TPHA 2 梅毒螺旋体明胶凝集试验 TPPA 快速 简便 准确而青睐3 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 FTA ABS 4 梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验 TP Ab 它用双抗原夹心法 同时检测IgM IgG抗体 故可用于早期诊断 并避免了单片段抗原混合干扰 其他实验 免疫印迹法 是一种诊断梅毒感染的特异性实验 PCR试验 多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA 三 淋病 gonorrhea 淋病 由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖系统化脓性炎症 是八种性病中发病人数最多的一种 可入侵泌尿生殖道其他部位 附睾 前列腺炎 输卵管炎及盆腔炎甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关节炎 心内膜炎及脑膜炎等 淋菌性尿道炎 淋病的实验室检查 1 涂片染色革兰阴性卵圆形或肾形 成双排列 有些脓细胞内可有许多淋球菌2 分离培养及鉴定 新生儿淋菌性结膜炎 实验室诊断步骤 淋菌感染男性患者女性患者尿频 尿急 尿道分泌物脓性宫颈分泌物 无症状 脓性分泌物涂片G 染色拒绝做 G 双球菌细胞内取宫颈分泌物 初步诊断 MTM培养基培养 治疗典型菌落形态G 双球菌 OX 糖发酵试验 确诊 培养标本采集 关键是深度一定要够男性取材 拭子深入尿道2cm 4cm处并转动蘸取少量粘膜女性取材 子插入宫颈1 2厘米处稍转动并停留10秒 30秒 以获得上皮细胞 取出棉拭子时不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染 其他相关试验 1 直接免疫银光染色2 SPA协同实验3 酶反应4 固相酶免疫试验 四 非淋菌性尿道炎 NGU 病因 沙眼衣原体CT D K 40 50 支原体 UU MH 20 30 阴道滴虫 白念和 10 20 NGU CT检测 血清学试验对诊断衣原体感染价值有限1 迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的CT的检测2 CT感染轻微 潜伏期长 影响急性期采血时间配对血清难以得到3 血清抗体持续时间长 单一血清标本只能显示曾经感以前染过CT4 双份血清效价比有4被增高才有临床意义 NGU CT检测方法 1 细胞涂片的吉姆萨染色 发现一定数量的包涵体 原体呈紫色 包涵体呈金黄色 NGU CT检测方法 2 涂片碘染色法 包涵体中有糖原遇碘呈棕色 敏感性差 不适用于NGU3 直接免疫荧光法染色 敏感性93 特异性96与培养并列为金标准对试剂 显微镜质量要求很高 操作人员技术要求高 价格昂贵4 衣原体酶免疫测定EIA 抗CT单抗包被固相载体 标本再 多克隆抗体 IgG酶标抗体 酶标仪检测适用于批量筛查NGU衣原体感染5 衣原体分离培养 McCoy Hela BHK 21细胞培养 NGU CT检测方法 6 PCR7 立明 Clearview 衣原体快速免疫测定法 原理 沙眼衣原体检测试剂盒采用高特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测临床标本中是否含有沙眼衣原体抗原 该试验是目前诊断NGU衣原体感染普遍采用的方法 沙眼衣原体胶体金法 检验原理 用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜 并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂 应用胶体金免疫层析技术 采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法 Colloidalgoldimmunochromatographystrip 9 检验结果的解释 阴性结果 仅质控线 C 有一条红线 阳性结果 C和T都有一条红线 无效结果 质控线不出现红线 注意 检测线很强时 质控线可能相对减弱 属正常现象 注意事项 1试验敏感性87 特异性98 8 但标本中需要有一定的抗原量 量低于敏感性可出现假阴性 2 检测试剂盒仅证明标本中存在沙眼衣原体抗原 不能区别是衣原体感染还是携带者 也不能区别衣原体死活 不能作为判愈试验 3 标本采集是关键 NGU 支原体感染 非淋支原体感染 UU为主 MH次之我国报道7个地区健康人携带率解脲支原体 UU 占10 59 人型支原体 MH 占5 34 正常菌群的组成部分 支原体检测方法 1 分离培养2 聚合酶链反应 PCR DNA探针技术诊断3 血清学检测 代谢抑制试验 ELISA 间接免疫荧光都仅用于科研和流行病学调查上 不适于诊断用 支原体培养 固体培养基 生长耗时5天左右液体培养基 原理 UU 尿素 氨PH 含酚红培养基由黄 红MH 精氨酸 氨PH 含酚红培养基由黄 红 生殖道支原体 方法 R1 R2 运送 溶解 R1 R2 接种试剂条 55 l 2滴矿物油 OUuMhUuMh 104 1044211410 1212 MycoplasmaIST2 37 C培养24 48h 红色 阳性 黄色 阴性 五 生殖器疱疹实验室检查 病因 单纯疱疹病毒HSVSHV 1主要感染上半身部位 15岁以下多 SHV 2主要感染腰以下部位 多见于青春期后 生殖器疱疹检查方法 病原体检查 1 病毒体外细胞培养和鉴定 技术条件要求较高 不宜用于临床2 单纯疱疹病毒抗原检查 1 ELISA 3 DNA杂交 2 IFA 4 PCRPCR和DNA不能单独作为确诊指标病原学检查ELISA有敏感性高 特异性强 准确率高应用面广 操作简便等优点 生殖器疱疹检查方法 血清学检查 抗体检测 所有用于检测抗原的方法经适当改良后 均可用于抗体检查SHV感染个体中的不均一性和不稳定性成年人群中有很高的HSV抗体检出率 大多获自隐性感染 且抗体的存在尚不能完全保护机体免受疱疹病毒的重复感染 HSV抗体检测阳性对临床诊断帮助不大 对新生儿 婴幼儿感染诊断有一定意义 六 尖锐湿疣实验室检查 病因 人类乳头瘤病毒 HPV发病率 持续增长 我国急剧上升 已占各种性病第二位 六 尖锐湿疣实验室检查 尖锐湿疣检测 典型的尖锐湿疣通常不需作实验室检测便可作出诊断临床医生观察为主醋酸白试验有助于检查不明显的疣 尖锐湿疣检查方法 1 细胞学检查 病理皮损活检 发现有HPV感染的特征性凹空细胞的组织病理变化特点 较可靠的办法 2 组织病理 基本上为角化不完整 棘层深层肥厚 奶头瘤样增生 粒层和棘层上部细胞有显著的空泡形成 棘细胞基底细胞有特别数量之核皴裂 很像癌变 但细胞排裂规则 且增生上皮和真皮之间规模清楚 尖锐湿疣检查方法 3 核酸杂交试验 PCR皮损活检中用抗原或核酸检测显示有HPV感染 常见的是HPPV6 11型 阳性率可达80 左右 当真性和假性尖锐湿疣鉴别困难时 可用HPV DNA原位分子杂交进行鉴别 此法是目前一种敏感性和特异性很高的鉴别手段 阳性率可高达90 以上 七 软下疳实验室检查 病因 杜克雷嗜血杆菌诊断标准1 有不洁性交史2 会阴部发生于1 2个溃疡 周围可发生多个卫星状小溃疡 疼痛明显 基底软 上有脓性分泌物 腹股沟淋巴肿大 触痛 化脓 软下疳实验室检查 疾病特征 1 潜伏期1 30天 发病快进展快感染道溃疡4 6天2 初起一个或数个言行丘疹或结节周围红斑 24H糜烂或溃疡圆形或椭圆形 相邻的可融合成大溃疡边缘不整齐 病变周围可发生卫星状病变 3 溃疡有脓性分泌物或蜡样脓苔 常有潜蚀性坏死和穿凿性窦道 晚期基地肉芽增生 形成不规则瘢痕可自愈可再发4 溃疡不形成硬韧基底 并变软 明显区别于硬下疳疾病初起都在生殖器也可见肛门 大腿上部 口腔和手 软下疳 软下疳实验室检查方法 1 涂片检查 取软下疳溃疡边缘下贮留脓汁或穿刺横痃抽吸的脓汁涂片行革兰染色 镜下可见革兰阴性短小杆菌 两端钝圆 有两极浓染现象单个 成堆或链状排列易产生假阳性假阴性不推荐用 软下疳检查方法 2 培养检查 采用GCHGS或MHHb培养基培养 菌落常于接种后48小时形成 色灰黄而透明 直径约1 2mm 菌落涂片革兰染色呈阴性球杆菌 呈短链 团块或指纹状排列过氧化酶试验阴性 非卟嘛试验阴性 硝酸盐还原试验阳性 碱性磷酸酶试验阳性 典型的菌落和镜检典型的菌体形态鉴定结果符合标准结合临床可作出确定诊断报告 软下疳检查方法 3 组织病理中央为溃疡 溃疡边缘表皮增生 溃疡下方可见三个炎症带 垂直排列 分别为 溃疡基底层 多形核白细胞为主 混有红细胞 有嗜中性白细胞 淋巴祖细胞及组织细胞浸泡 可见较多的纤维母细胞 深层 淋巴细胞 浆细胞弥漫性浸润 血管周围明显 用Giemas及 Gram染色 有时可在浅表层或深层查见杜克雷嗜血杆菌组织病理对软下疳有一定的意义 但也要结合临床表现 八 性病淋巴肉芽肿LGV 病因 沙眼衣原体的L1 L2和L3主要侵犯淋巴组织流行病学 散发北美 欧洲 澳洲及南美 亚洲部分地区印度及部分东南亚国家 我国80