动物细胞工程高三一轮复习(超好).ppt

动物细胞工程 考点一 动物细胞培养 一轮材料P238 239 动物细胞培养原理 其过程所用培养基一般是 培养基 动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养 因为 动物细胞培养过程中两次用到 第一次的作用是 第二次是 目的是避免动物细胞的接触抑制 将动物细胞分散成单个细胞培养的原因 保证细胞所需要的营养供应 保证细胞内有害代谢产物的及时排出 细胞增殖 液体 分化程度低 增殖能力强 更易于培养 胰蛋白酶 将剪碎的组织分散成单个细胞 将贴壁细胞从瓶壁上分离下来 特别提醒 微量元素 1 分析命题热图 明确答题要点如图 为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线 图中B E两点表示经筛选 分装后继续培养 据图分析 1 原代培养和传代培养的分界点是哪个 3 E点后细胞大多数具有异倍体核型 这样的细胞有什么特点 E点后的细胞属于细胞系 能无限增殖 2 AB段和DE段繁殖速度缓慢的原因是什么 B点之前的培养称为原代培养 之后的培养称为传代培养 发生了接触抑制 C 难 易 选取10代以内的细胞 因为 一般能保持正常的二倍体核型 重组细胞 重组胚胎 1 2016 全国课标卷 40 下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物 二倍体 的流程 回答下列问题 1 图中A表示正常细胞核 染色体数为2n 则其性染色体的组成可为 过程 表示去除细胞核 该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行 去核时常采用 的方法 XX或XY 显微操作去核法 2 经过多次传代后 供体细胞中 的稳定性会降低 因此 选材时必须关注传代次数 3 若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同 从遗传物质的角度分析其原因是 4 与克隆羊 多莉 利 培养成功一样 其他克隆动物的成功获得也证明了 遗传物质 核型 卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响 已经分化的动物体细胞核具有全能性 1 动物细胞融合 1 原理 2 融合方法 聚乙二醇 PEG 电激等 3 意义 突破了的局限 使成为可能 也为制造 开辟了新途径 细胞膜的流动性 灭活的病毒 有性杂交方法 远缘杂交 单克隆抗体 考点三 动物细胞融合与单克隆抗体的制备 抗体 1 优点 特异性强 可大量制备 2 单克隆抗体 1 制备过程 杂交瘤细胞 能产生特异性抗体 灵敏度高 妙学妙记1 制备过程的 122 一融合 二筛选 二培养 2 单克隆抗体的优点可 特 灵 3 两次筛选目的是什么 第1次 杂交瘤细胞 多种 第2次 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 问题强化 1 本过程利用了哪些原理 免疫原理 动物细胞融合和动物细胞培养原理 2 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合 继承了双亲细胞的遗传物质 能无限增殖又能分泌特异性抗体 4 为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活 不灭活行吗 灭活的病毒能使细胞膜打开 细胞发生融合 不灭活的话会感染细胞 而不能诱导细胞融合 1 2014 课标卷 40 研究者用抗原 A 分别免疫3只小鼠 X Y和Z 每只小鼠免疫5次 每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价 能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数 结果如下图所示 制备杂交瘤细胞 取免疫后小鼠的B淋巴细胞 染色体数目40条 与体外培养的骨髓瘤细胞 染色体数目60条 按一定比例加入试管中 再加入PEG诱导细胞融合 经筛选培养及抗体检测 得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞 1 制备融合所需的B淋巴细胞时 所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上 则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的 达到要求后的X Y Z这3只免疫小鼠中 最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠 理由是 2 细胞融合实验完成后 融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外 可能还有 体系中出现多种类型细胞的原因是 3 未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活 原因是 4 Y Y小鼠的抗体效价最高 B淋巴细胞相互融合形成的细胞 骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的 且融合率达不到100 正常细胞不能无限增殖 2 海南高考 单纯疱疹病毒 型 HSV 可引起水泡性口唇炎 利用杂交瘤技术制备出抗HSV 的单克隆抗体可快速检测HSV 回答下列问题 1 在制备抗HSV 的单克隆抗体的过程中 先给小鼠注射一种纯化的HSV 蛋白 一段时间后 若小鼠血清中抗 的抗体检测呈阳性 说明小鼠体内产生了 反应 再从小鼠的 中获取B淋巴细胞 将该B淋巴细胞与小鼠的 细胞融合 再经过筛选 检测 最终可获得所需的杂交瘤细胞 该细胞具有的特点是 2 若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体 可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的 中使其增殖 再从 中提取 纯化获得 3 通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV 蛋白 其原因是该抗体具有 和 等特性 HSV 蛋白 体液免疫 脾脏 骨髓瘤 无限增殖且产生特异性抗体 腹腔 腹水 灵敏度高 特异性强 易错 清零 易错点1动物细胞培养时 可使用胰蛋白酶或胃蛋白酶 胃蛋白酶适宜pH约为1 8 胰蛋白酶为7 2 7 8 而动物细胞培养的适宜pH为7 2 7 4 易错点2动物细胞培养液中加入5 CO2的目的是维持气体平衡或用于呼吸 目的是 维持培养液的pH 易错点3选择M 末期的卵母细胞作核移植的受体细胞 M 中期的卵母细胞 此时具备受精能力 细胞质中的物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化 形成重组胚胎 易错点4混淆原代培养与传代培养 1 原代培养 细胞悬液第一次在瓶中培养 没有分瓶前的细