气相色谱 液相色谱 归一法操作.doc

气相、液相色谱仪里常说的面积归一法、内标法、外标法等分别是什么意思？面积归一化法,以总面积为100%,计算纯度多用;外标法,需单独用标准品作成一标准曲线,用于分析供试品;内标法,除标准品外,还需引入一种合适的内标物,以标准品与内标物响应值的比值作标准曲线,求解供试品与内标物响应值的比值所对应的供试品的量.气相色谱准归一化法或相对归一化法以及该方法的应用条件定量测量时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法，测定杂质含量时须采用峰面积法。1、内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量(1)按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： AsCs 校正因子（f） ARCR 式中 As内标物质的峰面积或峰高； AR对照品的峰面积或峰高； Cs内标物质的浓度； CR对照品的浓度。再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或其杂质）和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： Ax 含量（C x）f As内Cs内 式中 Ax供试品（或其杂质）峰面积或峰高； C x供试品（或其杂质）的浓度； As内内标物质的峰面积或峰高； Cs内内标物质的浓度；f较正因子当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液，使用同一浓度的内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。(2) 内标物质的选择 内标物质应是样品中部含有的组分，否则会使峰重叠而无法准确测量内标物质的峰面积。 内标物质的保留时间应与待测成分接近，并达到完全分离，即分离度R1.5。 内标物质应是纯度符合要求的化合物，若非纯品，无干扰峰也可使用，已知含量的较蠢物质也可使用，但须扣除内标物质的重量。2、外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下的规定，精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高）。按下式计算 含量： Ax 含量（C x）CR AR 由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量或或自动进样器进样为好。3、 加校正因子的主成分自身对照法 4、 不加校正因子的主成分自身对照法5、 面积归一化法 由于峰面积归一化法测定误差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。方法是测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。 实验十 气相色谱归一化定量分析一、实验目的1、进一步掌握气相色谱仪的操作要点2、了解气相色谱各种定量方法的优缺点3、进一步熟练掌握根据保留值，用已知物对照定性的分析方法4、掌握用归一化法测定混合物中各组分的含量二、实验原理气相色谱的定量分析：峰面积百分比法、归一化法、内标法和外标法等。峰面积百分比法适用于分析响应因子十分接近的组分的含量，要求样品中所有组分均出峰。归一化法定量准确，但它不仅要求样品中所有组分均出峰，而且要求具备所有组分的标准品，以便于测定校正因子。内标法是精密度最高的色谱定量方法，但要选择一个或几个合适的内标物并不总是易事，而且在分析样品前必须将内标物加入样品中。外标法简便易行，定量精密度相对较低，而且对操作条件的重现性要求较严。本实验采用归一化法。 定量分析的依据：被测组分的质量与其色谱峰面积成正比。即 峰面积 A 的测量：A1.06hW1/2 ；fi 为比例常数，是定量校正因子，一般色谱手册中提供有许多物质的相对校正因子，可直接使用。定量分析的步骤：第一步，先进行定性分析：化合物在一定的色谱操作条件下，每种物质都有一确定的保留值，故作为定性分析的依据；在相同的色谱条件下对已知样品和待测试样进行色谱分析，分别测量各组分峰的保留值，若某组分峰与已知样品相同，则可认为二者是同一物质。从而确定各个色谱峰代表的组分。第二步，归一化法测定含量：若试样中含有n个组分，且各组分均能洗出色谱峰，则其中某个组分i的质量分数为 Wi 可按照下式计算：归一化法的优点是简便、准确，定量结果与进样量无关，操作条件对结果影响较小；缺点是试样中所有组分必须全部出峰，某些不需要定量的组分也要测出其校正因子和峰面积。三、仪器和试剂1、仪器：GC-9790气相色谱仪（温岭福立分析仪器有限公司）；FID；毛细管柱，微量进样器2、试剂：己烷，庚烷，辛烷，壬烷 四、实验步骤1、气相色谱仪的基本操作流程（1）开启：a、开启载气N2钢瓶的阀门；b、将气体净化器打到“开”的位置；c、打开色谱仪的电源；d、打开色谱工作站；（2）实验条件如下：柱温100，汽化室温度：150，检测器温度：180；N2流速：45mL/min；H2 40mL/min；空气：450mL/min；纸速：10cm/min（3）待检测器FID温度达到的时候，开启H2钢瓶的阀门及打开空气源的电源，点燃FID；（4）运行程序一次并用丙酮进样清洗色谱柱；（5）进样，运行；（6）结束时，再用丙酮进样清洗色谱柱，设置程序。辅助I：50；column：50；FID：50。先关闭氢气、空气源。等到温度降至该设置温度时，方可关闭色谱仪电源，最后关闭载气阀门。2、混合物的分析（1）纯样保留时间的测定分别用微量注射器移取纯样（己烷到壬烷）溶液0.2L，依次进样分析，分别测定出各色谱峰的保留时间 tR。（2）混合物试液的分析用微量注射器移取0.2L混合物试液进行分析，连续记录各组分色谱峰的保留时间，记录各色谱峰的峰面积。五、结果处理1、将混合物试液各组分色谱峰的调整保留时间与标准样品进行对照，对各色谱峰所代表的组分作出定性判断。2、根据峰面积和校正因子，用归一化法计算混合物试液中各组分的质量分数。各组分的 fi 值见下表：组分己烷庚烷辛烷壬烷fi保留时间峰面积质量分数3、实验完毕，按照要求关闭色谱仪。六、注意事项1、测定时，取样准确，进样要求迅速，瞬间快速取出注射器；注入试样溶液时，不应有气泡。2、进样后根据混合物溶液中各组分出峰高低情况，调整进样量，使得出峰最高的约占记录纸宽度的80左右。3、测定时，严格控制实验条件恒定，这是实验成功的关键。4、为了保护色谱柱，要求载气首先打开，然后开机，结束时先关机，后关载气；严格按照要求的顺序开启和关闭色谱仪。七、思考题1、进样操作应注意哪些事项？在一定的条件下进样量的大小是否会影响色谱峰的保留时间和半峰宽度？2、色谱定量方法有哪几种，各有什么优缺点？3、色谱归一化法有何特点，使用该方法应具备什么条件？附：进样操作（1）进样时要求注射器垂直于进样口，左手扶着针头以防弯曲，右手拿着注射器，右手食指卡在注射器芯子和注射器管的交界处，这样可以避免当针进到气路中由于载气压力较高把芯子顶出，影响正确进样。（2）注射器取样时，应先用被测试液洗涤56次，然后缓慢抽取一定量试液，并不带有气泡。（3）进样时，要求操作稳当、连贯、迅速，进针位置及速度，针尖停留和拔出速度都会影响进样重现性。（4）要经常注意更换进样器上的硅橡胶密封垫片，防止漏气。仪器专场展示：液相色谱 色谱柱 制备液相色谱关 键 词：液相 面积归一法我是做新产品的，基本没有法定的方法与对照品，所以我们一般都用面积归一法测定纯度与杂质等但越做越发现有很多问题，如：重现性差的问题，在不同仪器上做的可能不一样，不同浓度样品的结果不一样（既使在线性范围内），甚至可能灯能量不一样检出的结果也有差异，有的我觉得理论上不太想得通。所以在此提出来讨论，希望大家提出好的意见与经验，还有些什么地方要特别注意，或者说都有些什么影响因素。谢谢！基本上是粗略的算法。重现性差很正常。做定量时该方法没有意义。除非你明白样品中含有的所有物质。 谢谢！我也明白这道理。但现在我们的质量控制手段只有这样。测有对照品就没办法做外标内标法。杂质定不了性也得不到，只有用面积归一法，这一般倒是客户认可的。只是在做的时候发现有重现性的问题。而我们的分析方法是由研发建立的。我们使用时肯定相应的如仪器状况等条件要变。所以常有麻烦事。我也想将这方法尽量做准确些啊。 归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。不适于微量杂质的含量测定。 归一法是个没有办法的办法，实属无奈之举，目前在没有对照品之前为止只有如此了。 液相一般是不推荐用归一法定量的，所以还是外购标准品吧！还有建议你们研发的，要建立外标或内标的方法进行定量，不要贪图方便给下面的工作找来麻烦！ 用归一法也只能这样了.要克服你说的弊端,只有换方法,用外标法了 请你们研发的人员尽量提纯样品，通过多种方法确定样品含量，如滴定，分光等，确定样品的贮存条件和有效期等，再建立准确的定量方法。主要杂质还是可能确定的，请研发的检查一下工艺链，一定能发现主要的副产物，归一法时，你所选的波长一般都是样品的吸引波长，但它并不一定是杂质的最佳波长，在杂质量不多的情况下很难进行限量的研究，一般可以用自身对照来进行限量。面积归一化法，就是谱图中所有峰的按照每个峰面积占总面积的百分比就是该峰的含量，是个相对的含量，不是绝对含量。若想准确定量可以采用内标法，外标法这个很简单吧，就