薄膜过滤法.doc

复方氨林巴比妥注射液无菌检查方法学验证 山东圣鲁制药有限公司无菌检查方法学验证一、 验证目的根据中国药典2010年版要求，在建立无菌检查法时，需要进行验证，为保证产品质量，根据药典要求对复方氨林巴比妥注射液无菌检查法进行验证。通过验证，证明所采用的方法适合于该无菌检查.二、 试验所用的主要仪器及设备序号仪器名称生产单位1集菌仪杭州盈天科学仪器有限公司2LRH250生化培养箱上海实验仪器厂有限公司3电热恒温培养箱上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司4净化工作台吴江市绿叶空调净化有限公司三、 验证1、 测试环境条件所有检查在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域隔离系统中进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境已定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证，符合要求。2、 培养基的适用性试验无菌性检查 每批培养基随机取5支，培养14天，应无菌生长结果见下表 培养基培养天数硫乙醇酸盐流体培养基（3035）改良马丁培养基（2328）12345123451234567891011121314结果符合规定。22灵敏度检查221 菌种及来源检验用的培养基菌种以及试剂名称及代号来源批号金黄色葡萄球菌CMCC（B）26 003山东省药检所第3代铜绿假单胞菌CMCC（B）10 104山东省药检所第3代生孢梭菌CMCC（B）64 941山东省药检所第3代枯草芽孢杆菌CMCC（B）63 501山东省药检所第3代白色念珠菌CMCC（F）98 001山东省药检所第3代黑曲霉CMCC（F）98 003山东省药检所第3代硫乙醇酸盐流体培养基青岛骏科生物有限公司100208改良马丁培养基北京三药科技开发公司100308营养琼脂北京三药科技开发公司100312222硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查菌液制备菌种制备接种至培养温度培养时间菌悬液制备菌悬液菌落数金黄色葡萄球菌营养琼脂培养基303524小时培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数小于100cfu的菌悬液40铜绿假单胞菌60枯草芽孢杆菌50生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基50培养基的接种 接种菌液管培养天数金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌空白对照121212121+-2+-3+-结论符合规定223改良马丁培养基灵敏度检查菌液制备菌种名称接种至培养温度培养时间菌悬液制备菌悬液菌落数白色念珠菌改良马丁培养基232836小时培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数小于100cfu的菌悬液30黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养基23285天加3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后吸出孢子悬液至无菌试管内，0.9%无菌化钠溶液制成每ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。20培养基的接种 接种菌液管培养天数白色念珠菌黑曲霉空白对照12121+-2+-3+-4+-5+-结论符合规定224结果 空白对照管无菌生长，加菌的培养基管均生长良好，该培养基的灵敏度检查符合规定。四、方法学验证试验薄膜过滤法 将 1004041 1004042 1004051 三批样品30支，作为供试品，按薄膜法过滤，用冲洗液冲洗三次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中加入配制好的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐培养基改良马丁培养基中，另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照，按规定温度培养。接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢菌、生孢梭菌培养管，在3035培养5天。接种白色念珠菌、黑曲霉培养管，在2328培养5天。方法学验证检测结果培养基培养天数硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌供试品对照供试品对照供试品对照供试品对照1均有少量菌落生长均有少量菌落生长均有少量菌落生长均有少量菌落生长2均有少量菌落生长菌落均生长良好菌落均生长良好菌落均生长良好3菌落均生长良好菌落均生长良好菌落均生长良好菌落均生长良好4菌落均生长良好菌落均生长良好菌落均生长良好菌落均生长良好5菌落均生长良好菌落均生长良好菌落均生长良好菌落均生长良好培养基 培养天数 改良马丁培养基白色念珠菌黑曲霉供试品对照供试品对照1均有少量菌落生成菌落均生长良好2菌落均生长良好菌落均生长良好3菌落均生长良好菌落均生长良好4菌落均生长良好菌落均生长良好5菌落均生长良好菌落均生长良好结论：上述试验表明，该供试品在该检查量和检查条件下无抑菌作用，该品种可在此条件下进行无菌检测。五、供试品无菌检查 取稳定性考察的复方氨林巴比妥样品，批号为： 1004041 1004042 1004051各20支，按中国药典2010