hbv基因与耐药检测 临床版.ppt

产品经理吴勇 HBV分型和耐药突变基因检测 产品经理吴勇 一 慢性乙肝患者抗病毒治疗的临床现状二 基因芯片原理 亚能HBV分型与耐药突变基因检测三 HBV分型与耐药突变基因检测的运用与临床意义 目录 一 乙肝患者抗病毒治疗的临床现状 耐药指南策略 干扰素 普通干扰素 2a 2b 1b 聚乙二醇干扰素 2a 2b 核苷 酸 类药物 拉米夫定 阿德福韦酯 恩替卡韦 替比夫定 药物种类有限 我国CHB治疗现状 2012年EASL APASL乙肝防治指南建议 ETV或TDF作为单药一线用药国内难以普及 强调根据情况个体化选药 患者依从性差 国情差异 干扰素 PegIFN1年病毒学应答率25 HBeAg血清学转换率30 血清HBVDNA阳性率高 耐药问题 核苷 酸 类药物 疗效有限 慢性乙型肝炎联合抗病毒治疗专家共识 中国肝脏病杂志 2011 3 2 38 45 耐药的危害 导致疾病进展 病毒学反弹 生化突破等 肝硬化和肝癌发生率高 使已取得的疗效 如组织学改善 丧失 后续治疗更复杂 困难 增加医疗成本 耐药毒株的传播可能导致公共卫生问题 警惕耐药 HBV耐药 EASLClinicalPracticeGuidelines ManagementofchronichepatitisBvirusinfection JournalofHepatology2012vol 57 167 185 核苷 酸 类药物耐药的预防和治疗 慢性乙型肝炎防治指南 2010年 严格掌握治疗适应症 谨慎选择核苷 酸 类药物 高危患者及时联合治疗 治疗中密切监视 一旦耐药尽早救援治疗 尽量避免单药序贯治疗 生物化学检查 血清ALT和AST 胆红素 白蛋白等 乙肝实验室检查 HBV血清学检查 HBsAg 抗HBs HBeAg等乙肝两对半 HBVDNA 基因型和变异检测 生物化学检查 血清ALT和AST 胆红素 白蛋白等 HBV血清学检查 HBsAg 抗HBs HBeAg等乙肝两对半 HBVDNA 基因型和变异检测 生物化学检查 血清ALT和AST 胆红素 白蛋白等 HBV分型与耐药突变检测方法 PCR产物直接测序法 PCR产物克隆测序法 限制性片段长度多态性技术 RFLP 线性探针反向杂交法 INNO LiPA 基因芯片技术限制性片段质谱多肽性分析焦磷酸测序法深度测序法 二 基因芯片原理 亚能HBV分型与耐药突变基因检测 基因芯片 genechip 是多种特定的寡核苷酸序列为探针 固定于支持物表面上而成的二维DNA阵列 基本原理 利用碱基互补配对原则 通过目的DNA与探针特异结合来判断目的DNA的序列信息 基因芯片原理 乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒 PCR 反向点杂交法 注册号 国食药监械 准 字2011第3401177号专利号 ZL200710073933 3 国内首个全面提示核苷 酸 类药物耐药的快速诊断试剂 PCR扩增 在S基因和P基因重叠区段设计PCR引物 PCR扩增片段既包含耐药突变位点又能进行基因分型 P基因 耐药突变检测编码DNA合成酶 包含逆转录酶rt 抗病毒药物作用靶区 耐药基因突变热点区S基因 分型检测 产品技术原理 亚能HBV产品应用 抗病毒治疗前 治疗中HBV的基因分型和耐药突变基因检测 区分我国常见的HBV B C D基因型涵盖我国4种核苷 酸 抗病毒药物 拉米夫定 阿德福韦酯 替比夫定 恩替卡韦 7个耐药位点的16种突变 rtL180M rtM204V I rtA181V T rtN236T rtM250I L V rtS202G I rtT184I S A F L 本产品检测的样本为血清或血浆 要求待检样本的HBVDNA载量 1 0 103copies mL 样本要求 样本保存 为了避免DNA降解 制备好的血清或血浆 避免长时间室温放置 2 8 保存不超过48小时 18 以下保存不超过半年 避免反复冻融 注意事项 HBV耐药检测产品比较 三 HBV分型与耐药突变基因检测的运用与临床意义 HBV基因型检测临床意义 HBeAg阳性患者中 B基因型对IFN 治疗的应答率高于C基因型 A基因型高于D基因型 与C基因型感染者相比 B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换 较少进展为慢性肝炎 肝硬化和原发性肝细胞癌 预测干扰素应答和疾病进展情况 慢性乙型肝炎防治指南 2010年 HBV耐药检测临床意义 抗病毒治疗前 预存耐药检测协助临床选择合理抗病毒药物 实现个体化抗病毒治疗 提高抗病毒疗效 降低耐药发生率 抗病毒治疗中 全程耐药监测全程监测耐药 利于早期挽救治疗 为调整治疗方案提供理论支持 选择合理抗病毒药物 为调整治疗方案提供理论依据 抗病毒治疗前 抗病毒治疗期间 抗病毒治疗效果不佳时 HBV基因分型 耐药检测 何时选择HBV基因分型 耐药检测 预存耐药检测 实现治疗个体化 LAM ADV ETV预存耐药率分别为7 81 7 81 1 56 预存耐药 慢性乙型肝炎患者在核苷 酸 类似物治疗前即存在耐药位点突变 即预存耐药变异 盖洪鹏 孙伟翔 袁德胜 等 预存耐药对核苷 酸 类似物抗病毒治疗应答和耐药的影响 临床肝胆病杂志 2012 28 11 841 844 预存耐药检测显著提高CHB患者HBVDNA转阴率 HBeAg 抗HBe转换率 盖洪鹏 孙伟翔 袁德胜 等 预存耐药对核苷 酸 类似物抗病毒治疗应答和耐药的影响 临床肝胆病杂志 2012 28 11 841 844 48周HBeAg 抗 HBe转换率 P 0 05 48周HBVDNA转阴率 P 0 05 预存耐药检测 显著提高临床疗效 抗病毒治疗中的监测 线路图 治疗第12周评估是否存在 原发性无应答 病毒学应答 HBVDNA较基线下降 10IU或 50拷贝 ml 原发性治疗失败 HBVDNA较基线下降 10IU或 50拷贝 ml 患者依从性良好 加用更强的抗病药物 患者依从性不佳 督促劝说坚持治疗 治疗24周评估疗效的早期预测因子 完全病毒学应答 PCR检测HBVDNA阴性 部分病毒学应答 60IU ml HBVDNA 2000IU ml 不充分病毒学应答 HBVDNA 2000IU ml 以同一药物继续治疗 每6个月监测一次 基因屏障低的药物 加用基因变异特点不同的第二种药物 基因屏障高的药物 每3个月监测一次并在48周后继续监测 抗病毒能力相对低的药物 每3个月监测一次并在48周后继续监测 加用更强的抗病毒药物 每3个月监测一次 若第48周获得完全病毒学应答 则继续治疗 若第48周未获得病毒学应答 则加用一种更强且无交叉耐药的药物 Keeffe etal ClinicalGastroenterologyandHepatology 2007 5 890 897 耐药基因位点变异与临床挽救治疗方案 抗病毒治疗耐药检测节点 抗病毒治疗前 部分病毒学应答 不充分病毒学应答者 治疗24周 治疗12周 评估是否原发无应答 疗效早期预测 后每12周监测一次 抗病毒治疗过程中效果不佳时 需及时进行HBV耐药突变检测 调整用药 预存耐药 国内首个全面提示核苷 酸 类药物耐药