生物技术药物的药代动力学特点及检测.ppt

生物技术药物的药代动力学特点及检测 广州蓝韵医药研究有限公司专注于中药新药临床前研究 保健品研发 CumulativeRevenuesofSelectedBiotechnologyCompanies Amgen Genentech Chiron GenzymeandBiogen SelectedBlockbusterProteinPharmaceuticals 生物技术药物 重组蛋白多肽类单克隆抗体及其片断寡核苷酸疫苗制剂基因治疗药物 核酸制剂 干细胞药物 蛋白肽类药物药代动力学 吸收分布代谢与排泄 蛋白肽类药物吸收 小分子多肽 被动吸收大分子多肽 水溶性 细胞间隙脂溶性 膜脂扩散胞饮淋巴系统吸收 po干扰素 高度脂溶性 影响蛋白肽类药物吸收因素药物稳定性 细胞渗透性 MW1000 鼻粘膜 肠粘膜 CorrelationbetweenMWandthecumulativerecoveryofscrINFalpha 2a cytochromec inulinand5 fluoro 2 deoxyuridine FUDR intheefferentlymphinsheep 蛋白肽类药物吸收 非肠道给药 ParenteralRoute IV M SC IP 鼻腔 肺 直肠 回肠 阴道 颊 口服鼻腔给药 Intranasaladministration Inhaleadministration 口服给药 Oraladministration Peroraladministration经皮给药 Transdermaladministration 其他给药途径 结肠 回肠 子宫 阴道 颊 眼睛等 IM和SC给药生物利用度 PharmacokineticsofIMADI SSPEG20 000mwinhumanswithhepatocellularcarcinoma Intranasaladministration 易给药 鼻粘膜上皮细胞有大量的微绒毛和广泛分布的血管淋巴管 无肝首过效应 伪首过效应 Pseudo first passeffect 多肽 蛋白酶 主要是氨肽酶 calcitonin oxytoxin LH RH growthhormone interferone vaccines 分子量upto2KDa pharmacologicallyacitive 血脑屏障 IGF 1 Inhalationadministration Easeofadministrationlargesurfacearea 75m2 HighvascularityBypassoffirst passmetabolismInsulinforTypeIIdiabetesDornase alphaforcycticfibrosis ProteasesinthelungLocaleffectsEffectofmolecularweight PlasmabioavailabilityoftherapeuticpeptidesversusMWafterpulmonaryadministration Oraladministration Generallynottherapeuticallyactive Factorsforlackofsystemicbioavailability highgastrointestinalenzymeactivitygastrointestinalmucosaasanabsorptionbarrier cytochromeP4503Aandp glycoproteinactivityAvailableoralforms cyclosporine 30 anddesmopressin 0 16 Absorptionenhancers encapsulationinmicroparticlesornanoparticles 蛋白肽类药物的分布 分布容积小 0 04 0 2L kgvs 1 20L kg 小分子 分子量大 水溶性大 蛋白结合率高 中央室 Vc 3 8L plasmavolume和平衡室 Vss 14 20L 2x中央室 蛋白结合 reduceclearance Site specificandtarget orientedreceptormediateduptake 蛋白肽类药物分布 血脑屏障 血脑屏障 缺乏特异转运系统 存在蛋白分解酶 外排作用泵提高血脑屏障对蛋白多肽类药物摄取的方法 脂质体鼻腔给药 脊髓管灌注或泵连续输注 ZiconotidecerebrospinalCSFconcentrationasafunctionoftime CSFZiconotidePharmacokineticResultsbyDoseGroup 小分子药物代谢 Drugbiotransformationisdividedintotwotypesofreactions phaseI hydrolysis oxidation andreduction phaseIIreactions conjugation uridinediphosphoglucuronosyltransferase UGT N acetyltransferase NAT glutathioneS transferase GST andsulfotransferase ST 小分子药物代谢 蛋白肽类药物代谢与排泄 消除 elimination 蛋白水解酶 溶酶体 蛋白酶 组织蛋白酶 氨肽酶 二肽酶 throughoutbodyProteosesPeptisases受体介导清除 receptor mediatedendocytosis t PA liver lowdensitylipoproteinreceptor mannose asialogglycoproteinreceptor insulin蛋白水解酶稳定 环孢菌素 P450 蛋白肽类药物代谢与排泄 肾脏肾小球 30Kd eg IFN IL 2 肾小管近曲小管 proximaltubule endocyticvesiclehydrolysisintopeptidefragments IL 2 IL 11 growthhormone insulinLuminalmembranes hydrolysis smalllinearpeptides ANGI ANGII bradykinin glucagon LH RHEndocytosedanddegradedinlysozymes largerandmorecomplexproteinspeptidesPeritubularcapillaries growthhormone肝脏 insulin glucagon epidermalgrowthfactor antibodies andt PA胆道 血液 endo oligopeptidase 肠道 蛋白肽类药物特点及其应用 明显的种族特异性 实验动物的选择 免疫原性 ELISA 反复给药产生抗被测试药物的抗体 体内有大量的蛋白肽类物质包括结合蛋白 生物样品的前处理 LC MS 被测试药物尤其细胞因子给药量极小 ng pg ml 检测灵敏度 存在被测试药物的内源性物质 本底效应 同位素法 suppressionviaphysiologicalregulationorfeedback eg infusingglucosetosuppressendogenousinsulin生物活性不仅取决于药物的一级结构 而且与其二级 三级结构有关 生物检定法 生物PD PK模型 蛋白肽类药物样品检测方法 免疫测定法 Immunoassays 酶联免疫吸附测定法 Enzyme linkedimmunosobantassay ELISA 放射免疫测定法 Radioimmunoassay RIA 免疫放射定量法 IRMA 同位素标记示踪法 Isotopelabeltraceassay 生物检定法 Bioassays 高效液相 HPLC 液质联用 LC MS 法 comparablesensitivityhigherselectivity eg plasmabradykininpeptideantagonist 毛细血管电泳 CE 高效毛细血管电泳 HPCE 和毛细血管电泳色普 CEC RealtimePCR proteinchips ELISA法 一抗 种族特异性 抗原 待测药物 二抗 酶偶联 显色酶底物酶标仪 ELISA法 优点高度的灵敏度 ng pg ml 较高的特异性 易于操作 快速 不使用同位素 无辐射源 适用于批处理 试剂使用寿命长 目前最常用的检测方法 缺点待测蛋白多肽的免疫活性而非生物活性 不能区别具有抗原决定族的代谢物片断 不能同时测定代谢物片断 不同来源抗体结合性不一 受一些因素的干扰 ELISA法的干扰因素 具有抗原决定族的代谢物片断 被测试药物的内源性物质 基质效应 被测试药物的可溶性受体结合蛋白 低亲活力结合蛋白高亲活力结合蛋白反复给药产生抗被测试药物的抗体 中和性或非中和性长期给药 生物等量性实验 ImmunogenicityofnativeADIandADI SSPEGinmiceandrabbits SC生长激素 0 4IU kg 后食蟹猴 n 7 8 组 的血清生长激素浓度 普通ELISA 高灵敏度ELISA additional增色放大系统 和化学发光ELISA法 luminol 过氧化氢底物 灵敏度和线性范围比较 From汤仲明 2002 放射免疫测定法和免疫放射定量法 抗原 标记抗原 抗体灵敏度高 尤其免疫放射定量法需同位素常用于激素浓度测定 同位素标记示踪法 在目标蛋白多肽分子上标记同位素 从而鉴别目标蛋白多肽与内源性蛋白多肽该法需将目标蛋白多肽进行同位素标记 标记方法有外标法 化学联接法 和内标法 掺入法 2种 外标法 将标记物如125I通过化学方法偶联至完整蛋白中如蛋白中酪氨酸或赖氨酸等 常用的化学方法有氯胺T或Iodogen法内标法 可用即将标记以3H 14C或35S等同位素的氨基酸加入生长细胞或合成体系中 从而获得含同位素的蛋白多肽分子 但因其操作复杂而少用 标记后蛋白多肽表征 比放射性放射性纯度标记的蛋白多肽的生物活性 同位素标记示踪法 优点灵敏度高简便直观检测迅速尤其适用于蛋白肽类药物的组织分布 缺点同位素标记一般不能进行人体药物动力学研究 可能引起药物的生物活性及代谢行为发生变化 由于蛋白多肽进入体内会被降解代谢 或标记氨基酸的生物再利用 或与其它蛋白质结合 总的放射性不能代表药物动力学过程 同位素标记示踪法与其他分析手段联合应用 SDS PAGE三氯醋酸 TCA 沉淀法HPLC法 生物检定法 利用被测蛋白多肽类药物某种特异生物反应 通过剂量 浓度 效应曲线对目标蛋白多肽进行定量测定的一种分析方法 分为离体分析法和在体分析法 离体分析法通常采用细胞体外培养技术 以细胞的增殖 分化或细胞毒性为基础 以细胞数目的增减等为量效指标 如水蛭素 hirudin 凝血酶时间测定 在体分析法则利用蛋白多肽类药物在整体动物中引起的特异生物学反应 如胰岛素降底小鼠血糖 PharmacokineticanalysesofADI SSPEGandADI SSPEGmeasuredbyenzymeandELISAassays 生物检定法缺点 缺乏特异性 不能定量其代谢产物 不能区分内源性和外源性细胞因子 灵敏度差 为启动生物过程细胞因子的浓度必须在阈水平以上 低于阈水平的样品将不能被定量 从而降低了方法的灵敏度 耗时 为完成分析需时间较长 往往达数日或数周 重复性差 不同实验室的结果有很大差异性 致不同单位之间的比较难以