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第一章 结缔组织染色结缔组织广泛分布于人体和动物体内，其结构特点是细胞分散，有大量的细胞间质纤维和基质，而化学成分是含有大量的蛋白质和多糖。结缔组织一般分为固有结缔组织（其中包括疏松、致密和网状结缔组织等）、软骨组织和骨组织。第一节 结缔组织多色染色法一、Mallory三色染色法1. 试剂配制（1）重铬酸钾液 重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml（2）苯胺蓝桔黄G液 苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml（3）酸性复红液 酸性复红0.5g，蒸馏水100ml2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（2）重铬酸钾液10min。（3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。（4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。（5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。（6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.结果胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。4.注意事项（1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。（2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。（4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。二、Masson三色染色法1.试剂配制（1）Masson复合染色液 酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。（2）亮绿染色液 高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。2.染色步骤中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（1）Masson复合染色液5min。（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。（3）5%磷钨酸5-10min。（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.结果胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。4.注意事项（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。三、显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993年） 1.试剂配制（1）高锰酸钾硫酸液 0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。（2）维多利亚蓝染色液 维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。（3）丽春红染色S染色液 0.5%丽春红S水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液85ml。（4）Gomori氨性银改良液 取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（2）高锰酸钾硫酸液氧化3min后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白2min。（3）5%硫酸铁铵1min。（4）Gomori氨性银改良液染1min。（5）蒸馏水洗2次，用15%甲醛液还原1min。（6）蒸馏水洗2次，0.2%氯化金30s，蒸馏水洗1次。（7）70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h。（8）95%乙醇分化1min左右。（9）浸入蒸馏水中1min后，用丽春红S染色液染色2min。（10）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.结果胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。4.注意事项氨性银液滴染时，要用干净吸管，防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒，应将蒸馏水冲洗切片上的银液，这样就不会使银液表面挥发的银颗粒而沉积在组织上。第二节 胶 原 纤 维 一、胶原纤维的分布和组成成分 胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、键、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁、子宫和基底膜等，胶麻纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。在弱酸或沸水中可慢慢溶化成胶水，称白明胶。胶原纤维和网状纤维的基本构造相似，都以胶原单位(蛋白质为主的大分子)为基本单位。胶原单位接连和融合形成网状纤维;它是粗约1m左右的分支状纤维，形成全身组织的支架，在HE染色中看不清楚。但其外面裹着的一层类蛋白，凭借镀银法可以清楚地显示出来，故又称为嗜银纤维。 胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。其他如平滑肌细胞等也能产生。胶原单位的形成开始于细胞的粗面内质网，合成比构成胶原单位的肽链更长的前肽链，经高尔基体分泌出细胞，在细胞外液的内切肽酶作用下，切去前肽链的附加肽段而形成胶原单位；再经细胞外液的赖氨酰氧化酶作用使两条肽链通过醛醇或醛胺缩合构成共价交联。这样胶原单位分子之间就形成了稳定的联系，形成胶原微纤维，然后再聚合而成胶原纤维。 二、胶原纤维染色的应用 胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源：常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。还能使用于其他的情况下，如观察动脉硬化的心脏，在HE切片中，心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶原纤维染色可将胶原组织和心肌组织明显地区分开来。早期肝硬化用胶原纤维染色，也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。由干胶原纤维是由成纤维细胞产生的一种纤维蛋白成分，常常被酸性染料染色。 l. Van Gieson苦味酸酸性复红法(1889年) 试剂配制 (l) Van Gieson液 l%酸性品红水溶液10ml，苦味酸饱和水溶液(约l.22%)90ml。 (2)Weigert铁苏木素溶液 甲液：苏木素lg,95%或无水乙醇100ml；乙液：29%三氯化铁水溶液4ml，蒸馏水95ml，盐酸l ml。 临用时取甲液和乙液等量混合即可。铁苏木素不能像明矾苏木素一样配制后放置，因铁与染色剂的色素可引起化合而形成不溶性沉淀。所以，以铁作为媒染液时，必须与染液分别配制、分别应用或临时混合应用。 染色方法 (1)组织固定于10%甲醛液，常规脱水包埋。 (2)组织切片脱蜡至水。 (3)用Weigert苏木素液染5l0min。 (4)自来水冲洗数分钟。 (5)根据染色的深浅可用0.5%盐酸乙醇分化。 (6)自来水洗至变蓝；用蒸馏水洗。 (7)用Van Gieson液染15min。 (8)倾去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。 (9)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞黄色，胞核呈黑色。 注意事项 (1)目前以苦味酸、复红的Van Gieson染液直接染此一种溶液即可。 (2)Weigert铁苏木素分甲、乙两液，应于临用前将两液等量混合使用，而不宜预先混合，否则易氧化沉淀而逐渐失其染色能力。 (3) Van Gieson染色液分别在临用时混合，防止放置时间长，则酸性品红不易着色。 2. Siriured染色法 这种方法可使胶原纤维长期保存，是不易褪色的一种好方法。 试剂配制 (l)Siriusred 饱和苦味酸液 0.5%Siriured l0ml，苦味酸饱和液90ml。 (2)天青石蓝液 天青石蓝B125g，铁明矾1.25g，蒸馏水250m1。 溶解煮沸，待冷过滤后，加入甘油30m1，然后再加入浓盐酸5ml。 染色方法 (1)组织固定于10%甲醛液，常规脱水包埋。 (2)切片脱蜡至水。 (3)入天青石蓝液染510min， (4)蒸馏水洗多次。 (5)Siriured饱和苦味酸液染1530min。 (6)无水乙醇直接分化与脱水。 (7)二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 胶原纤维呈鲜红色，细胞核绿色，其他为黄色。 3. Lillie改良Van Gieson法(1965年) 试剂配制 A. 用1%醋酸配成0.1%快绿FCF 液，或为得到较蓝的绿色用3%毛绿S(Wool greenS )。 B. 且0.2%酸性复红，0.2%紫胺(Violamine)或用0.1%0.5%丽春红S(ponceau S) 溶于饱和的苦味酸水溶液。 染色方法 (1)按常规将切片脱蜡至水。 (2)用Harris明矾苏木素液染3min。 (3)自来水洗，盐酸乙醇分化数秒钟。 (4)自来水洗至显蓝，蒸馏水洗。 (5)在A溶液中染4min。 (6)在1%醋酸中洗2次。 (7)在B溶液中染l0l5min。 (8)在1%醋酸中洗2min。 (9)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 结缔组织红色，肌肉、胞质灰绿色，红细胞绿色，核蓝黑色。 4. Clark改良Van Gieson台盼蓝法(1971年) 用于胶原纤维、包括非常细的纤维，以及肌肉角化上皮的染色。 固定 甲醛固定液。 试剂配制 (l)A液 0.3g萘酚黄S（naphthol yellow S）溶窜犯100mI蒸馏水。 (2)B液 0.2g酸性复红溶于100ml蒸馏水中。 (3)C液 0.2g台盼蓝溶于100ml 蒸馏水中。 染色液由40份A溶液，2.5份B溶液和2份C溶液组成。每40分A溶液加入，0.4ml浓盐酸。 染色方法 (1)石蜡切片，脱蜡至水 (2)在Weigert铁苏木素中5ml。 (3)自来水洗。 (4)在染色液中染l0min。 (5)在水中迅速洗一下即经过50%、70%与95%乙醇，无水乙醇两次。 (6)二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 核-蓝黑色；胞质-黄色，胶原纤维-粗纤维红色，细纤维蓝色。 说明 本法中的Weigert铁苏素液染色，可改用棓花青-铬矾溶液中染16 h。 5 . Biebric猩红染色法 Lillie，1965年 显示目的 胶原纤维、网状纤维、肌肉、胞质。 固定 甲醛液，Orth液。 试剂配制 (l)A液 Weigert铁苏木精，见苦味酸酸性复红法。 (2)B液 0.2gBiebrich猩红溶于100ml1%醋酸。 (3)C液 0.1g苯胺蓝溶示100ml饱和苦味酸水溶液。 染色方法 (1)常规脱蜡至水。 (2)在A溶液中染5min。 (3)自来水冲洗。 (4)在B染液中染4min。 (5)自来水洗。 (6)在C染液中染5min。 (7)直接移入1%醋酸中3min。 (8)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 结缔组织蓝色，肾小球基质蓝色，网状纤维蓝色，红细胞橙红至猩红色，肌肉粉红色，胞质粉红色至灰色，核黑蓝色，粘液浅蓝色。 6. 苦味酸氨基黑染色法 L i1lie，1965年 显示目的 胶原纤维、网状纤维、基膜、肾小球基质。 固定 任何固定剂均可。 试剂配制 (l)A液 煌紫素R(Brilliant purpurin R)0.6g；偶氮复红G(azo-fuchsin G)0.4g；冰醋酸1ml，蒸馏水加至100m1，上述两种染料先各自用1%醋酸配成1%溶液，以64比例混合后再用。 (2)B液 氨基黑10B，5100mg；苦味酸饱和水溶液100m1。同样浓度的苯胺蓝或甲基蓝均可用来代替氨基黑(又称蔡酚蓝黑)，粘液可得到较好的显示。 染色方法 (1)切片常规脱蜡至水。 (2)在Weigert铁苏素中染6min。 (3)自来水洗。 (4)在A染液中染5min。 (5)流水中洗。 (6)在B染液中染15min。 (7)在1%醋酸中分色2min。 (8)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 胶原纤维、网状纤维和基膜深绿色；粘液深绿色，上皮细胞胞质棕色，肌肉浅绿色，红细胞红色。 7. Petersen 酸性茜蓝改良法 显示目的 胶原与网状组织、骨铬肌、心肌横纹、心肌间板。 固定 Zenker液，Helly液、Bouin液或甲醛液。 试剂配制 (1)A液 即缓冲的酸性茜蓝溶液。酸性茜蓝2B，0.25g；硫酸铝5g；蒸馏水50m1。煮沸5min。冷却，过滤，再补足到原来的体积。然后加20ml的Sorensen柠檬酸盐溶液(柠檬酸晶体21g，lN NaOH，200m1。加蒸馏水至1000ml)和30ml 0.lN盐酸缓冲到pH为2.25。 (2)B液 即苯胺蓝橘黄G溶液。苯胺蓝0.5g; 橘黄G，2g；蒸馏水100ml，冰醋酸8ml，煮沸，冷却，过滤。 染色方法 (1)常规石蜡切片，脱蜡至水。 (2)在A液中染3min。 (3)在蒸馏水中快速洗2次。 (4)在5%磷钨酸液中分色并媒染23min。 (5)蒸馏水洗。 (6)在未经稀释的B液中染23min。如染色结果太深，可用1、2或3倍体积的蒸馏水稀释。 (7)蒸馏水中略洗。 (8)先用95%乙醇后用无水乙醇脱水。 (9)二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 胶原与网状结缔组织蓝色，染色质砖红色，肌组织根据所用不同品种的固定剂染色从深品红色至亮橙色，红细胞橙红色，粘液淡蓝色，神经节细胞淡品红色，腺细饱根据其组成从浅蓝色至品红色。 8. 显示胶原纤维、细胞和肌肉的新染法 固定中性甲醛液，石蜡切片。 试剂配制 (1)Ponceaus染色液 0.5%Pohceaus(丽春红S，上海试剂三厂)水溶液l015ml，苦味酸饱和水溶液8590ml。 (2)Victoria blueB 染色液 Victoria blueB(维多利亚蓝，B，上海试剂三厂) 0.5 g， 70%乙醇100m1。 染色方法 (1)组织切片脱蜡至水。 (2)70%乙醇稍洗后，入Victoria blueB染色液中l5min。 (3)95%乙醇中分化数秒钟。 (4)用蒸馏水洗2次。 (5)用Ponceaus染色液滴染2min。 (6)直接用无水乙醇分化与脱水。 (7)二甲苯透明，中性树胶封固。 结果胶原纤维呈鲜红色，细胞核和血细胞呈绿色，肌肉呈黄色。第三节 网状纤维网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。它由网状细胞所产生。网状细胞是一种星状多突的细胞，核大，着色较浅，核仁明显，胞质较丰富，胞突彼此连接形成细胞网架。网状纤维纤细而有分支，穿行于细胞体和突之间，共同构成网状支架。这种纤维用HE染色一般不易辨识。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，如又称为嗜银纤维。网状纤维纤细，直径约0.2-1um，没有弹性，而有韧性，能抵抗胃液的消化和弱酸的腐蚀。一、网状纤维染色的应用1.用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源（1）显示和区分癌和肉瘤（2）显示和区分血管内皮瘤与血管外皮瘤（3）用以鉴别淋巴细胞肉瘤与网状细胞肉瘤（4）区分骨尤文氏肉瘤与骨网状细胞肉瘤（5）显示与鉴别骨异质增生与骨化性纤维瘤（6）区分软骨粘液纤维瘤与粘液肉瘤（7）鉴别脑膜瘤与星形细胞瘤2.用于某些肿瘤的诊断（1）平滑肌肉瘤（2）纤维肉瘤（3）滑膜肉瘤（4）恶性神经鞘瘤3.用于观察和研究癌组织的发生、发展及其恶性程度。4.显示与观察基底膜的变化。5.用于识别坏死组织的结构及类型（1）凝固性坏死（2）肺结核干酪样坏死6.用于显示和研究肝组织病变。二、网状纤维染色的原理1. 氧化2. 感应3. 浸银4. 还原三、网状纤维染色方法1.Wider染色法（1）固定 甲醛液或其他固定液（2）试剂配制 氧化银溶液：40%氢氧化钠 1滴半10%硝酸银 2.5ml取40%氢氧化钠滴入10%硝酸银溶液中立即产生棕褐色沉淀，逐次滴入28%氨水恰好溶化沉淀（一般3滴为宜），用蒸馏水补足20ml。（3）染色次序1）组织切片脱蜡至水。2）10%磷钼酸，2-5min。3）蒸馏水冲洗，5min。4）1%硝酸铀，5s。5）蒸馏水冲洗，10s。6）氧化银溶液，5-10min。7）95%酒精速洗，1-2s。8）还原液还原，1-2s。9）蒸馏水冲洗，2min。10）0.2%氯化金调色，2-20s。11）蒸馏水冲洗，5min。12）5%次亚硫酸钠，2min。13）蒸馏水冲洗，2min。14）核固红染细胞核，5-10min。15）水稍洗。16）常规无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。（4）染色结果网状纤维呈黑色、细胞核呈红色。第四节 弹 力 纤 维一、弹力纤维的形态特点和组成成分 弹力纤维由糖蛋白构成，富含亲水性的极性氨基酸。弹性蛋白提供弹力纤维的弹性，它是一种不溶性蛋白质，当用弱碱处理纤维结缔组织时，其仍然存在。三分之一为甘氨酸，11% 为脯氨酸。与胶原纤维不同处为其氨基酸组成中约95%属于非极性疏水氨基酸，锁链赖氨酸(Desmosine)和异锁链赖氨素(lsodesmosine)是弹性蛋白所特有，它们起着共价交联的作用。 近年来，电镜下看到组织培养的平滑肌细胞可以合成弹力纤维的两种成分。在没有平滑肌细胞存在时，可能由纤维母细胞形成。弹力纤维广泛分布于身体各处，特别是在皮肤、血管、壁、韧带、气管、支气管、肺泡、耳廓和腺体的导管处等最为丰富。弹力纤维由两种成分组成，即集合束的弹力微纤维(由糖蛋白形成)和均质状的弹力蛋白。 弹力纤维在常规染色中难以区别于其他纤维，只有用特殊染色方法，才能清晰地显示出来。近来学者研究认为，弹力纤维系统是由弹力纤维、前弹力纤维和耐酸纤维等三种纤维构成，这三种纤维的分布、走行和组织化学均不相同。耐酸纤维用一般的弹力纤维染色法其着色很淡，前弹力纤维着色也不够深，但如经强氧化后醛品红或间苯二酚品红法则可把弹力纤维系统中的三种纤维同时显示出来。 二、弹力纤维染色的应用 (一)显示皮肤组织中弹刀纤维的变化 在皮肤组织病变中，特别是真皮内的弹力纤维， 时常发生改变，出现增生、卷曲、变性、崩解等，做弹力纤维形成聚集成堆的束状、团块状及不规则状。见于以下病变弹力纤维病；弹力纤维增多症；弹力过度性皮肤；皮肤疏松；皮肤环状肉芽肿；肢端角化的弹力纤维变性；硬皮病。(二)显示与判定心血管疾病 弹力纤维是心脏和血管的主要成公之一。 (1)显示及鉴别心内膜弹力纤维增生症与心内膜心肌纤维化。这两种病变时心内膜中的弹力纤维和胶原纤维会出现异常增多，在HE-染色中两者的病理变化甚为相似。因此，需要特殊染色加以显示与鉴别。 (2)显示动脉粥样硬化时硬化斑块底部的内弹力板崩解，断裂乃至消失情况。 (3)显示与观察梅毒性主动脉炎时动脉中层弹力纤维发生灶性破坏的程度。 (4)显示高血压时小动脉弹力纤维显著增生以及形成多层的病变特点。(5)用于无脉症，显示在大动脉血管申层弹力纤维密集排 列，弹力层增厚。(6)显示老年人动脉变性：动脉的弹力板变性、增厚、断裂、崩解等现象。 （三）视察某些病变中的弹刀纤维是否增生与破坏 如慢性支气管炎、肺气肿、原发性或继发性肾固缩等，均可导致弹力纤维纵行。散乱、断裂、破坏和增生，形成碎片或颗粒。(四)显示与鉴别肿瘤组织 (1)弹力纤维瘤 在弹力纤维瘤体的纤维组织中，有许多球状或颗粒状变化的弹力纤维。在HE染色中容易忽略，但用弹力纤维染色，能清晰见到瘤体内丰富的弹力纤维球。 (2)乳腺癌 见于导管和血管壁周围，这种现象多合并在硬癌和浸润性小叶癌上。如弹力纤维染色法证明在导管癌上，伴随出现弹力纤维增生，可证明是早期浸润癌。 三、各种染色方法 l、Verhoeff铁苏木素染色法 媒染剂三氯化铁和碘配成的苏木素染色液，即Verhoeff铁碘苏木素对弹力纤维有染色力，但没有选择性，它既可染弹力纤维，也可染细胞核和胶原纤维等。通过“染料的分散度和组织的结构密度”以达到分辨不同组织的目的。如弹力纤维和细胞核的结构密度都是比较致密的，铁苏木素染液的粒子比较容易地分散到狭孔的弹力纤维或细胞核的间隙中，苏木素粒子在狭孔的弹力纤维中比较密集，所以染色也比较深；而分散到宽孔的胶原纤维间隙中较稀疏，所似染色也比较浅。 固定 105甲醛溶液或其他固定液。 试剂配制 铁碘苏木素液：先将苏本素1g，无水乙醇20ml，进行加温溶解后加入10%三氯化铁水溶液8m1，最后再加入Lugol碘液8ml即可（Lugol液：碘化钾2g，碘结晶lg，蒸馏水100ml）。染色方法 (1)石蜡切片，脱蜡至水。 (2)铁碘苏木素液染1530min，至颜色呈深黑色。自来水洗。 (3)2%三氯化铁水溶液分化1020s，至弹力纤维清晰为止。如果分化过度，可再返回第2步重染铁碘苏木素液。 (4)充分水洗。 (5)用95%乙醇去碘2Smin，使黑色纤维更为清晰。 (6)水洗，VG复染5min。 (7)95%乙醇急速分化。 (8)无水乙醇脱水，二甲苯透明，申性树胶封固。 结果弹力纤维黑色或黑蓝色，胞核黑色，校原纤维呈红色。 2、Weigert间苯二酚复红染色法 三苯甲烷系碱性染料与雷锁辛和三氯化铁组成一种带有弱正电荷的染料，与结构致密的、富于内表面的弹性纤维通过非极性吸着而完成染色。非极性吸着，是染料不具有强电荷时和组织成分间的结合。就是说雷锁辛复红液对弹力纤维的染色。间苯二酚复红液实际上是由碱性品红的铁间苯二酚色淀（Lake)形成的一种复合物，这种复合物与弹力纤维结合，并使弹力纤维着色。其结合的原理不清楚，可能是弹力纤维某些部分与间苯二酚的基团形成氢键。 固定 10%甲醛液及其他固定液。 试剂配制 间苯二酚复红液：碱佳品红1g，间苯二酚2g，蒸馏水200m1，30%三氯化铁1.25ml，浓盐酸2ml。 取一个300ml烧杯，放入碱性品红、间苯二酚和蒸馏水，用玻璃棒搅拌，加热煮沸。再慢慢加入30%三氯化铁液，在搅拌下继续煮沸35min。冷却后过滤，倾去滤液。将滤纸和沉淀物一同放入烧杯内，置于干燥箱内烘干。取出后加入95%乙醇100ml，在水锅内加热，并不断搅拌至沉淀物完全溶解，取出滤纸，冷却后过滤。补足因蒸发失去的乙醇至100ml。最后加浓盐酸2ml，混合后即可使用。 染色方法 (1)石蜡切片，脱蜡至水。 (2)在95%乙醇液中浸2min。 (3)间苯二酚复红液染12h。 (4)用95%乙醇液洗去多余染液。如果染色较深可用0.2%盐酸乙醇分化。 (5)自来水冲洗2min。 (6)用VanGieson液复染lmin。(7)95%乙醇急速分化。 (8)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维深蓝黑色，胶原纤维红色，背景黄色。 3、Hart改良间苯二酚复红染色法 此法由Weigert法经过改良后发展而来。特点是将Weigert染液用1%盐酸乙醇溶液配制成稀释溶液，进行过夜染色，可显示出较细的弹力纤维。 固定 甲醛固定液和其他固定液。 试剂配制 (1)酸性高锰酸钾水溶液 0.5%高锰钾水溶液50m1，3%硫酸水溶液2.5m1。此液分别配制，临用时按比例混合使用。 (2)Weigert稀释液 Weigert原液l0ml，1%盐酸乙醇溶液90ml。此液可保留一定时间。 染色方法 (1)石蜡切片，脱蜡至水。 (2)酸性高锰酸钾水溶液氧化5min。 (3)自来水洗23min。 (4)用1%草酸水溶液漂白至无色。 (5)充分水洗2min。 (6)用70%乙醇液略洗。 (7)直接用Weigert稀释液浸染过夜。 (8)用1%盐酸乙醇分化数秒钟或直接入95%乙醇液中稍分化。 (9)充分水洗5l0min。 (l0)用Van Gieson液、1%中性红或HE进行对比染色。 (11)95财乙醇及无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维呈蓝黑色，其他组织呈复染的颜色。 4、Gomori醛复红染色法 醛复红染色液是Gomori在Schiff试剂的使用和实验期间偶然发现的。醛复红是碱性品红加入三聚乙醛和盐酸配制而成，作为一种酸性催化剂，可使三聚乙醛逐渐解聚产生乙醛。乙醛有较高的活性，释出后与碱性品红染料外露的氨基起反应而产生偶氮甲碱，这时颜色转变为深紫色，是谓成熟，称为醛复红染液。这秧成熟的醛复红对特殊的蛋白质及含硫酸根的粘多糖具有很强的亲合力，和弹力纤维结合很紧。另外，对肥大细胞颗粒、脂褐素、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、胃主细胞、胰岛的细胞和脑垂体的嗜碱细胞，也能很好着色。固定 各种固定液，但以甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳。 试剂配制 (1)醛复红染液 碱性复红0.5g，浓盐酸1m1，70%乙醇100ml，三聚乙醛1m1。将碱性复红溶于70%乙醇，然后加入浓盐酸和三聚乙醛，轻轻摇动使混合均匀，于室温下静置12日，待变为紫色即为成熟。过滤于小口砂塞瓶，置冰箱内保存备用。 (2)橘黄G染色液 橘黄G2g，蒸馏水100m1，磷钨酸5g。 染色方法 (1)切片脱蜡至水。 (2)用Lugol碘液处理5min。(3)稍水洗。 (4)5%硫代硫酸钠液处理5min。 (5)流水冲洗5min。 (6)70%乙醇稍洗。 (7)入醛复红液l0min。 (8)70%乙醇浸洗2次，每次约30s，至切片不再脱色为止。 (9)稍水洗。 (10) 橘黄G液滴染约1s。 (11)蒸馏水洗12min。 (12)95%乙醇无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维呈深紫色，其他为复染色。 说明还可用淡绿橘黄G液、Masson三色液、Van Gieson液等复染，但不宜过深。 5、Pinkus酸性地衣红-姬姆萨染色法 固定 10%甲醛液、Helly液或Zenker液均可。 试剂配制 (1)地衣红染色液 地衣红1g，70%乙醇100m1，浓盐酸0.6m1。地衣红溶于乙醇内然后再加入浓盐酸。 (2)姬姆萨液 取姬姆萨原液5滴，加蒸馏水100ml。 (3)伊红乙醇液 伊红Y59，95%乙醇100m1，混合后不停搅拌。溶解后即可使用。 染色方法 (1)切片脱蜡至水。 (2)经70%乙醇漂洗。 (3)地衣红液染3060min。 (4)95%乙醇分化，洗去多余染液。 (5)用1%盐酸乙醇处理25min，直至背景无色为止。需镜下控制。 (6)流水冲洗5l0min。 (7)姬姆萨稀释液浸染2h过夜。 (8)用95%乙醇分化，伊红乙醇液(95%乙醇中滴数滴)中染色，直到大量的蓝色从结缔组织中脱掉为止。可在镜下控制。 (9)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果) 细胞核深蓝色，弹力纤维深棕到黑色，胶原纤维粉红到浅蓝色，黑色素呈绿色到棕色，嗜伊红颗粒呈红色至紫色，细胞核呈深蓝色。 6、Uana地衣红染色法 固定 甲醛液或其他固定液。 试剂配制 Uana地衣红染色液：地衣红lg , 70%乙醇99ml，浓盐酸1m1。将地衣红溶于乙醇内，然后加入浓盐酸。放置冰箱中保存备用。 染色方法 (1)组织切片，脱蜡至水。 (2)在70%乙醇中2min。 (3)置Uana地衣染色液中1530min(系温箱内所需时间，室温中浸染过夜)。 (4)70%乙醇液分化至无多余染液脱下为止。 (5)可用Van Gieson液复染。 (6)95%乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维呈棕红色至暗棕色，其他组织呈复染的颜色。 7、Gomori改良醛复红-阿尔辛篮染色法 固定 各种固定液，但以乙醇或Bouin固定液固定效果最佳。 试剂配制 醛复红-阿尔辛蓝染液：盐基性复红0.5g，阿尔辛蓝0.6g，70%乙醇98m1，浓盐酸1ml，三聚乙醛1m1。将复红和阿尔辛蓝依次溶于乙醇内，然后加入盐酸和三聚乙醛，充分混合摇匀，放置室温中24h，使其自然成熟后即可使用。该液用后须贮存于冰箱中可保存23个月。 染色方法 (1)石蜡切片，脱蜡至水。 (2)用醛复红-阿尔辛蓝液染12h。 (3)70%乙醇液漂洗2次，约35min。 (4)蒸馏水稍洗。 (5)用焰红B液染色10l5min。 (6)直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维呈深紫色，背景呈蓝绿色或其他复染的颜色。 8、Darrow合成地衣红改良法(1952年) 固定 Zenker液、Bouin液、10%甲醛均可。 试剂配制 (1)A液 0.4g合成地衣红溶于100m1含有1%浓盐酸的70%乙醇中。 (2)B液 即Mallory硼砂亚甲蓝液，其贮存原液为1g亚甲蓝与1g硼砂溶于100m1蒸馏水中。用时将此原液l ml加蒸馏水至9 ml即可。 染色方法 (1)按常规将切片脱蜡。(2)在A液中染30min。(3)在70%乙醇中稍洗2次。(4)蒸馏水中洗2次。(5)在稀释的B液中染5min。 (6)蒸馏水洗。 (7)在含有0.5%透明松香(Colophony，rosin)的95%乙醇中分色并脱水2min。切片要经常摇动，在镜检下掌握染色结果。 (8)在无水乙醇中快速完成脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维呈深紫色或红紫色，核蓝色。 9、Fraenkel多色染色法(Lillie，1965年) 显示目的 弹性硬蛋白、胶原纤维、肌肉和核。 固定 任何固定剂。 试剂配制 A溶液：地衣红1.5g，95%乙醇120ml，蒸馏水60ml，硝酸6 mI。向含有3%HCl的70%乙醇加入足量的上述贮存液，使溶液呈棕色。 B溶液，在饱和的苦味酸水溶液中溶以0.25%的靛姻脂红(Indigo carmine)。 C溶液，即Orth锂烟脂红染色液。将2.55g烟脂红溶于饱和碳酸锂水溶液中(约1.25%)，煮沸1015min，冷却过滤并加lg百里蚕粉。 染色方法 (1)按常规切片脱蜡至水。 （2）用C液染25min，使核虽红色。 (3)在1%，盐酸乙醇中分色。 (4)在A液中染24h。 (5)在80%乙醇中分色。 (6)在B液中染10l5min。 (7)在3.5%醋酸中洗。 (8)在95%与100%乙醇中快速脱水。 (9)二甲苯透明，中性树胶封固。 结果核红色，弹性硬蛋白深棕色，胶原纤维蓝绿色，肌肉黄色。 10、碱性蓝B染色法 固定 10%甲醛液、乙醇液或Zenker液均可。 试剂配制 (1)碱性蓝B乙醇溶液 碱性蓝B 0.60.8g，70%乙醇100ml。 (2)氢氧化钾乙醇液 氢氧化钾0.05g，70%乙醇100ml。 染色方法 (1)石蜡切片，脱蜡至水。 (2)在70%乙醇中lmin，入碱性蓝B乙醇液510min。 (3)蒸馏水速洗。 (4)用4%铁明矾溶液处理23min。 (5)蒸馏水速洗。 (6)入50%乙醇内12min。 (7)用0.05%氢氧化钾乙醇液分化35s。 (8)蒸馏水速洗2次。 (9)用0.5%荧光桃红液染35min。 (10)蒸馏水略洗。 (11)用95%乙醇及无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维呈蓝色，胶原纤维及背景呈红色，红细胞呈紫红色。 11、显示弹力纤维的VBM染色法 固定 中性甲醛固定，石蜡包埋切片。 试剂配制 (l)Martius yellow染色液 马休黄0.5g，95%乙醇98m1，磷钨酸0.5g。 (2)Victoria blue染色液 详见显示弹力、胶原纤维的双重组合染色法。 染色方法 (1)组织切片脱蜡至水。 (2)切片入70%乙醇中洗2min。 (3)将切片浸入Victoria blue染色中2h。 (4)用95%乙醇分化l min。 (5)浸入蒸馏水中洗2次。 (6)用马休黄染色液染l min。 (7)快速用无水乙醇冲洗2次。 (8)二甲苯透明，中性树胶封固。 结果 弹力纤维呈蓝色，背景黄色。 12.显示弹力、胶原纤维的双重组合染色法(1992年) 固定 中性甲醛液，石蜡包埋切片。 试剂配制 (1)维多利亚蓝染色液 维多利亚蓝(Victoria blue)2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200m1。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中，继续煮沸3min，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸一起放在60恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再将其溶于400m1的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g，放置至成熟后使用。 (2)丽春红S染色液 0.5%丽春红(ponceaus-上海试剂三厂出品)l5ml，加苦味酸饱和水溶液(1.22%)85m1。 染色方法 (1)组织切片脱蜡至水。 (2)切片入70%乙醇中洗2min。 (3)将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.52h。 (4)直接入95%乙醇中分色数秒钟。 (5)用蒸馏水洗2min。 (6)用丽春红S液滴染切片2min。 (7)直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次。 (8)将切片在空气申或冷风干燥。(9)二甲苯透明，中性树胶封固。结果 弹力纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。第二章 肌肉组织肌组织主要由肌细胞构成，根据结构和功能，又分为骨骼肌、心肌和平滑肌，而骨骼肌和心肌的肌纤维含有横纹，所以又称为横纹肌。其基本病变主要是指肌纤维的变性、坏死和修复等。常见肿瘤有横纹肌瘤、横纹肌肉瘤和含有成肌细胞的混合性中胚叶肿瘤等，而共同的病理变化特点是肿瘤细胞可出现横纹肌纤维，可用磷钨酸苏木素（PTAH）来显示肌纤维成分。第一节 横纹肌组织一、Mallory磷钨酸苏木素染色法（PTAH）1.试剂配制（1）Mallory磷钨酸苏木素液（PTAH） 苏木素0.1g，磷钨酸2g，蒸馏水100ml。将苏木素置20ml蒸馏水中加热溶解，再将磷钨酸溶于80ml蒸馏水中。苏木素冷却后加入磷钨酸溶液，混合后置放，经阳光处理数周至数月才成熟。（2）高锰酸钾氧化液 0.5%高锰酸钾水溶液50ml，0.5%硫酸水溶液50ml。2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（2）在高锰酸钾液中氧化5-10min。（3）自来水洗2次后，用1%草酸漂白2min。（4）自来水洗，蒸馏水洗2次。（5）浸入Mallory PTAH 液中12-48h。（6）直接用95%乙醇分化。（7）无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。3.染色结果 胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维素、横纹肌等均呈蓝色；胶原纤维、网状纤维、软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹力纤维有时被染色成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。4.注意事项（1）此液在室温下自然成熟后，置冰箱内保存可使用多年时间，其效果不减。（2）如果实验时急需用试剂，可在PTAH染色液中加入0.15g的高锰酸钾，以加快促使成熟。（3）95%乙醇分化时应注意在切片上保留一定的红色，然后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。 第二节 早期心肌病变组织染色早期心肌梗死是近年来被称为早期心肌病变，从60年代开始，有许多作者都对心肌病变进行方法学研究，其共同特点是选用酸（碱）性复红对缺氧心肌进行实验，结果证明了心肌病变的可靠性，这种缺氧心肌对酸性复红的亲和力称嗜复红性，对碱性复红的亲和力称为亲复红性。在实验中还可用PAS法来显示早期心肌病变中的糖原减少或消失。以便作为对照的鉴别诊断。一、Nagar-Olsen染色法（1974年）此法显示缺氧心肌的苏木素碱性复红苦味酸染色法，简称HBFP。1.试剂配制（1）Harris苏木素液（2）碱性复红染色液 碱性复红0.1g，蒸馏水100ml。2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（2）入明矾苏木素液10-30s。（3）自来水冲洗5min，用蒸馏水洗2次。（4）碱性复红染色液3min。（5）蒸馏水洗5-10s。（6）纯丙酮洗5s。（7）0.1%苦味酸纯丙酮液迅速分化5-15s。（8）纯丙酮脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。3.染色结果缺氧心肌、红细胞呈红色，正常心肌呈黄色或黄棕色，细胞核呈黄色。4.注意事项本法属于退行性染色，关键是在苦味酸丙酮液中分化，复红液对缺氧心肌染色力较强，而分化时也相对的抵抗力较大，其脱色慢些；但正常心肌对分化液的抵抗力差，即脱色快些，因此需要将切片浸入分化液中而不停的快速上下移动多次后，即用丙酮进行脱水，在镜下观察脱色情况，如果分化不足可再进行分色。第三章 神经组织第一节 神经元及神经纤维一、神经元及神经纤维的结构神经组织主要是由具有长突起、能传导冲动的神经细胞组成。神经细胞是神经系统的结构和功能单位，所以又称神经元。神经元集中于大脑、小脑皮质、脑干、脊髓的灰质以及神经节内。神经元的胞体聚集成核团，而神经元的轴突组成纤维束；在周围神经中，神经元的胞体组成神经节，轴突组成神经束。神经元由细胞体、树突和轴突构成。神经元的细胞体具有和其他细胞一样的结构，即表面有细胞膜、中有细胞质、内有细胞核。胞体的形态、大小各异，有圆形、锥形、星形等。一般细胞核位于胞体的中央，为泡状，核仁极明显；胞质结构较复杂，含有神经原纤维、尼氏小体、高尔基体、线粒体、内含物、色素等，其中神经原纤维和尼氏小体是神经元特有的结构。神经元之间通过突触互相联系。神经元的胞突分为树突与轴突两种。每个神经元有1至多个树突，轴突只有一个。神经纤维由从神经元发出的轴突和较长的树突以及包裹在外的构造一起组成，在脑与脊髓内走行于白质中，并为外周神经系统的一部分。轴突中主要为神经原纤维和少量胞浆及线粒体，没有尼氏小体。轴突外周的构造，有些较为复杂，外层被鞘膜包裹，称为有髓纤维；有些比较简单，无鞘膜被覆。称为无髓纤维。二、神经元和神经纤维的染色在常规HE染