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文档简介

目的基因的功能验证 减弱该基因在细胞内的作用基因敲除RNAi增强该基因在细胞中的作用基因的过量表达 1 基于同源重组的方法 2 针对单细胞微生物小鼠 3 正负双向筛选法 正选择标记抗生素抗性基因负选择标记致死基因tk将无毒的核酸类似物 GANC 转变为毒性物质 4 完全基因敲除的弊端 基因完全失活 对于看家基因来说 该基因缺失的突变往往具有致死效应 突变体不易存活改进 条件基因敲除 实现基因敲除在空间和时间上的可控性 5 空间上的可控 组织特异性敲除 loxP位点 一段34碱基的特定DNA序列 具有方向性Cre重组酶 介导loxP位点发生重组的酶 6 Cre LoxP系统的基因敲除 7 构建条件基因打靶小鼠 将靶基因两端锚定上同向的LoxP位点构建组织特异性Cre转基因鼠将上述两小鼠杂交 得到组织特异性基因敲除小鼠 8 时间上的可控性 用可诱导的启动子调控Cre重组酶的表达加入诱导物之后 启动子才具有活性 9 针对DNA上的靶位点 根据其两侧序列设计两个锌指蛋白分子 10 CRISPR Cas9 在CRISPR Cas系统里 短片段的外源DNA分子转录为crRNA 与tracrRNA结合 介导了序列特异性的切割作用 最后在Cas蛋白的作用下使靶标基因发生突变 11 反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子 可直接与mRNA形成双链RNA 由于核糖体不能翻译双链RNA 所以反义RNA可抑制该mRNA的翻译 12 如何操作 1 向细胞内转化双链RNA分子 转化上的难度 不能稳定遗传 2 向细胞内转化DNA分子 转录后成为双链RNA3 将2个DNA分子 分别编码靶基因的正义链和反义链 分别转入细胞4 较繁琐 如何只通过转化1个DNA分子 就能实现RNAi 13 基因的过量表达 overexpression 通过强启动子的驱动 使某一功能基因高于正常生理水平表达 通过检测基因过表达后对某一性状和表型造成的影响 来推测基因的功能 单细胞多细胞 在特定组织中的定时表达 14 头部 驱动目的基因在特定组织和细胞内的高
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