超声细胞破碎仪.ppt

超声细胞破碎仪 SONIC VC 130型 细胞破碎的方法 机械破碎法 是指利用捣碎机 研磨器或匀浆器等将细胞破碎开来 物理破碎法 指利用温度差 压力差或超声波等将细胞破碎开来 化学破碎法 指利用甲醛 丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜 使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改变 酶学破碎法 选用合适的酶 使细胞壁遭到破坏 进而在低渗溶液中将原生质体破碎开来 一 机械破碎法1 高速组织捣碎 将材料配成稀糊状液 放置于筒内约1 3体积 盖紧筒盖 将调速器先拨至最慢处 开动开关后 逐步加速至所需速度 此法适用于动物内脏组织 植物肉质种子等 2 玻璃匀浆器匀浆 先将剪碎的组织置于管中 再套入研杆来回研磨 上下移动 即可将细胞研碎 此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高 适用于量少和动物脏器组织 二 物理破碎法超声波处理法 用一定功率的超声波处理细胞悬液 使细胞急剧震荡破裂 借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器 机制 可能与强声波作用溶液时 气泡产生 长大和破碎的空化现象有关 空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解 超声波破碎的效率取决于声频 声能 处理时间 细胞浓度和细胞类型等 使用时注意降温 防止过热 2 高压破碎 细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上 被迫改变方向经出口管流出 此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化 从而破碎释放内含物 这是一种温和的 彻底破碎细胞的较理想的方法 3 反复冻融法 将细胞在 20度以下冰冻 室温融解 反复几次 由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀 使细胞结构破碎 三 化学破碎法 有些动物细胞 例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠 SDS 去氧胆酸钠等细胞膜破坏 浓度一般为1mg ml 四 酶学破碎法 细菌细胞壁较厚 可采用溶菌酶处理效果更好 裂解液标准配方 50mMTris HCl pH8 5 9 0 2mMEDTA 100mMNaCl 0 5 TritonX 100 1mg ml溶菌酶 溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用 无论用哪一种方法破碎组织细胞 都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中 使大分子生物降解 导致天然物质量的减少 加入二异丙基氟磷酸 DFP 可以抑制或减慢自溶作用 加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性 加入苯甲磺酰氟化物 PMSF 也能清除蛋白水解酶活力 但不是全部 而且应该在破碎的同时多加几次 另外 还可通过选择pH 温度或离子强度等 使这些条件都要适合于目的物质的提取 用途 用于动植物细胞 细菌 芽孢或组织的粉碎 从细胞中提取蛋白质以及进行病毒 疫苗的科学培养实验 加速化学 物理学等的反应速度和加速液体脱气 原油稀释 油水乳化 加速脱晶 玻璃均浆等进行的科研分析 分散稀土 各类无机矿物质 以及配制近纳米百分之一的乳胶体均化混合物等 模具微孔 盲孔的快速强力高精洗液 实验超声细胞破碎技术 实验目的 1了解超声细胞破碎的基本原理2掌握超声细胞破碎的基本技术 实验原理 强声波作用溶液时 气泡产生 长大和破碎的空化现象有关 空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解 美国SONlCV130超声细胞破碎仪使用说明仪器配件及旋钮功能 1 两种超声探头备选 小 由3mm处理样品体积范围 250ul 10ml大 由6mm处理样品体积范围 10ml 25ml2 PULSER旋钮 如打在OFF位置 则默认无间歇工作模式 如旋钮选择1 10间的数值 则工作模式为间歇式 暂停1秒 工作1 10秒 间歇模式有利于降温和提高超声效率 3 TIMER旋钮 设置总的工作时间为1 10分钟 按下旋钮之后生效 如不按下该旋钮则默认为无时间限制 4 AMPLITUDE 选择振幅及输出功率 材料和试剂 细菌10ml 烧杯 刨冰 75 酒精棉球 仪器 超声细胞破碎仪 Sonic vc 130型探头型号大小破碎细胞容量 2mm 150ul 5ml 265 53mm 200ul 10ml 265 56mm 10ml 50ml 265 513mm 50ml 150ml 358 43 方法与步骤 1 将样品连同冰盒放于载物台上 缓慢放下探头至液面下 不可过浅 否则易产生气泡 固定好 探头严禁触碰容器壁 2 根据需要设置PULSER及TIMER 关闭隔音箱门 打开AMPLITUDE至适当数值 观察显示屏上输出功率大小 一般情况下选择10 25watts之间为宜 3 总的工作时间建议革兰氏阴性菌10一15分钟 革兰氏刚性菌20 30分钟 细胞则应视胞膜强度而定 处理过程中样品温度应保持在4 左右 请注意随时观察并调整探头位置 以避免触碰容器壁 4 使用完毕后清理载物台 酒精棉球擦洗探头 旋钮复位 使用前注意事项 1 根据所处理的样本体积选择适当探头 使用前后均须用酒精棉球擦洗探头 换探头须刚专用扳手更换 2 AMPLITUDE旋钮打开