密集烘烤过程中烟叶生理指标和物理特性.pdf

中国农业科学 2011 44 1 125 132 Scientia Agricultura Sinica doi 10 3864 j issn 0578 1752 2011 01 015 收稿日期 2010 06 21 接受日期 2010 10 14 基金项目 国家烟草专卖局项目 3300806156 河南省教育厅自然科学研究项目 2010B210013 联系方式 武圣江 E mail wushengjiang1210 通信作者宫长荣 E mail gongchr009 密集烘烤过程中烟叶生理指标和物理特性 及细胞超微结构变化 武圣江 1 宋朝鹏1 贺 帆1 孙建峰2 宫长荣1 1河南农业大学烟草学院 郑州 450002 2云南省烟草公司曲靖市公司 云南曲靖 655000 摘要 目的 探讨密集烘烤过程中烟叶某些生理指标和物理特性及细胞超微结构变化 为烘烤工艺的优化 和完善提供理论依据 方法 采用河南农业大学设计的电热式温湿自控密集烤烟箱 研究烟叶烘烤过程中关键温 度点 鲜样 38 42 48 54 干样 细胞超微结构 生理指标及物理特性的变化规律 结果 烟叶淀 粉 叶绿素和类胡萝卜素含量的变化主要在变黄前期 烟叶水分含量 厚度 密度的变化主要在变黄期和定色期 果胶和纤维素含量的变化主要在定色期 烘烤过程中叶质重的变化相对较小 细胞超微结构观察表明 细胞壁 叶绿体和细胞核在烘烤过程中的变化明显 但线粒体不易观察到 38 染色质减少 核膜部分消失 42 细胞出 现质壁分离现象 叶绿体等细胞器游离到细胞中央 叶绿体外膜 核膜破裂 嗜锇颗粒多数呈现半空状态 基粒 片层和大部分淀粉粒消失 48 细胞壁扭曲变形 细胞核固缩 54 后叶绿体个体形状已不易区分 所存物质基 本是电子密度较弱的嗜锇物质 结论 烘烤过程中烟叶细胞超微结构变化与烟叶物理特性 生理生化反应 内含 物降解转化的程度密切相关 关键词 烤烟 密集烘烤 生理指标 物理特性 超微结构 Changes of Cell Ultrastructure and Some Physiological Indexes and Physical Properties of Tobacco Leaves During Bulk Flue Curing WU Sheng jiang1 SONG Zhao peng1 HE Fan1 SUN Jian feng2 GONG Chang rong1 1College of Tobacco Science He nan Agricultural University Zhengzhou 450002 2Qujing Tobacco Company of Yunnan Province Qujing 655000 Yunnan Abstract Objective In order to provide a theoretical basis for optimization and perfection of curing technology changes of cell ultrastructure and some physiological indexes and physical properties of tobacco leaves were studied during bulk curing Method Changes of cell ultrastructure some physiological indexes and physical properties were studied at key temperature points fresh 38 42 48 54 dry sample during flue curing using the electric heated flue curing barn designed and made by Henan Agricultural University Result The contents of the starch chlorophyll and carotenoids of tobacco leaves changed greatly in the early yellowing stage The differences of moisture content thickness density of tobacco leaves in the yellowing and leaf drying stages were highly significant The contents of the pectin and cellulose changed mainly in the leaf drying stage but leaf specific weight had a relatively small change during flue curing Cell ultrastructure observation indicated that cell wall chloroplast and nucleus changed obviously but mitochondrias were not easy to be found during flue curing The cell structure of the fresh leaves was normal but chromatin decreased and part of the nuclear membrane disappeared at 38 Cells showed plasmolysis chloroplast and other cellular organs freed to the central cell chloroplast outer membrane and nuclear membrane fractured most osmiophilic granules presented half hollow state grana lamella and most starch grains disappeared at 42 The obvious twist distortion of cell wall and nucleus pyknosis appeared at 48 Individual shapes of chloroplast were not apt to differentiate and the remains were 126 中 国 农 业 科 学 44 卷 basically osmiophilic materials of the weak electronic density after 54 Conclusion The changes of the cell ultrastructure of tobacco leaves were closely related to physical properties and physiological and biochemical reactions and extent of degradation and transformation of inclusion during flue curing Key words flue cured tobacco bulk flue curing physiological indexes physical properties ultrastructure 0 引言 研究意义 2004 年以来 全国适度规模种植配 套烘烤设备的研究与推广 项目组对密集烤房技术进 行了全面和系统的研究 中国烤烟密集烘烤技术推广 取得了显著成效 已经成为一种不可逆转的趋势 但 是 从生产情况来看 密集烘烤设备和调制技术还有 待完善 主要表现在烘烤过程中烟叶挂灰 烤青 烤 后烟叶光滑 组织结构紧密 香气不足等方面 难 以满足 中式卷烟 的原料需求 1 通过研究烘烤过 程中烟叶生理 物理特性和细胞超微结构变化 探讨 烟叶细胞的衰老规律 对优化烘烤工艺和改善烟叶品 质具有重要意义 前人研究进展 细胞是生物体结 构和功能的基本单位 烤烟在烟草病害 金属及化学 试剂污染物等逆境胁迫下 细胞壁 细胞膜 叶绿体 线粒体和细胞核等超微结构会出现不同程度的解 体 正常的生理功能逐步丧失 2 6 电镜观察表明 过氧化氢稳态变化能够引发烟草的细胞主动死亡过 程 7 8 冷诱导能够增强烟株的耐冷性 9 烟株细胞 光和生理代谢与叶绿体功能密切相关 叶绿体超微 结构的变化影响其正常的生命代谢 10 14 随着烟叶成 熟度的增加 叶片组织结构逐渐疏松 细胞轮廓逐渐 模糊 细胞内叶绿体数量和叶绿素含量逐渐减少 淀 粉粒数量逐渐增加 15 烟草腺毛细胞有长 短两种类 型 均具有浓密的细胞质 大量的线粒体 很少空泡 化的特征 最明显不同之处在于短腺毛细胞间隙具有 电子致密物 16 本研究切入点 迄今为止 尽管对 烟叶细胞超微结构进行了较多研究 但对烤烟烘烤过 程中烟叶细胞超微结构及物理特性的变化研究 国内 外尚不多见 拟解决的关键问题 本试验通过研究 烘烤过程中烟叶细胞超微结构和相关生理指标及物理 特性的变化规律 旨在为改善烟叶组织结构和外观质 量 优化和完善烘烤工艺提供理论依据 1 材料与方法 1 1 试验材料 试验于 2008 2009 年在河南省孟津县常袋乡常 平村进行 试验田土壤肥力中等 供试品种为中烟 100 于 5 月 6 日移栽 行距 120 cm 株距 50 cm 规 范化栽培管理 取样前大田烟株长势基本一致 在群 体中选择株高一致 叶片数相等 叶色均匀 叶面积 差别不大 有典型 中棵烟 特征的烟株进行挂牌 以上部叶 第 16 18 位叶 为试验材料 烟叶成熟时 按照叶位单叶采收 1 2 样品制备 将烟叶均匀装进电热式温湿自控密集烤烟箱 密 度为 70 kg m 3 按照三段式烘烤工艺烘烤 分别在烟 叶烘烤的关键温度点取样 鲜样 干球 38 湿球 35 烟叶变黄八成发软 干球 42 湿球 36 37 烟叶黄片青筋主脉发软 干球 48 湿球 38 黄片黄筋小卷筒 干球 54 湿球 39 叶片全干大 卷筒 烤后取干样 切去叶尖和叶基部 留叶中部 分 一份烟叶用于生理指标 物理特性和超微结构的 测定 另一份于烘箱中 105 下杀青 5 min 在 60 下烘干 粉碎 过 60 目筛 用于细胞壁组分的测定 1 3 测定项目及方法 1 3 1 生理指标测定 烟叶水分 色素 淀粉含量的 测定采用王瑞新等的方法 17 重复 3 次 1 3 2 细胞壁组分测定 纤维素含量的测定采用宁 正祥 18 的方法 果胶物质含量的测定采用韩雅珊 19 的方法 重复 3 次 1 3 3 物理特性测定 1 硬度测定 硬度可以反映样品的坚实度 是 样品达到一定变形时所必需的作用力 采用 TA XT2i 质构测试仪 Stable Micro System Ltd 英国 的压缩 方法进行测定 压缩时下压样品变形量 strain 50 测试前探头下降速度 pre test speed 为 2 mm s 1 测 试速度 test speed 为 1 mm s 1 测试后探头回程速 度 return speed 为 1 mm s 1 目标值 target value 为 20 mm 触发力 trigger force 为 10 g 探头类型 为 P 50 两次压缩中停顿 5 s 在烘烤中各关键温度点 取烟叶 15 片 54 后取的烟叶在恒温恒湿箱平衡叶片 含水率至 16 5 0 5 下同 将叶片用打孔器打成 半径为 1 5 cm 的圆片 每 10 片叠放在一起 进行硬 度测定 样品在室温下测定 每个样品进行 15 次平行 试验 1 期 武圣江等 密集烘烤过程中烟叶生理指标和物理特性及细胞超微结构变化 127 2 厚度测定 随机抽取 10 片烟叶 平衡水分后 用 BHZ 1 薄片厚度计分别测量每片烟叶叶尖 叶中及 叶基的厚度 叶尖 叶中及叶基的横向位置均选取半 叶的中线位置 以 30 个点的厚度平均值作为该样品测 试点的厚度 m 3 叶质重的测定 采用随机抽取 25 片烟叶的方 法 在每片烟叶主脉两侧相同部位 用半径 R 为 1 5 cm 的圆形打孔器打两个圆片 54 后须平衡水 分 将 10 个圆形小片放入铝盒中 在 100 条件下 烘 2 h 冷却后称重 重复 5 次 叶质重计算公式为 单位面积烟叶质量 g m 2 圆片重 R2 10 叶密度 g cm 3 单位面积烟叶平均质量 叶片平 均厚度 1 3 4 超微结构观察 每次取样时选择具有代表性 的 3 片烟叶 在叶基向叶尖数第 5 6 条一级支脉间 距离主脉 2 cm 的中央位置 选择三级以上的小主脉 在预冷 0 4 的载玻片上滴上数滴 4 戊二醛固 定液 0 4 将烟叶固定位置放在载片上 用锋 利双刃刀片切成 1 mm 2 mm 小块 所取材料立即用 4 戊二醛进行前固定 鲜样 大田采后立即进行前固 定 同时抽气直到下沉为止 然后磷酸缓冲溶液冲 洗 pH 为 7 2 1 锇酸溶液后固定 乙醇系列脱水 环氧丙烷过渡 Epon812 包埋 60 下聚合 24 h 后在 LKB V 超薄切片机上切片 厚度为 60 nm 醋酸双 氧铀和柠檬酸铅双重染色 最后在 H 600 透射电子显 微镜 Hitachi H 600 Electron Microscope 日本 下观 察拍照 观测指标为细胞壁 叶绿体 细胞核等超微 结构 1 4 数据处理 采用 Microsoft Excel 等软件进行数据处理和绘 图 用 SPSS 16 0 软件进行数据统计分析 2 结果 2 1 烘烤过程中烟叶水分含量和物理特性变化 由图 1 可知 烟叶水分含量在变黄期和定色期发 生了显著变化 尤其是定色期 42 54 变化最显著 P 0 01 54 叶片已全干 与烤后烟叶水分含量差 异不显著 P 0 05 烘烤过程中烟叶硬度的变化先 增大 后降低 总趋势是不断降低的 在 38 54 各取样测试点差异均极显著 P 0 01 其中 48 烟叶的硬度最大 为鲜样的 22 16 倍 干样的 30 23 倍 由图 2 可知 烘烤过程中烟叶厚度和密度发生了 显著变化 而叶质重只有在 38 和 54 前后差异显著 图 1 烘烤过程中烟叶水分含量和硬度的变化 Fig 1 Changes of hardness and moisture content of tobacco leaves during flue curing 图 2 烘烤过程中烟叶厚度 叶质重和密度的变化 Fig 2 Changes of thickness and specific weight and density of tobacco leaves during flue curing P 0 05 烘烤过程中烟叶厚度变化呈逐渐下降趋 势 在 48 前变化最显著 P 0 01 54 前后差 异均不显著 P 0 05 烘烤过程中叶密度变化呈逐 渐递增的趋势 在 38 54 变化较为剧烈 从 361 65 mg cm 3增加到 855 36 mg cm 3 增幅达 136 51 2 2 烘烤过程中烟叶细胞壁组分的变化 从图 3 可以看出 果胶含量在 38 略有增加 但差异不显著 P 0 05 38 后 果胶含量呈逐 渐下降趋势 其中在 42 48 差异显著 P 0 05 烘烤过程中纤维素含量的变化趋势与果胶相似 其 128 中 国 农 业 科 学 44 卷 图 3 烘烤过程中烟叶果胶和纤维素含量的变化 Fig 3 Changes of cellulose and pectin content of tobacco leaves during flue curing 中在 42 48 差异极显著 P 0 01 2 3 烘烤过程中烟叶淀粉与色素含量的变化 由图 4 可知 烟叶淀粉含量随着烘烤进程的推进 逐渐降低 在鲜样和 38 之间烟叶淀粉含量差异极显 著 P 0 01 42 后相邻取样点差异不显著 P 0 05 烘烤过程中烟叶色素含量呈逐渐下降趋势 叶绿素和类胡萝卜素含量在 38 前显著降低 且与鲜 样差异极显著 P 0 01 叶绿素和类胡萝卜素含量 变化趋势略有不同 38 后叶绿素含量逐渐降低 只 有 48 和 54 间差异显著 P 0 05 38 48 类 胡萝卜素含量不降低 反而升高 48 后略有降低 图 4 烘烤过程中烟叶淀粉和色素含量的变化 Fig 4 Changes of pigments and starch content of tobacco leaves during flue curing 其中只有 42 和 48 间差异不显著 P 0 05 2 4 烘烤过程中烟叶细胞超微结构的变化 鲜叶栅栏组织的叶绿体等细胞器紧贴细胞壁排 列 中央大液泡中含有数量较多的泡状物 叶绿体呈 椭圆形 内含有体积较大且较多的淀粉粒和嗜锇颗粒 其中嗜锇颗粒的电子密度较弱 而细胞质中存在不规 则形状的嗜锇物质 则相对较强 叶绿体内的基质类 囊体颜色较深 基粒片层数量较多 质膜紧贴细胞壁 细胞膜连续清楚 鲜烟叶线粒体基本正常 数量较少 不易观察到 细胞核双层膜结构清楚 核仁与核质界 限分明 染色质均匀 核仁致密完整 细胞壁较厚 细胞壁物质密度较高 颜色较深 图 5 38 烟叶栅栏组织的叶绿体等细胞器仍然贴近细 胞壁分布 中央大液泡中泡状物消失 而在细胞壁附 近发现有较多的泡状物 并且在这些泡状物间有大量 不规则形状的嗜锇物质存在 在大多数烟叶细胞中 叶绿体所含的嗜锇颗粒大多数被一些大淀粉颗粒挤到 一边 但嗜锇颗粒的电子密度较弱 叶绿体内的基质 类囊体颜色较浅 基粒片层数量明显减少 细胞核中 的染色质减少 核膜部分消失 核仁不完整 线粒体 不易观察到 细胞壁部分稍有变薄 但物质密度仍然 较高 颜色仍然较深 图 5 42 为变黄末期 烟叶细胞出现质壁分离现象 叶绿体等细胞器游离在细胞中央 大多数叶绿体外膜 细胞核核膜和液泡膜破裂 叶绿体中所含的嗜锇颗粒 多数出现半空状态 基质类囊体颜色很浅 基粒片层 几乎不存在 细胞核中的染色质处于不断减少状态 线粒体不易观察到 但少量大淀粉颗粒仍然能够观察 到 细胞壁明显变薄 密度明显降低 颜色明显变浅 稍有扭曲 图 5 48 烟叶已呈小卷筒 细胞中质壁分离现象加重 叶绿体等细胞器游离在细胞中央 叶绿体数量减少 并且大多数叶绿体外膜 核膜破裂 液泡已辨析不清 细胞核固缩 叶绿体中所含嗜锇颗粒半空状态的面积 增大 甚至出现空泡化 线粒体消失 大淀粉颗粒已 不多见 但小颗粒的仍然能够观察到 细胞壁继续变 薄 间隙增大 并有扭曲和散乱的破裂现象 图 5 54 烟叶叶片基本已干 细胞中质壁分离现象明 显 所有细胞器固缩在细胞中央 叶绿体个体形状已 不易区分 所含淀粉粒大部分消失 所存物质基本是 电子密度较弱的嗜锇物质 核膜破裂 细胞核固缩 细胞壁较薄 密度较低 颜色较浅 细胞壁已不完整 扭曲破裂严重 图 5 1 期 武圣江等 密集烘烤过程中烟叶生理指标和物理特性及细胞超微结构变化 129 1 2 鲜样叶绿体 3 鲜样细胞 细胞核 4 5 变黄期 38 叶绿体 6 变黄期 38 细胞 细胞核 7 8 变黄期 42 叶绿体 9 变黄期 42 细胞 细胞核 10 11 定色期 48 叶绿体 12 定色期 48 细胞 细胞核 13 14 定色期 54 叶绿体 15 定色期 54 细胞 细胞 核 16 17 干样叶绿体 18 干样细胞 细胞核 Cw 细胞壁 Is 细胞间隙 Chl 叶绿体 Chm 叶绿体膜 Th 基质类囊体 O 嗜 锇颗粒 S 淀粉粒 V 液泡 N 细胞核 Nm 核膜 Nu 核仁 Ch 染色质 1 2 Chloroplast of fresh tobacco leaves 3 Cell nucleus of fresh tobacco leaves 4 5 38 chloroplast in the yellowing stage 6 38 cell nucleus in the yellowing 7 8 42 chloroplast in the yellowing stage 9 42 cell nucleus in the yellowing stage 10 11 48 chloroplast in the leaf drying stage 12 48 cell nucleus in the leaf drying stage 13 14 54 chloroplast in the leaf drying stage 15 54 cell nucleus in the leaf drying stage 16 17 Chloroplast of dry sample 18 Cell nucleus of dry sample Cw cell way Is intercellular space Chl chloroplast Chm chloroplast membrane Th thylakoid O osmiophilic granule S starch grain V vacuole N nucleus Nm nuclear membrane Nu nucleolus Ch chromatin 图 5 烘烤过程中烟叶细胞超微结构的变化 Fig 5 Changes of cell ultrastructure of tobacco leaves during flue curing 130 中 国 农 业 科 学 44 卷 烤后烟叶已经彻底干燥 细胞内部激烈的生化反 应均已终止 电镜观察发现 细胞中能够分辨清晰的 物质已经很少 叶绿体所含淀粉粒已很少 所存物质 主要是电子密度较弱的嗜锇物质 细胞核固缩 细胞 壁收缩扭曲 厚度更薄 颜色较浅 细胞壁模糊不清 破裂降解更严重 图 5 3 讨论 烟叶烘烤是一个与物理变化相伴随的复杂的生理 生化过程 20 烟叶水分含量在定色期前 尤其是 42 54 变化最显著 P 0 01 烟叶水分含量的变化 决定烟叶组织细胞内生理生化变化的方向和速度 最 终影响烟叶的形态 结构和烘烤质量的形成 本试验 结果表明 烘烤过程中烟叶厚度和密度均发生显著变 化 但变化趋势相反 而叶质重的变化幅度较小 烘 烤过程中叶厚度变化受水分 细胞骨架结构的影响 随着烟叶水分的损失和细胞壁物质及细胞内含物的不 断降解 烟叶细胞正常的超微结构被破坏 烟叶失水 塌架 厚度减薄 叶密度增加 叶质重变化主要受烟 叶收缩率和干物质损失多少的影响 而叶密度变化是 由叶厚度和叶质重决定的 烟叶物理特性变化和烟叶 细胞生理生化反应 内含物降解转化的程度密切相关 并能够反映在超微结构和组织结构的变化上 5 电镜 观察表明 38 前细胞内部生理生化反应剧烈 内部 结构已经部分破坏 功能部分损失 42 细胞膜系统 已遭到严重破坏 细胞膜正常的生理生化功能已经丧 失 这表明变黄期 42 前 是烟叶细胞生理和超微 结构变化最关键的阶段 对于改善烟叶组织结构及品 质具有重大意义 而 48 后细胞结构和形态及内部物 质均已发生了显著变化 果胶和纤维素是细胞壁的主要成分 细胞壁是 烟叶形态结构的塑造者 烘烤过程中烟叶失水塌架 叶面积褶皱收缩是由细胞壁及内部物质不断降解引 起的 21 22 果胶和纤维素的降解促使细胞壁超微结 构破坏和烟叶形态收缩扭曲 随着变黄期和定色期烟 叶细胞壁物质的不断降解 细胞壁超微结构变化缓慢 48 才有明显的破裂现象 这与烟叶硬度 48 后显著 降低的变化较为一致 烟叶硬度的变化受烘烤前期烟 叶水分含量的影响较大 适度失水后 压缩相同比例 的叶片高度需要的力更大 后期伴随着细胞壁物质的 降解和细胞壁骨架结构的破坏 烟叶硬度显著降低 P 0 05 烘烤过程中烟叶细胞壁物质降解并转化为 相应的低糖和单糖类物质 破坏烟叶组织结构和细 胞的骨架结构 使烟叶质地适时变软 烟叶组织结 构得到改善 23 24 叶绿体是烟叶细胞中最明显的细胞器之一 淀粉 与质体色素主要位于叶绿体内 10 11 本试验结果表 明 淀粉 叶绿素含量 38 前显著降低 之后逐渐 降低 但类胡萝卜素含量在 38 48 升高 这是因为 烟叶调制是采后烟叶进行饥饿代谢的生理生化过程 其内含物处于不断的损耗之中 相对于其它内含物 淀 粉 叶绿素等 的降解进程 在 38 48 类胡萝卜素 降解速率明显减缓 其含量在烟叶总物质中所占的比 例增加 故呈上升趋势 烘烤过程中叶绿体超微结构 观察表明 鲜样叶绿体内含有体积较大且较多的淀粉 粒 38 仍有少量大淀粉颗粒存在 42 叶绿体只有 部分大淀粉颗粒没有充分降解 48 后 所含淀粉粒 大部分消失 变黄期 尤其是 38 之前 是烟叶细胞 内生理生化反应最剧烈的阶段 是淀粉 叶绿素和类 胡萝卜素等大分子物质降解的关键时期 20 烤后烟叶 淀粉和色素降解的程度和含量的多少与烟叶的香气 外观品质密切相关 15 细胞壁破裂 降解程度及含量 与烟叶品质 卷烟可用性及评吸性密切相关 25 因此 在变黄期的关键温度点 38 适当延长时间 使烟叶充 分变黄 淀粉 色素彻底降解 内含物质得以充分转 化 定色期是烟叶物理特性 组织结构及细胞壁结构 变化最关键的阶段 合理调控烘烤进程 使细胞结构 得到适当的破坏 降低细胞壁物质含量 有利于提高 烟叶内可利用性糖和香气物质含量 改善烟叶的组织 结构和外观质量 4 结论 淀粉 叶绿素和类胡萝卜素等生理指标变化主要 在变黄前期 果胶和纤维素等变化随后 烟叶水分 厚度 密度的变化主要在干筋期前 烘烤过程中叶质 重波动较小 而超微结构的变化伴随整个过程 尤其 是细胞壁 叶绿体和细胞核的变化明显 烟叶细胞超 微结构变化和物理特性 生理生化反应 内含物降解 转化的程度密切相关 在变黄期 38 前后适当延长时 间 使淀粉 色素等叶绿体内含物充分降解转化 烟 叶充分变黄 定色期合理调控烘烤进程 降低细胞壁 物质含量 有利于提高烟叶内低聚糖 单糖和香气物 质含量 改善烟叶的结构和外观质量 References 1 徐秀红 孙福山 王 永 赵 兵 刘建永 邓启强 丁志勇 我国 1 期 武圣江等 密集烘烤过程中烟叶生理指标和物理特性及细胞超微结构变化 131 密集烤房研究应用现状及发展方向探讨 中国烟草科学 2008 29 4 54 56 61 Xu X H Sun F S Wang Y Zhao B Liu J Y Deng Q Q Ding Z Y Current situation and further direction on research and application of bulk curing barn in China Chinese Tobacco Science 2008 29 4 54 56 61 in Chinese 2 刘华山 白海群 韩锦峰 孟凡庭 朱大恒 范艺宽 李晶新 李中 规 陈启龙 几种植物提取液对 TMV 体外活性及烟草叶片超微结 构的影响 中国农业科学 2010 43 5 957 964 Liu H S Bai H Q Han J F Meng F T Zhu D H Fan Y K Li J X Li Z G Chen Q L Effects of several plants extracts on the activity of TMV in vitro and ultrastructure of tobacco leaves Scientia Agricultura Sinica 2010 43 5 957 964 in Chinese 3 Kodama M Park P Tsujimoto T Otani H Kohmoto K Nishimura L S Ultrastructural studies of an action site of host selective AT toxin produced by alternaria alternate tobacco pathotype in tobacco leaf cell Annals of the Phytopathological Society of Japan 1990 56 637 644 4 Benhamou N C t F Ultrastructural and cytochemistry of pentin and cellulose degradation in tobacco roots infected by Phytophthora parasitica var nicotianae Phytopathology 1992 82 468 478 5 Huang W Xing W Li D Liu Y Morphological and ultrastructural changes in tobacco BY 2 cells exposed to microcystin RR Chemosphere 2009 76 7 1006 1012 6 袁祖丽 马新明 韩锦峰 李春明 吴葆存 镉污染对烟草叶片超 微 结 构 及 部 分 元 素 含 量 的 影 响 生 态 学 报 2005 25 11 2919 2927 Yuan Z L Ma X M Han J F Li C M Wu B C Effect of Cd contamination on ultramicroscopic structure and some elements content of tobacco leaves Acta Ecologica Sinica 2005 25 11 2919 2927 in Chinese 7 Dat J F Pellinen R Beeckman T Cotte B V D Langebartels C Kangasj rvi J Inze D Breusegem F V Changes in hydrogen peroxide homeostasis trigger an active cell death process in tobacco The Plant Journal 2003 33 4 621 632 8 Houot V Etienne P Petitot A S Barbier S Blein J P Suty L Hydrogen peroxide induces programmed cell death features in cultured tobacco BY cells in a dose dependent manner Journal of Experimental Botany 2001 52 361 1721 1730 9 Khodakovskaya M McAvoy R Peters J Wu H Li Y Enhanced cold tolerance in transgenic tobacco expressing a chloroplast 3 fatty acid desaturase gene under the control of a cold inducible promoter Planta 2006 223 5 1090 1100 10 Jeong W J Park Y I Suh K Raven J A Yoo O J Liu J R A large population of small chloroplasts in tobacco leaf cells allows more effective chloroplast movement than a few enlarged chloroplasts Plant Physiology 2002 129 1 112 121 11 Synkova H Pechova R Valcke R Changes in chloroplast ultrastructure in Pssu ipt tobacco during plant ontogeny Photosynthetica 2003 41 1 117 126 12 Ido K Ifuku K Yamamoto Y Ishihara S Murakami A Takabe K Miyake C Sato F Knockdown of the PsbP protein does not prevent assembly of the dimeric PSII core complex but impairs accumulation of photosystem II supercomplexes in tobacco Biochimica et Biophysica Acta 2009 1787 7 873 881 13 Polansk L V nkov A Nov kov M Malbeck J Dobrev P I Brzobohat B Va kov R Mach kov I Altered cytokinin metabolism affects cytokinin auxin and abscisic acid contents in leaves and chloroplasts and chloroplast ultrastructure in transgenic tobacco Journal of Experimental Botany 2007 58 3 637 649 14 Wang M Wang G Ji J Wang J The effect of pds gene silencing on chloroplast pigment composition thylakoid membrane structure and photosynthesis efficiency in tobacco plants Plant Science 2009 177 3 222 226 15 黄 勇 周冀衡 杨虹琦 刘建利 王 勇 周义和 黄 琰 何小 力 烤烟成熟过程中叶片和叶绿体的细胞学观察 作物学报 2006 32 11 1767 1770 Huang Y Zhou J H Yang H Q Liu J L Wang Y Zhou Y H Huang Y He X L Cytological observation of leaf and chloroplast during the flue cured tobacco maturation Acta Agronomica Sinica 2006 32 11 1767 1770 in Chinese 16 Akers C P Weybrew J A Long R C Ultrastructure of glandular trichomes of leaves of Nicotiana tabacum