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第九章蛋白质相互作用网络 1 蛋白质 蛋白质 protein 是一种复杂的有机化合物 也称 多肽 它由氨基酸分子排列的线性链所构成 其氨基酸序列是由对应的基因序列 遗传密码 所确定 除了按照遗传密码所编码的十种标准氨基酸外 在某些生物体中 遗传密码还包括其他氨基酸 2 蛋白质 蛋白质残基可以在被翻译后修饰而发生化学变化 并改变其物理 化学及生物学性能 从而改变蛋白质的功能 多个蛋白质可以组成复合体来实现某一特定功能 3 一 蛋白质的功能 蛋白质的功能很多 例如以下几种最基本的生理功能 1 组成和修复生物体2 调节生物体的生理机能3 运输载体4 供给能量 4 1 组成和修复生物体蛋白质是生物体细胞的基本构成物质 人体的肌肉 内脏 皮肤 大脑 毛发 血液及骨骼等的主要成分都是蛋白质 蛋白质还可以帮助伤口血液凝固并促进其愈合 5 2 调节生物体的生理机能构成生物体差不多所有的生命活性物质 例如 催化体内各种生物化学反应的酶调节机体生长 发育并行使正常生理功能的激素 6 抵御外来细菌和病毒的抗体及免疫类物质 当蛋白质充足时 一旦需要这些抗体和免疫物质在数小时内就可以增加数百倍 参与细胞的信号转导 调控细胞的发育和凋亡 乃至生物体的命运 形成生物体的渗透压 引发生物体的各种活动 例如肌肉的做功等 7 3 运输载体蛋白质是生物体内很多重要的代谢物和营养素的载体 氧 脂类 维生素 矿物质与微量元素都需要利用各种蛋白质运输到生物体需要的地方 例如 血红蛋白质可以输送氧 脂蛋白可以输送脂肪 蛋白质还可以充当营养物质储备 例如植物种子中的大量蛋白质 就是在萌发时用的储备 8 4 供给能量由于蛋白质中含碳 氢 氧元素 当机体需要时 可以被代谢系统分解 释放出能量 9 综上所述 蛋白质参与了生命的几乎所有过程 例如遗传 发育 繁殖 物质和能量的代谢 应激等 揭示生物体内成千上万种蛋白质的具体功能及其实施功能的机制 是在21世纪后基因组时代蛋白质研究的核心内容 也是当前生物科学极富挑战性的研究领域之一 10 二 蛋白质组学 蛋白质组学 Proteomics 主要是大规模地研究蛋白质的结构和功能 定义 在一定时间内一个细胞或一类细胞中存在的所有蛋白质被称为蛋白质组 proteome 意指proteinsexpressedbyagenome 即一个细胞或一个组织的 基因组所表达的全部蛋白质 11 二 蛋白质组学 蛋白质组学是应用各种技术研究蛋白质组的一门新兴科学 其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组分 表达水平与修饰状态 了解蛋白质之间的相互作用与联系 揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律 12 三 蛋白质相互作用网络 蛋白质的相互作用 PPI Protein proteininteraction 是指蛋白质分子之间的相关性 并从生物化学 信号转导和遗传网络的角度研究这种相关性 将此内容看作是一个 蛋白质相互作用网络 PPIN 的尝试性定义 13 Proteininteraction twoormoreproteins sameordifferent interactorformcomplex 14 人类蛋白质组 有一些蛋白质可以以单体的形式发挥作用 但是大部分的蛋白质都是和伴侣分子或是与其他蛋白质一起发挥作用的 蛋白质相关知识及研究蛋白质相互作用的必要性 15 基因组计划 大量的新基因不断被发现 然而单纯的基因组DNA序列尚不能解答许多生命问题 基因是相对静态的 而基因编码的产物 蛋白质则是动态的 具有时空性和调节性 是生物功能的主要体现者和执行者 蛋白质的表达水平 存在方式以及相互作用等直接与生物功能相关 在所有生命活动中 蛋白质之间的相互作用是必不可少的 它是细胞进行一切代谢活动的基础 细胞接受外源或是内源的信号 通过其特有的信号途径 调节其基因的表达 以保持其生物学特性 在这个过程中 蛋白质占有很重要的地位 它可以调控 介导细胞的许多生物学活性 16 为了更好地理解细胞的生物学活性 必须很好地理解蛋白质单体和复合物的功能 这就会涉及到蛋白质相互作用的研究 因此 揭示蛋白质之间的相互作用关系 建立相互作用关系的网络图 已成为蛋白质组学研究中的热点 也是后基因时代的难题所在 研究蛋白质相互作用的方法也就具有更为重要的意义 17 蛋白质相互作用 通过对蛋白质相互作用的研究 认识生命活动的基本规律 科学 利用蛋白质相互作用 发展技术 用于研究生命活动的规律或应用性技术 技术 18 PPIN在许多生物过程和研究防治疾病中发挥着非常重要的作用 PPIN的研究比基因网络更为复杂和困难 蛋白质相互作用网络近年来明显发展较快 蛋白相互作用网络 19 20 蛋白质相互作用关系的复杂性 超出任何个人或特定机构的研究能力 如何研究蛋白质相互作用 21 考虑到PPIN的复杂性 研究人员往往从多种方向和视角来研究某一生物所有的蛋白质相互作用 22 运用生物信息学的方法由繁入简 研究的广度 实验分析的方法由简入繁 研究的深度 23 酵母蛋白质相互作用联络图 人蛋白质相互作用联络图 如此复杂的相互作用 哪些是有相关功能的 哪些是 噪音 24 整体 系统 部分 单体 25 在研究PPIN的计算方法中面临着许多挑战性问题 26 27 a 为全面了解某一生物功能的机理 研究并确定PPIN中两个节点之间相互作用的边是需要解决的第一个重要问题 这被称为小规模实验 28 b 研究PPIN的拓扑结构和规模 对于了解该网络的全局性能是非常重要的 29 c 研究PPIN中蛋白质复合体是至关重要的 一些蛋白质可与其他多个蛋白质结合组成蛋白质复合体 通常这些复合体可以组成一个稳定的单位 在一定时间内不会发生重大变化 但也有另一些高度动态变化的复合体可导致细胞状态和功能的改变 30 蛋白质复合体的形态可转化为其他不同形态 由此可以构造一种蛋白质复合体形态演化网络 31 d 生物体内的信号转导路径 代谢路径和有关的细胞过程是构建PPIN的骨干 要了解细胞 研究和建立上述路径模型也是至关重要的 在许多信号转导和代谢路径中都有蛋白质相互作用 32 e 可根据蛋白质相互作用的关系来预测蛋白质的功能 预测蛋白质功能是目前计算生物学的一个最重要的任务 利用数据模型和计算方法 可以直接从蛋白质序列预测PPIN的结构 功能及其动力学机制 33 例如 基于假设邻近蛋白质具有相似性的聚类方法 统计 投票 方法 全局预测方法 表达谱分析的最短距离方法 概率方法 马尔可夫随机场方法和信息传递方法等各种方法 34 四 蛋白质相互作用网络中的模体 网络模体 是网络中不同位置重复出现的节点组合的特殊拓扑结构 网络主题 同一类模体组成的更加复杂的结构成为网络主题 网络主题与特定的生物学功能相关 35 生物中的一个有趣现象是直系同源 orthologous 蛋白质可以在物种的进化过程中保留生物功能 因此 这些直系同源蛋白质所组成的模体可以很好地揭示这些蛋白质在特定生物功能中的作用和重要性 36 为揭示蛋白质的进化率和它所在的模体之间的关系 研究者对酿酒酵母的蛋白质相互作用网络进行了分析 分别识别了其中的两节点 三节点和四节点的所组成的模体 认为如果由于进化压力来维持特定模体的话 模体中的组成蛋白应该是进化保守的并且在其他物种中具有直系同源性 37 他们研究了678个蛋白质 且在五个其他物种中都分别具有一个直系同源蛋白 五个物种 拟南芥 果蝇 小鼠 线虫和人 38 分析结果发现 不同的模体中的蛋白质具有不同的保守率 只有不到5 的三节点组成的线性模体其组成蛋白质在五个物种中是完全保守的 而47 的五节点组成的完全连通的模体在五个物种中是完全保守的 这些结果说明直系同源蛋白在酵母蛋白质相互作用网络中不是随机分布的 而是保守模体的基本组成使得这些模体是进化保守的 39 研究还发现 大的模体更倾向于进化保守 这些模体中的蛋白质在其他物种中都具有直接同源蛋白 也就是说 对于同一模体 其包含的节点和连接越多 其组成蛋白质越保守 40 41 第三列 给出了模体在酵母蛋白质中相互作用中的个数 第四列 给出了在五个物种完全保守的模体所占原第三列给出模体个数的比例 第五列 给出了随机分布的直系同源蛋白质中所找到的模体占第三列给出模体个数的比例 第六列 给出的是第四列和第五列之比 如果该值越高说明了该模体越是高度保守的 42 另外 为研究模体中组成蛋白的功能对其进化保守的影响 研究者将模体和生物功能通过模体的组成蛋白质连接起来 分析发现 大的模体具有很明显增加的功能一致性 例如 95 的全连通的五节点模体 其所有的组成蛋白至少共享一个生物功能 相反 10 的两节点模体是功能一致的 43 对应酵母的不同生物功能 研究者在人的基因组中找到了完全进化保守的模体的类型和数目 对于一些特殊的生物功能 像亚细胞位置 蛋白质命运和转录 11个所研究模体中的每一个都是非常保守的 相反 其他一些生物功能 像转运 调控和细胞运输 只有一个或者两个保守的模体 这些结果说明 不同的生物功能不仅和模体的特定拓扑特征有关 而且还和这些模体的不同进化速率有关 44 45 网络中的模体还有助于识别生物网络中的重要功能模块 分析发现 全连接的模体很有可能是属于某个蛋白质复合物的 46 五 蛋白质互作网络分类 蛋白质互作通常可以分为物理互作和遗传互作 物理互作是指蛋白间通过空间构象或化学键彼此发生的结合或化学反应 是蛋白质互作的主要研究对象 而遗传互作则是指在特殊环境下 蛋白或其编码基因受到其他蛋白质或基因影响 常常表现为表型变化之间的相互关系 六 蛋白质互作检测技术 早期的蛋白质互作检测工作主要基于免疫共沉淀技术 co immunoprecipitation 近些年来 一些高通量的检测技术应用于检测蛋白质间的相互作用关系 蛋白质互作 其中较为常用的技术有酵母双杂交 YeastTwoHybrid Y2H 技术和串联亲和纯化 质谱分析 TandemAffinityPurification MassSpectrometry TAP MS 技术 六 蛋白质互作检测技术 1 免疫共沉淀技术2 酵母双杂交技术3 串联亲和纯化 质谱分析技术4 蛋白质互作预测技术5 遗传互作检测技术 七 蛋白质互作数据库 目前 已经有大量蛋白质互作数据信息存储在公共数据库中 提供了大量的蛋白质相互作用信息 其中包括BIND数据库