细胞工程总结.doc

细胞工程总结题名词解释，并简要说明它们间关系：基因组学（Genomics）：是指在研究表型时不是针对单个基因开展工作而是对与其可能存在关系的多个基因组成的群体进行研究的学科。基因工程（Genetic engineering）：是指人为有目的地改变基因以生产产品并服务于人类的技术方法和工程。关系：基因技术理论与实践运用。基因组学（Genomics）：是指在研究表型时不是针对单个基因开展工作而是对与其可能存在关系的多个基因组成的群体进行研究的学科。基因工程（Genetic engineering）：是指人为有目的地改变基因以生产产品并服务于人类的技术方法和工程。关系：基因技术理论与实践运用。蛋白质组学（Proteomics）：是指以基因组所表达的全部蛋白质为研究对象的科学。蛋白质工程（Protein engineering）：是指依据基因原理设计或改变已有蛋白质结构来构建新型蛋白质分子的过程。关系：蛋白质技术理论与实践运用。遗传图：是指通过计算连锁遗传标志间的重组率确定它们距离的作图法（单位厘摩）。物理图：是指确定各遗传标志间实际物理距离的作图法（单位碱基对或Mb）。关系：物理图是连锁图的前提和基础，人类基因组转录图（或基因图）是连锁图雏形。TCR：是指T细胞表面抗原受体，具有高度特异性和多样性。 MHC：是指人类白细胞抗原HLA体系，即主要组织相容性复合体，具有多态性。关系：均为高度复杂的免疫分子体系。悬浮培养（suspension culture）：是指细胞自由地悬浮于培养液内生长增殖的一种培养方法；适用于悬浮培养的生产细胞有杂交瘤与骨髓瘤细胞（SP2/0，NSO），不适用于正常细胞培养贴壁培养（anchorage-dependent culture）：是指让细胞贴附在某种基质上进行增殖的培养方法。主要适用于贴壁细胞或兼性贴壁细胞，如CHO、BHK、Vero等， 流加工艺：是指批式或半连续式增加种子细胞和培养液或排放收集产物使生物反应器内保持一定浓度比例的种子细胞、培养液和产物的细胞规模化培养工艺，类似恒化培养。灌流工艺：是指连续式增加种子细胞和培养液或排放收集产物使生物反应器内保持相对恒定种子细胞、培养液和产物浓度比例的细胞规模化培养工艺，类似恒浊培养。关系：是动物细胞规模化培养的两种常用工艺。基因治疗（gene therapy）：是指把外界的正常基因或治疗基因通过载体转入特定靶细胞，以最终预防或改变特殊疾病状态的治疗方法。细胞治疗（cell therapy）：是指把改造细胞（造血干细胞、成纤维细胞、骨髓肌细胞、肝细胞、神经细胞）转入靶组织，以最终预防或改变特殊疾病状态的治疗方法。 关系：基因的转移可通过物理或化学的方法，也可通过各种病毒或非病毒载体的介导，还可通过改造细胞进行细胞治疗。平行传播：是指病原体在物种间进行的传播方式或发生途径。垂直传播：是指病原体在亲子间进行的传播方式或发生途径。关系：两者均为较特别的传播方式或发生途径。杂交细胞筛选：是指在融合处理后的细胞群体中筛选数量少，生长缓慢，往往受到优势生长的亲本细胞抑制的杂交细胞的过程，常用HAT选择培养液选择出DNA复制应急途径能力强的杂交细胞。HAT选择性培养液：是指利用满足细胞DNA应急合成途径的由次黄嘌呤（H）、氨基嘌呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T）为主要配制成分的选择性培养液。关系：单克隆抗体生产中常用HAT选择性培养液来进行杂交细胞筛选。抗体筛选：是指利用抗体专一性特点，从由脾细胞和癌细胞融合后产生的杂种细胞集落中筛选出只有1-2个能分泌专一性目标抗体的细胞克隆过程，常用酶联免疫吸附法（间接ELISA法）进行筛选。ELlSA（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）法：是一种酶联免疫技术。用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。关系：单克隆抗体生产中常用ELlSA法来进行抗体筛选和效价检测。何谓细胞拆合技术？答：是指从活细胞中分离出细胞器及其细胞组分，在体外一定条件下将不同细胞来源的细胞器及其组分进行重组形成有生物活性的细胞或细胞器的一种细胞工程技术。胞质体：是指通过细胞折合形成的去核细胞，有胞质遗传标志。微核：是指通过细胞折合形成的去细胞质细胞，有核遗传标志。微核体：是指通过细胞折合形成的包含部分核物质的微形细胞。关系：常用来重组构建重组细胞。嵌合体：是指由至少来源于两种不同受精卵的细胞组成的生物体个体。胚胎小体：是指体外培养干细胞时，撤除抑制细胞分化因子，ES能自发形成多细胞结构。关系：为检测ES分化潜能的两种直观发育形体。饲养层培养：SIM小鼠成纤细胞耐硫代鸟嘌呤、乌苯苷亚系STO或小鼠胎儿成纤维细胞（MEF）经丝裂霉素或放射线终止分裂制成饲养层细胞能不断合成和分泌抑制ES细胞分化和促进细胞增殖因子；无饲养层培养：在DMEM等基础培养液中添加重组的白细胞抑制因子（LIF）或利用各种抑制分化因子，制备条件培养基培养ES细胞，维持ES细胞的增殖和未分化状态。 关系：ES培养的两种常用培养方式。PS： BBS液：是指在离体细胞培养时维持细胞渗透压调节细胞酸碱平衡供应细胞各种成分的平衡盐溶液。PBS液：是指由NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4和双蒸馏水配制的后经高压灭菌制成的一种可用于离体细胞培养的平衡盐溶液。关系：PBS是一种BBS。Earle液：是指一种缓冲能力强，5%CO2平衡，由KCl、NaCl、MgSO4、Na2HPO4、葡萄糖、双蒸水和酚红配制的可用于离体细胞培养的平衡盐溶液。Hanks液：是指一种由KCl、NaCl、MgSO4、CaCl2、三蒸馏水和酚红配制，后经高压灭菌制成的三蒸馏水配制的可用于离体细胞培养的平衡盐溶液。关系：两者都是平衡盐溶液。HapMap计划：是指构建不同人群的高密度SNP图谱，确立SNP在人群中的常见分布和传递模式，从而揭示人类作为群体的遗传机制，为发现复杂性疾病的相关易感基因提供基础数据、研究策略和先进技术。HIV：是指人类免疫缺陷病毒。HTLV：是指人类嗜T细胞病毒。关系：早期把HTLV作为HIV。CHO：是指中国仓鼠卵巢细胞系，可生产tPA、EPO、单抗和VIII因子等重组DNA蛋白。HNK：是指仓鼠胚肾细胞系，可生产VIII因子和兽病毒疫苗。关系：均为动物培养工程常用的生产用细胞系。tPA：是指组织型纤溶酶原活化剂，它是由527个氨基酸组成的单链糖蛋白，用于临床溶栓治疗。EPO：是指促红细胞生成素，用于贫血病的临床治疗。关系：为两种重要的动物细胞培养工程制品。PcAb（PcAb，polyclonal antibody）：是指病原微生物和天然抗原，往往含有多种抗原决定簇，刺激免疫系统后，可形成针对不同抗原决定簇混合抗体。MAb：系指由一个B细胞克隆产生的，只识别某一特定抗原决定簇的均质抗体。关系：均由B细胞（或浆细胞）产生。简答题：1、癌发生的主要分子机制？试从细胞分子生物学角度比较白血病与艾滋病？答：（1）大多数学者认为，肿瘤有着多病因（物理、化学或生物因素）和多步骤发生机制；先后提出了肿瘤单克隆发生学说和肿瘤干细胞发生学说。检验点CDK（主体） 细胞增殖 （细胞周期依赖性激酶） + 癌基因（辅助） 细胞数量正 - 负调控手段 - 抑癌基因（辅助） + 细胞凋亡 caspase家族（主体） （半胱氨酸酶家族） （2）白血病分子发生机制： B细胞白血病：MYC基因的活化 EB病毒感染； T细胞白血病：T细胞特异性受体基因增强子附近（7q34） 染色体断裂 染色体重排 基因重排 受累转录因子被过度表达 细胞恶性转化； 急性粒细胞白血病（AML）：相关基因 基因重排 累及CBF- CBF复合物 （核心结合因子，正常造血干细胞发育必需）； 慢性和急性白血病（CML）：ABL融合基因 酪氨酸激酶 引起癌基因活化； 慢性粒单核细胞白血病（CMML）：TEL-PDGFR融合基因。（3）艾滋病分子发生机制： HIV gp120与T4细胞和巨噬细胞表面CD4结合 入侵 潜伏或繁殖 装配使宿主细胞破裂和死亡。 （4）总之，从细胞角度来看，细胞数量分子调控手段的失衡尤其是辅助手段癌基因与抑癌基因互相制约的失衡将导致细胞重大疾病的发生；癌基因的强化表达或抑制弱化均可能导致肿瘤或癌的发生，如T细胞白血病患者就是因为染色体断裂导致基因重排致使转录因子癌基因附近的增强子强化而过度表达造成的；相反，抑癌基因的强化表达或抑制弱化会导致细胞急剧下降，如爱滋病患者的T细胞感染HIV后，细胞凋亡调控机制易感，凋亡发生失常，导致免疫系统崩溃。2、简述生产用动物细胞系的来源及特点？答：3、概述肝癌单抗片段HAB18F(ab)2无血清流加培养工艺技术流程？答：4、从多个方面比较微生物细胞、植物细胞和动物细胞生长特点和培养方式？答：生存、生长和生产特点微生物细胞植物细胞动物细胞细胞壁的有无有无有细胞大小较小（1m以下）较大（10-100m）中等（10-50m）悬浮或贴壁特性悬浮悬浮悬浮或贴壁细胞的粘度大小小中大生长速度与周期长短短较短长培养液专一性程度不强中等较强氧的需求大小小中大对光的需求小大小对生产设备的要求不苛刻苛刻特别苛刻控制参数无菌、低氧无菌、光照无毒、无菌、O2/CO2/N2生产工艺恒化或恒浊培养流加工艺流加或灌流工艺5、简述肝癌疫苗发展历程？答：肝癌疫苗发展历程如下：衣壳衣壳表面抗原（HBsAg）， 核心抗原核心抗原（HBcAg）、e抗原（HBeAg）和核酸 第一代疫苗，血中提取，弱反应，10%不产生反应， 81-82年，美法，85年，中国； 第二代疫苗，在哺乳细胞或CHO细胞表达，81年，法美，91、92年，中国； 第三代疫苗，PreS抗原（重要作用），CHO细胞表达。 6、克隆技术的关键？答：（1）（胚胎或体细胞）克隆技术的关键： 供体和受体的准备发育时间配合好； 鱼类：供体囊胚细胞或成体细胞，受体成熟的卵细胞（人工催产、水中激活）； 两栖类：供体囊胚细胞或成体细胞，受体成熟卵细胞（人工针刺）；鸟类与爬行类：未知哺乳类：供体早期胚胎细胞、胚胎干细胞、体细胞；后用体细胞，如乳腺细胞、粘膜上皮细胞；合子核到64细胞期，0.2%链霉蛋白酶预处理,溶去胚胎胶膜及透明带，分离单个卵裂球； 受体去核卵母细胞、受精卵、2细胞胚胎（第一极体成熟时期去核）； 去卵膜和卵核用玻璃微针（尖为2-4um）； 鱼卵借助第二极体标志，去核； 两栖卵紫外线去核； 哺乳卵借助第一极体； 供体细胞制备： 胚胎或组织机械切割 置细胞分离液（含胰蛋白酶）处理几分钟 单细胞短期培养。 移植（显微操作技术）选择合适微吸管（比细胞核大，比供体细胞小），不能多带细胞质，须30-40min内完成操作过程，温度16-18C； 核移植细胞体外和体内培养。7、简述干细胞分类及特性？ 答： ES细胞（胚胎干细胞）：存在于早期胚胎内细胞团的全能干细胞（全向）； 分化潜能大EG细胞（生殖嵴干细胞）：来自于早期胚胎生殖嵴原始生殖细胞的多能干细胞（多向）；干细胞 分化潜能中分类 EC细胞（生殖瘤干细胞）：来自于自发或诱发的生殖细胞瘤或畸胎瘤中的多能干细胞（多向）；分化潜能小AS细胞（组织干细胞）：来自成体组织的各种多能干细胞（多向或单向）。PS：1细胞空间调控手段：细胞粘连与细胞迁移（细胞运动）细胞质量调控手段：细胞生长与细胞分化细胞数量调控手段：细胞增殖与细胞凋亡2肿瘤单克隆发育学说认为肿瘤是由单个正常细胞经突变向异常细胞转化而形成的，不是多细胞发生的。即癌前细胞群体是同质的，强调多步骤偶发损害。肿瘤干细胞发生学说认为肿瘤是由成瘤干细胞突变向异常细胞转化而形成的，它可以遗传给子代细胞；如果是非成瘤性的大多数细胞进行的癌变不能遗传，强调多步骤累积。后者是前者的校正或补充3动物细胞培养的主要特点：动物细胞对营养要求高 动物细胞对培养环境适应性差 动物细胞培养对环境条件要求严格 动物细胞培养过程易产生污染 各种细胞素长期培养易变异 绝大多数的哺乳类动物细胞具贴壁依赖性生4动物细胞工程产品制备 A、初级分离离心、过滤、吸附 B、纯化色谱法 C、制剂与冷冻干燥 5细胞融合过程分四个阶段： 细胞接触 细胞质膜的融合 细胞质重组 遗传物质的选择6单克隆抗体的制备：一、抗原的纯度二、免疫动物 三、细胞融合： 四、抗体筛选 五、杂交瘤细胞的克隆化：六、单