小鼠的急性毒性试验.docx

五种农药对小鼠的急性毒性试验绪论随着现代农业的飞速发展，农药的应用越来越广泛，在农林作物的病虫防治中,农药一直发挥着巨大作用,尤其是本世纪60-70年代,人们大量使用农药,几乎使粮食产量增长一倍,但随着农药长期的、大量的、不合理的使用,导致了对环境的严重污染并对人体健康产生极大的影响。它们对动、植物和人类的危害越来越严重。一方面它们可以直接进入生物体内引起急性、慢性中毒和畸变，同时还通过径流、排污、挥发等途径进入土壤、大气和水体，引起各种生态环境下生物的死亡，并通过食物链的富集影响人类的食品安全。 目前，因农药使用与管理失控而引发的一系列水域环境污染以及食品安全等问题，已引起政府相关部门和业内学者的广泛重视。当前，随着有机氯农药的禁用，菊酯类和有机磷类等成为我国目前使用较广泛的农药。中华人民共和国农药管理条例指明，农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植物、昆虫生长的化学合成物或者几种物质混合物及其制剂。农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中的农药及其衍生物和杂质的总称。动植物在生长期间、食品在加工和流通中均可受到农药的污染，导致食品中农药残留。相关报道表明，农药利用率一般为10%，约90%的残留在环境中，过多地使用农药，大量未被利用的农药经过降雨、农田渗滤和水田排水等进入水体，同时，还有大量散失的农药挥发到空气中，最后汇入水域，沉降积淀在土壤中，通过农作物吸收和食物链进入人体进行累积，并对人体健康造成危害。目前中国一些食品，如茶叶、大米、肉、蛋等食品中农药残留量常超过规定标准，过多的残留量对人体健康会造成危害。为此，论述农药残留对人体健康的危害效应及其毒理机制和防治措施，以期对防治食品中农药残留对人体健康的危害提供理论依据。在哺乳类实验动物中，由于小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应，又有大量的具有各种不同特点的近交品系，突变品系，封闭群及杂交一代动物，小鼠实验研究资料丰富参考对比性强；更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、重复性高，自然会得到国际认可。本文以百草枯、甲氰菊酯、乐果、草甘膦和敌敌畏五种常用农药为实验材料, 检测了它们对小鼠的单一和联合急性毒性效应，来评价各种农药的的毒性强弱以及对环境的危害。1 材料与方法1.1动物SPF 级昆明小鼠， 雌雄各半，体重1822 g，通过腹腔注射药物给药，给药后密切观察小鼠的反应，观察4小时。给药前禁食不禁水十二小时。小鼠按20g体重给药0.4mL，用药物水溶液灌胃。1.2试验药物甲氰菊酯( 山东大成农药厂生产) 、百草枯( 山东滨农科技有限公司生产) 、乐果( 杭州庆丰农化有限公司生产) 、敌敌畏( 南通江山农药化工有限公司生产) 和草甘膦( 镇江江南化工有限公司生产)1.3实验方法1.3.1预实验分别以组间剂量比值为3.0和1.5进行预试验,通过预试验初步观察到小鼠的毒性反应和死亡情况,分别找出五种农药对小鼠经口染毒的大致致死剂量范围(即死亡率0% 100%的剂量范围) ,确定小鼠的正式试验剂量、组数和组间剂量比值，观察小鼠反应，统计小鼠死亡时间。1.3.2单一农药对小鼠的急性毒性实验通过预实验求出小鼠都不死亡的最高浓度以及全部死亡的最低浓度，在这区间按等对数间距设置7个浓度组，和一个对照组（不含农药），每组做三个重复。试验前小鼠隔夜禁食、不禁水,分别对小鼠以单纯随机方法分配到各剂量组，每组10只小鼠。于第2天上午染毒,各实验组剂量由预试验确定,同时设立对照组(生理盐水) ,给药体积0.2 ml(10 g) - 1体重。给药后观察24h,记录动物中毒表现和死亡情况以及体重变化情况。对死亡动物和试验结束时的存活动物处死解剖。用概率单位法计算PQ的LD50及其95%可信区间。表1 单一急性毒性实验中各农药的浓度设置农药浓度设置（mg/L）甲氰菊酯百草枯乐果敌敌畏草甘膦1.3.3五种农药对小鼠的联合急性毒性实验通过各种单一农药对小鼠的急性毒性实验，计算出各种农药对小鼠的24h的半致死浓度（LC50），以加和等毒性强度方式设置两种农药的联合毒性浓度梯度， 共10种农药组合，每组再分为5 个处理组( 以单一农药24h 半致死浓度LC50作为1 个毒性强度单位) . 每次实验分别取相应的2 种农药的单一对照组和5 个处理组, 每处理组设3 个重复. 给药后观察24h,记录动物中毒表现和死亡情况以及体重变化情况。对死亡动物和试验结束时的存活动物处死解剖。用概率单位法计算PQ的LD50及其95%可信区间。表2 联合急性毒性实验中各组合农药的浓度设置农药组合浓度组合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+乐果甲氰菊酯+敌敌畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+乐果百草枯+敌敌畏百草枯+草甘膦乐果+敌敌畏乐果+草甘膦敌敌畏+草甘膦1.4毒性评价标准表3农药急性经口毒性标准级别经口LD50（mg/Kg）剧毒5001.5观察指标全面观察中毒的发生、发展过程和规律以及中毒特点和毒作用的靶器官。观察的系统包括：1、 中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝；2、 植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；3、 呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰；4、 泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀；5、 皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；6、 眼：眼球突出、结膜充血、角膜混浊；消化系统：腹泻、厌食。2结果与分析2.1单一农药对小鼠急性毒性2.1.1中毒症状2.1.2实验结果与分析表4单一急性毒性实验前后小鼠体重变化农药浓度设置（mg/L）实验前体重（g）实验h后体重（g）甲氰菊酯百草枯乐果敌敌畏草甘膦表5 单一急性毒性实验中小鼠死亡情况农药浓度设置（mg/L）死亡数量死亡概率（x%）甲氰菊酯百草枯乐果敌敌畏草甘膦2.2五种农药对小鼠的联合急性毒性2.2.1中毒症状2.2.2实验结果与分析表6 联合急性毒性实验中小鼠死亡情况农药组合浓度组合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+乐果甲氰菊酯+敌敌畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+乐果百草枯+敌敌畏百草枯+草甘膦乐果+敌敌畏乐果+草甘膦敌敌畏+草甘膦表7 联合急性毒性实验前小鼠体重农药组合小鼠体重（g）浓度组合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+乐果甲氰菊酯+敌敌畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+乐果百草枯+敌敌畏百草枯+草甘膦乐果+敌敌畏乐果+草甘膦敌敌畏+草甘膦表8 联合急性毒性实验后小鼠体重农药组合小鼠体重（g）浓度组合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+乐果甲氰菊酯+敌敌畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+乐果百草枯+敌敌畏百草枯+草甘膦乐果+敌敌畏乐果+草甘膦敌敌畏+草甘膦3.讨论甲氰菊酯属于拟除虫菊酯类农药, 一般认为, 拟除虫菊酯类农药能延迟轴突神经细胞膜钠离子通道的关闭, 影响神经传导和突触传递, 从而导致一系列的中枢神经和末梢神经反应. 而有机磷农药的毒害作用, 主要是抑制体内的胆碱酯酶, 使其丢失活性, 因而失去分解乙酰胆碱的作用, 最终产生一系列的毒害作用草甘膦和百草枯属于除草剂, 草甘膦为广谱性内吸传导型除草剂, 主要抑制植物体内烯醇丙