脐橙黄龙病的发生及防控.doc

脐橙黄龙病的发生和防控摘 要 黄龙病（Citrus Huanglongbing）被认为是世界脐橙生产上的毁灭性病害已超过一个世纪，被人们称为脐橙上的“癌症”，对于该病目前尚无有效的治疗方法,主要以预防为主。关键词 黄龙病；发生；防控The Occur and Control of Citrus HuanglongbingAbstract: Huanglongbing (HLB) has been a destructive disease of citrus around the world for over a century, has been the “cancer” of citrus, has no effective measures to cure it by now, only can prevent its spread. Key words: Huanglongbing; occurring; control脐橙黄龙病（Candidatus Liberobacter asiaticus），又名黄稍病、黄枯病、青果病，系国内外植物检疫对象。目前，脐橙黄龙病广泛分布在亚洲、非洲、大洋洲和南美洲的40多个国家和地区1，在中国几乎所有的脐橙产区均有发生和危害。1发生规律1.1病原脐橙黄龙病的病原为变形菌门（Proteobacteria），-亚纲,韧皮部杆菌属细菌（Candidatus Liberibacter），是革兰氏阴性细菌，属于难培养菌2,分为亚洲种（Ca.L.asiaticus）、非洲种（Ca.L.africanus）和美洲种（Ca.L.americanus）3-6，中国的黄龙病病原菌主要为亚洲种7。病原在寄主筛管细胞和薄壁细胞内分布不均匀，故同一株树各枝梢发病时间也呈现不同。病原只侵染柑桔属、金柑属和枳属植物，其中尤以椪柑、焦柑、福橘、茶枝柑等品种耐病力弱，而橙类、柚类耐病力较强。病原不耐高温，抗势力极差，在48的情况下经过5小时，在60的环境下经过5分钟即会失去活力8。1.2 引进带有病苗木和接穗病原通过带病的接穗和苗木，可以将病原从带病区远距离传播到无病区而感染病菌。1.3 脐橙木虱的自然传播脐橙木虱是黄龙病唯一的自然传播媒介，是以各种脐橙植株为食的有褐色斑点的小昆虫，通过影响植物内养分的流通，最终导致植物死亡。1.4 其他病原可以通过菟丝子（Cuscuta Compstris）、九里香、长春花、木苹果等寄主植物传播，但不能通过汁液和土壤传播。2 症状识别2.1 稍始发病树在树冠中发生若干黄稍，春稍开始发病的，黄稍数量多，出现在树冠顶部或树冠的其他部位；夏秋稍期开始发病的，黄稍数量较少，常出现在树冠顶部；从部分大枝扩展到全株发病，一般经历1-2年，这是黄龙病区别于缺肥、水渍等引起枝叶发黄的一个特点；病枝容易落叶，从病枝萌发的新稍短，叶小、黄化。2.2 叶发病叶片表现为黄化叶片，可分为均匀黄化、斑驳型黄化、缺素型黄化三种类型。均匀黄化 该病发病之初，病树顶部或外围1-2枝或多枝新稍叶片不转绿而呈现均匀的黄化，多出现在出发病树和夏秋稍上，叶片呈均匀的淡黄绿色，且极易脱落。斑驳型黄化 有的叶片转绿后从主、侧脉附近或叶片基部沿叶缘出现黄绿相间的不均匀斑块。斑驳型在春、夏、秋稍病枝上均有，病树进入中后期，叶片均匀黄化，先失去光泽，叶脉凸出，木栓化，硬脆而脱落。缺素型黄化 病叶小，叶片主、侧脉绿色，其脉间叶肉呈淡黄色或黄色，类似缺乏锌、锰、铁等微量元素的症状。上述三种黄化类型中，叶片的斑驳型黄化最具有特征性。此外，病叶较健叶厚，摸之有革质感，在枝上着生较直立，有的叶脉肿突，局部木栓化开裂。2.3 花 感病的脐橙树在次年春天开花较早且特别多，呈“乒乓”花状（似半圆的乒乓球），个别小花枝聚含成团呈“花球”状，花小且畸形，花瓣短小肥厚，呈淡黄色，柱头弯曲外露，会逐渐落花。2.4 果 病树果实小，有的无光泽且畸形（如变长或果形歪斜），果脐歪偏，着色时黄绿不均匀，福橘、椪柑、温州蜜桔等宽皮脐橙常在果蒂附近先着色，其余部分青绿色，成“红鼻子果”9。2.5 根病树极少长新根，老根容易从细根开始腐烂，病树严重时，根系腐烂，直至整株死亡。3 鉴别方法3.1 研究认为，“红鼻子果”和斑驳黄化叶片是最具有特征的症状，可作为形态学鉴定脐橙黄龙病的主要依据10。3.2 指示植物法利用病毒在其他植物上表现症状的特征,作为鉴别病毒种类的标准,这种专用来产生症状的寄主称为指示植物,又称鉴别寄主。指示植物分为2种类型:一种在接种后产生系统的症状,并扩展到未接种部位;另一种只在接种部位产生局部病斑11。Bove12，13和柯冲14分别把脐橙青果病原BLO和脐橙黄龙病原BLO用菟丝子传到长春花上。发病的长春花往往是个别枝条先发病,然后其它枝条才陆续发病,发病枝条叶片起初局部黄化,然后沿叶边缘变黄,中脉附近叶肉成绿色,花变小。这样可证明草地菟丝子所传递的就是脐橙黄龙病的病原BLO,所以可以用菟丝子和长春花检测脐橙黄龙病。这种方法简便易行,成本低,结果准确、可靠。但所需时间长,大量样品的检测比较困难。3.3 电镜诊断法采用电子显微镜,可以直接观察病原颗粒的大小、形态和结构。自1977-1978年间利用电镜与超薄切片技术在脐橙黄龙病病树叶片的筛管细胞内发现病原BLO以来, 在中国,电镜便成为诊断黄龙病的一个重要手段。采用症状明显、老熟的叶片为材料,用侧脉代替中脉和纵切代替横切韧皮部制样等改进方法,可有效地提高电镜对BLO的检出率153.4 直接荧光诊断法据吴世盘等16的报道,用落射式荧光显微镜可以直接检测出局限于韧皮部的由类细菌引起的多种病害,其原理是利用感病植株的坏死组织产生的自发荧光。在感染黄龙病的组织切片中,在韧皮部可看到多个鲜明的黄色或黄绿色荧光团块。这种特异性的荧光,在健康叶片的叶柄韧皮部是没有的,其它由病毒、类病毒、细菌、真菌等病原引起的病叶叶柄韧皮部亦没有这种特异性荧光。用此法检测时,取样必须是完全老熟的黄化叶片。但据李德望等17的报道,感染衰退病的脐橙叶片以及生理性黄化叶片也会出现上述现象。因此认为这种方法可能对黄龙病不具有专化性。3.5 FBA染色法FBA染色液是由0. 1%碱性品红水溶液和0. 1%无水对氨基苯璜酸溶液按1: 1的比例混合,再稀释一定的倍数成为染色工作液。取染病的叶片用自来水和蒸馏水洗净,用徒手切片法横切,切片移至滴有FBA染色工作液的载玻片上染色5-8 min,在光学显微镜下可观察到其外向韧皮部筛管细胞中存在被染成红褐色的病原细菌，多为杆状,有些呈长椭圆型。但是这种检测方法的稳定性不好,对选取材料和切片的厚度要求都很高。3.6 聚合酶链式反应(PCR)近年来,随着生物技术的飞速发展, Bov,et al.发表了黄龙病病原的部分DNA序列18,19。根据这些DNA序列,可以设计出多聚酶链式反应(PCR)的引物,使PCR技术可以用于柑桔黄龙病的研究。由于PCR的高灵敏度,脐橙木虱单虫及小于1 g的植物材料即可用于检测,所以PCR技术检测脐橙黄龙病具有比其他方法更大的优点。而竞争性定量聚合酶链式反应(Q-PCR)克服了普通PCR灵敏但难以定量的缺点,可以确定病原在不同样品中的含量,进行定量分析。所以可以用于不同季节研究黄龙病病原在寄主中转移与分布的变化,虫媒木虱携带病原的变动和病害流行与预测等问题。上世纪90年代法国的Bove研究小组20利用PCR技术检测脐橙黄龙病以来，人们不断改进和优化这一技术，目前已建立和发展了诸如常规PCR、半巢式PCR、巢式PCR、免疫捕获PCR、荧光定量PCR、Long-PCR、LAMP、Cycleave ICAN等一系列检测方法。4 防控方法4.1 实行植物检疫严格实行植物检疫，严禁从病区引苗木、接穗和果实到无病区或保护区。4.2 建立无病苗圃建立无病苗圃，培育无病苗。苗圃应设在无病区或离脐橙园3千米以上，最好有天然条件（山区、林区）阻隔，或用塑料网棚封闭式育苗。在建圃之前，还应铲除附近零星的脐橙类植物或九里香等脐橙木虱的寄主。4.3 及时挖除病树及时挖除病树，坚持每次新稍转绿后全面检查黄龙病株，发现一株挖除一株，不留残桩。对于发病率较低的脐橙园，挖除病株后，可以在当年或次年再植。补植时，定植穴应用石灰消毒，添加容土，施足基肥，大苗移植。对失管发病严重或株发病率在20%以上时，挖除病树，更新果园。4.4 防治传毒媒介脐橙木虱是传播脐橙黄龙病的主要媒介，扑灭脐橙木虱，是防治脐橙黄龙病的重要措施。在脐橙木虱发生高峰期,都要及时喷药防治脐橙木虱。此外,要特别注意几次容易疏忽的用药时期:采果后喷药防治木虱成虫,降低木虱越冬基数；早春萌芽前喷药防治越冬后的木虱成虫,减少木虱传病机；挖除黄龙病树前先喷药杀死木虱再挖病树,以免将带病原木虱驱赶到健康树；冬季脐橙木虱喜欢在九里香上取食繁殖越冬，要清除果园周边的九里香等芸香科植物，及时喷洒杀虫剂来扑灭木虱；做好冬季清园，冬季气温低，越冬期的木虱活动能力差，通过喷药能有效杀死；保护利用天敌，木虱的天敌较多，有多种寄生蜂、瓢虫、草蛉，还有寄生菌，要保护利用天敌以抑制木虱的发生。4.5 实施脐橙健身栽培脐橙是多年生果树，在脐橙黄龙病发生区，除了实行严格的检疫防控措施外，实施健身栽培也可有效降低黄龙病的发病率，既能减轻发病症状，又能延长橘树经济寿命。脐橙健身栽培的措施主要有：重施有机肥，加施叶面肥，提高脐橙树自身素质；开心修剪，矮树栽培，培育健壮树体；合理疏果，均衡结果，保持橘树的持久生产力；提倡深土施肥，诱导根向深土生长，减少肥料流失，提高橘树抗逆性；测土配方施肥，实行以需定肥，提高肥料利用率；合理应用微量元素，促进橘树营养平衡；平地橘园开沟挖渠，防止渍水，以利根系健康生长。215 结论脐橙黄龙病作为脐橙生产上的一种毁灭性的病害，虽然到目前为止仍没有能够有效治愈的措施，但我们可以从各个方面进行防治，控制病原的蔓延，使橘园能够更好地发展下去。参考文献 1 Bov J M. Huanglongbing: a destructive, newly-emerging, century-old disease of citrusJ. Journal of Plant Pathology.2006, 88(1): 7-37.2 Jagoueix S, Bove J M, Garnier M, et al. The phloem-limited bacterium of greening disease of citrus is a member of a subdivision of the proteobacteria J. Journal of Syst Bacteriol.1994, 44 (3): 379-386.3 Teixeira D C, Danet J L, Eveillard S,et al. Citrus huanglongbing in Sao Paulo State, B Teixeira D C,Danet J L,Eveillard S,et al.Citrus huanglongbing in Sao Paulo State,Brazil：PCR detection of theCandidatusLiberibacter species associated with the diseaseJ.Molecular and Cellular Probes.2005,19：173-179.4 Moll, J.N. and M. M. Martin. INSERM .1974, 33:8-965 Bove, J.M., E.C. Calavan, S.P. Capoor, R.E. Cortex and R.E. Schwaz. Proc. 6th conf., 10CV.Univ. Calif. Div. Agr. Sci. Richmond. 1974,12-256 Ke. C., S. Ke, R.J. Wu, H. Yang, and P.T. Hsu. Proc. 12th Conf. 10CV, 10CV Riverside. 1993, 220-2237 田亚南, 柯穗, 柯冲. 应用多聚酶链式反应（PCR）技术检测和定量分析柑桔黄龙病病原J. 植物病理学报.1996, 26（3）：243-250.8 柏劲松.脐橙黄龙病的综合防治技术.农村实用技术，林果园.2006.9 宁红，秦蓁.脐橙病虫害绿色防控技术百问百答.中国农业出版社.2009.10 吴礽超,赵小龙,王明召.脐橙黄龙病检测技术概述J.广西园艺,2007,18（6）:59-60.11 许智宏.植物生物技术M.上海:上海科学技术出版社, 1997.12 GARNIERrM. BOVE JM. The greening organism is a gramnegative bacteriumJ. In:Garnsev SM. TimmerLW. Dodds JA(eds).Proc 9th Conf IntOrg, CitrusViro.l Riverside, 1984: 115-124.13 Garnier, M. and J. M. Bove, Phytopathology .1983，73:1358-136314 柯冲.利用菟丝将黄龙病病原从脐橙传到长春花D.国际脐橙病毒学会第十届会议论文. 1986.15 田亚南,柯穗,柯冲.脐橙黄龙病诊断法的研究进展J